顧敏威，孫振宇，王敏鋒（無錫市第三人民醫(yī)院心胸外科，江蘇 無錫 214041）

化療聯(lián)合生物治療在食管癌的臨床應用

顧敏威，孫振宇，王敏鋒
（無錫市第三人民醫(yī)院心胸外科，江蘇 無錫 214041）

目的研究以DIK聯(lián)合化療治療食管癌的臨床應用價值。方法回顧分析本院以DIK聯(lián)合化療治療的15例食管癌患者的病歷資料，與同期僅化療治療的15例患者進行對照研究。分析兩種治療的總有效率和患者治療前后免疫學指標。結(jié)果聯(lián)合組OR 73%，CBR 87%；化療組OR 53%，CBR 73%，聯(lián)合組臨床有效率明顯高于化療組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；聯(lián)合組治療后外周血CD3+、CD4+、CD4+／CD8+及NK細胞比率較治療前明顯升高，且高于化療組，以上差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；DIK治療后患者血清IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α水平均較治療前顯著上升，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論DIK聯(lián)合化療能提高食管癌患者化療后的免疫學功能指標，提高化療療效，提高患者生存質(zhì)量。

生物治療；DIK；食管癌

食管癌是常見的消化道惡性腫瘤，病死率高達90%，其發(fā)病率位居惡性腫瘤第4。早中期食管癌普遍采用手術(shù)或放療為主，化療為輔的治療模式；晚期則采用放化療配合姑息治療。隨著生物學技術(shù)的進步，生物化療逐漸成為食管癌治療的新動向。臨床研究顯示，化療聯(lián)合生物治療可提高食管癌緩解率，有效延長生存。

本研究采用配對方式回顧性分析15例食管癌術(shù)后化療聯(lián)合DIK細胞治療患者的臨床病理資料，評價化療聯(lián)合DIK細胞治療食管癌患者的臨床療效，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究收集了2009年1月～2011年12月在本院手術(shù)治療并經(jīng)病理確診的食管癌病例30例。其中聯(lián)合組15例：男8例，女7例，中位年齡62歲；化療組15例：男9例，女6例；中位年齡64歲。入選標準：原發(fā)性食管癌；術(shù)前未接受過放化療；卡氏評分＞60分；預計生存期＞6個月；符合化療的指征和基本要求。入選時，7 d以內(nèi)外周血象基本正常，骨髓和心、肝、腎等器官功能基本正常。排除條件：不符合入組條件者；妊娠期、哺乳期婦女；同時患有其他腫瘤的患者。兩組手術(shù)類型相同，手術(shù)時間相近；兩組患者在年齡、性別、發(fā)病部位、病理類型，腫瘤大小、TNM分期和化療周期數(shù)等臨床病理特征方面差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 材料

RPMll640培養(yǎng)基購自JRH公司。人重組GMCSF與IL-4購自R&D公司。AB血清購自無錫市紅十字血站。淋巴細胞分離液購自恒信化學試劑有限公司。PE標記的小鼠抗人CD80、CD83、CD86、CDl4、PerCP標記的小鼠抗人HLA、DR、APC標記的小鼠抗人CDllc抗體購自BD公司。

1.3 方法

1.3.1 DC的體外培養(yǎng) 取外周血100 mL，分離外周血單個核細胞，按3×106/mL數(shù)量重懸于RPMI1640培養(yǎng)基中，37℃孵育90 min，洗去未貼壁細胞，加入含rhGM-CSF、rhIL-4、AB血清的RPMI1640培養(yǎng)基，培養(yǎng)第3 d換液。第5 d收獲未成熟DC，按l:3比例加入自體熱休克凋亡抗原進行負載，24 h后加入IL-lβ、PGE-2、TNF-α誘導成熟。24 h后收獲成熟DC細胞，通過形態(tài)學及特異性表面標記等進行鑒定。

1.3.2 CIK細胞培養(yǎng) 將非貼壁細胞及培養(yǎng)液加入無血清培養(yǎng)基，加入IFN-γ，細胞密度為106/mL,置于37℃，5%CO2孵育箱中培養(yǎng)24 h后加入CD28抗體、rhIL-2、CD3，細胞密度106/mL，2～3 d換液1次，培養(yǎng)至6 d左右補加IL-2。

1.3.3 腫瘤抗原制備 取患者食管腫瘤組織，生理鹽水清洗，研磨，反復凍融3次，離心取上清，過濾除菌后冷凍備用。

1.3.4 將誘導培養(yǎng)8 d后的DC與CIK細胞按1:5的比例混合，加入培養(yǎng)基＋10%小牛血清＋rhIL-2，24 h后換液，2 d換液1次，10 d后收獲。

1.4 免疫方案

聯(lián)合組采用多西紫杉醇+順鉑化療7 d后，行DIK細胞免疫治療，6次/周，1周為1個療程，療程間隔1個月；化療組僅采用多西紫杉醇+順鉑方案化療。隨訪2年，比較兩組患者免疫學治療、臨床療效及生活質(zhì)量情況。

1.5 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料采用“±s”表示，進行t檢驗，計數(shù)資料用率表示，進行x2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床療效

30例食管癌患者術(shù)后均未失訪，聯(lián)合組近期總有效率OR達73%（11/15）；化療組OR為53% （8/15），聯(lián)合組臨床總有效率明顯高于化療組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組臨床療效比較（例，n=15）

2.2 兩組患者治療前后生活質(zhì)量方面的變化

采用卡氏評分評估，結(jié)果聯(lián)合組卡氏評分提高9例，穩(wěn)定5例，下降1例；化療組提高4例，穩(wěn)定6例，下降5例。聯(lián)合組患者生存質(zhì)量好于化療組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.3 免疫功能變化

聯(lián)合組治療后外周血CD3+、CD4+、CD4+／CD8+及NK細胞比率較治療前明顯升高，并明顯高于化療組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。同時DIK治療后患者血清IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α水平均較治療前顯著上升，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表2 兩組治療前后T淋巴細胞亞群比率變化（±s，pg/mL）

表2 兩組治療前后T淋巴細胞亞群比率變化（±s，pg/mL）

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表3 兩組治療前后細胞因子變化（±s，pg/mL）

表3 兩組治療前后細胞因子變化（±s，pg/mL）

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3 討論

食管癌是發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的2%。晚期可出現(xiàn)咽下困難，影響進食和營養(yǎng)，并可有出血、器官轉(zhuǎn)移、神經(jīng)壓迫等癥狀，嚴重威脅患者生命。

順鉑是傳統(tǒng)的抗癌藥物，通過作用于DNA嘌呤和嘧啶的堿基，抑制腫瘤細胞DNA復制，從而達到控制病情的目的。順鉑還具有破壞腫瘤細胞細胞膜的作用[1]。多西紫杉醇可以促進腫瘤細胞內(nèi)的微管聚合，使腫瘤細胞不能發(fā)揮正常的新陳代謝功能；還可使腫瘤細胞停滯于有絲分裂期，阻止其正常的分裂和繁殖，誘導其凋亡[2]。

細胞免疫治療能較徹底地清除殘余的腫瘤細胞，是目前腫瘤綜合治療的熱點之一[3]。CIK細胞因具有增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣、對正常造血影響輕微等特點[4]。將誘導培養(yǎng)的DC細胞與CIK細胞按一定比例混合培養(yǎng)，得到一種新的免疫效應細胞群（DIK細胞）。研究表明，DC和CIK細胞共培養(yǎng)后可促進DC和CIK細胞成熟，而且DIK細胞除了增殖速度明顯高于CIK外，還具有比CIK細胞更強的腫瘤殺傷活性和更廣的殺瘤譜等特點[5]。

筆者曾經(jīng)進行了從自體食管癌組織制備熱休克凋亡細胞抗原負載自體DC制備成具有成熟DC表型的腫瘤疫苗的研究[6]。在此基礎(chǔ)上，應用抗原沖擊的DC刺激自體CIK細胞，聯(lián)合化療應用于術(shù)后食管癌患者，結(jié)果聯(lián)合治療組治療后外周血CD3+、CD4+、CD4+／CD8+及NK細胞比率較治療前明顯升高，且明顯高于化療組；同時DIK治療后患者血清IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α水平均較治療前顯著上升。其總有效率也好于化療組（73%VS 53%）。聯(lián)合組較化療組對化療有更好的耐受，表明自體細胞免疫治療能夠在一定程度上降低化療的副反應，提高患者生存質(zhì)量。但研究樣本少，隨訪時間短，化療聯(lián)合細胞免疫治療對患者生存期、無病生存期的延長及免疫治療療程與療效之間的關(guān)系，還需擴大樣本含量，進一步研究。

[1]張 秀,李 立.多西紫杉醇與順鉑聯(lián)合用于晚期食道癌治療的臨床觀察[J].中國現(xiàn)代藥物應用,2011,5(11):77-78.

[2]劉麗萍,郭 麗,趙翠云，等.周劑量多西紫杉醇聯(lián)合順鉑治療晚期食管癌的臨床觀察[J].腫瘤基礎(chǔ)與臨床,2009,22(1):34-35.

[3]Hontscha C.Clinical trials on CIK cells:First report of the international registry on CIK cells(IRCC)[J].J Cancer Res Clin Oncol,2011,137(2):305-310.

[4]Hui D.A randomized controlled trial of postoperative adjuvant cytokine induced killer cells immunotherapy after radical resection of hepatocellular carcinoma[J].Dig Liver Dis,2009,41(1):36-41．

[5]Manen A.Interactions between dendritic cells and cytokineinduced killer cells lead to an activation of both populations.J Immunother,2001,24(6):502-510．

[6]孫振宇,李成萬，顧敏威，等.熱休克凋亡食管癌細胞負載自體樹突狀細胞制備及其表型特征的分析[J].中華腫瘤防治雜志,2011,18(2):98-101.

（本文編輯 董林）

Application of DIK combined with chemotherapy in the treatment of advanced esophagus cancer

GU Min-wei,SUN Zhen-yu,WANG Min-feng
(Wuxi Third People's Hospital of General Thoracic Surgery Department,Wuxi,Jiangsu 214041,China)

ObjectiveTo study the DIK combined with chemotherapy in the treatment of esophagus cancer.MethodsA retrospective analysis of clinical data of 15 cases of esophagus cancer patients with DIK combined chemotherapy treatment, compared with 15 patients only treated with chemotherapy. We also analyse two kinds of immunological indexes and the total efficiency before and after treatment.ResultsThe combined group OR was 73%, CBR 87%;chemotherapy group OR 53%, CBR 73% (P＜0.05).The combined group after treatment, peripheral blood CD3+, CD4+, CD4+ / CD8+ and NK cell ratio significantly increased (P＜0.05), which is higher than the chemotherapy group (P＜0.05). After DIK treatment, serum IL-2, IL-12, IFN-γ, TNF-α levels were significantly increased compared with those before treatment (P＜0.05).ConclusionDIK combined with chemotherapy can improve the index of immunological function of patients with esophagus cancer after chemotherapy, enhancing the curative effect of chemotherapy, and improve patients’ quality of life.

Biological treatment;DIK;Esophagus Cancer

R735.1

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顧敏威（1975－），男，江蘇無錫人，本科，主治醫(yī)師，主要從事心胸外科臨床工作。