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        犬的部分器官切片的制備

        2013-06-05 15:23:56黃金波
        山東畜牧獸醫(yī) 2013年2期
        關(guān)鍵詞:切片機(jī)蠟塊二甲苯

        黃金波

        (江蘇省新沂市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 221400)

        犬的部分器官切片的制備

        黃金波

        (江蘇省新沂市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 221400)

        犬做為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,目前已被廣泛應(yīng)用于藥物試驗(yàn)、毒理學(xué)、分子生物學(xué)和免疫學(xué),功能與疾病、動(dòng)物模型等領(lǐng)域的研究。因此研究正常犬的肝臟與腎臟的組織結(jié)構(gòu)能夠?yàn)榕R床診治患病犬、為臨床給藥的藥效學(xué)研究提供基本組織學(xué)依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 樣品的采集與固定 新沂地區(qū)健康成年雜種犬1只,以20g/L戊巴比妥鈉麻醉加頸動(dòng)脈放血處死。采取肝、腎組織樣品,經(jīng)10 %中性福爾馬林溶液固定。

        1.2 儀器與試劑 光學(xué)顯微鏡(O1ympus),顯微成像系統(tǒng)(O1ympus)和組織切片機(jī)(LEICA RM2015)。試劑有福爾馬林、無水乙醇、二甲苯、蘇木精和伊紅等。

        1.3 組織切片的制備 (1)脫水與透明:將固定好的犬的肝臟與腎臟投入酒精脫水,經(jīng)過70%、85%、95%I、95%II酒精各1h,100%I、100%II酒精各45min脫水,保證組織中水分脫除干凈。然后入二甲苯I、二甲苯II各7min。(2)透蠟:在透蠟以前,先將蠟放入溫箱內(nèi)融化,溫箱溫度保持約55~60℃,將己經(jīng)透明的組織放入二甲苯和石蠟混合液內(nèi)30min,然后入純蠟1,2杯各透蠟1h。(3)包埋:將溶好的石蠟注入包埋筐內(nèi),用鑷子夾取組織放入筐的適當(dāng)位置,將要切的面朝向筐的底部。輕輕移入冷水中,待石蠟全部變硬即取出,在石蠟表面貼上有標(biāo)本號(hào)碼的標(biāo)簽紙。(4)修切蠟塊:剝出蠟塊,將蠟塊修切成正方形,將組織塊以外的多余石蠟修去,在組織四周留有少許石蠟,蠟塊兩邊必須切成平行的直線,避免切下的蠟條彎曲。(5)切片:用切片機(jī)LEICA RM2015進(jìn)行切片,刀的傾斜角為30度左右;將蠟塊固定在切片機(jī)上,調(diào)整刻度指針到5μm,用右手握轉(zhuǎn)輪把柄,搖轉(zhuǎn)切片機(jī),左手持一毛筆托住蠟帶,隨著切片機(jī)的轉(zhuǎn)動(dòng),輕輕把蠟帶拉開,用毛筆托住蠟帶,挑斷后順序放在紙上。(6)貼片、烤片:用一大燒杯盛溫水,放入42℃恒溫水浴鍋內(nèi),將蠟片攤于水面上,蠟片受熱自然張開浮游在水面上。將載玻片伸入水中把蠟片移至玻片上,撥正位置,傾去多余水滴后放入37℃溫箱中烤干,經(jīng)過10h后取出。(7)染色:將組織切片經(jīng)過二甲苯I、二甲苯II各10min進(jìn)行脫蠟,經(jīng)過100%I、100%II酒精各1min,95%I、95%II酒精各2min,85%酒精1min,入蒸餾水1min。蘇木素液染色液7min,流水沖洗1min,1%鹽酸-乙醇1~3s,流水沖洗1~2min,蒸餾水洗1min,0.5%伊紅液染色2min,蒸餾水稍洗1~2s,80%酒精1~2s,95%酒精I(xiàn)、95%酒精I(xiàn)I各2min,100%I、100%II酒精各5min,二甲苯I5min,二甲苯II10min,中性樹膠封片。(8)拍照:中性樹膠封片后,組織切片用O1ympus顯微鏡觀察并拍照。

        2 結(jié)果

        2.1 肝臟的組織結(jié)構(gòu)

        圖1 肝組織結(jié)構(gòu)×40

        圖2 肝組織結(jié)構(gòu)×400

        肝臟表面被膜極薄,被膜下毛細(xì)血管非常豐富。肝小葉間無結(jié)締組織,小葉間分界不清。肝細(xì)胞呈多邊形,核圓形,肝細(xì)胞排列較緊密,呈不規(guī)則條索狀形成肝細(xì)胞索,向四周延伸,在肝細(xì)胞索(肝板)之間是血竇,肝細(xì)胞索呈彎曲、分支和吻合狀態(tài)(圖1)。肝內(nèi)結(jié)締組織極少,主要分布在門管區(qū)周圍,門管區(qū)內(nèi)含門靜脈、肝動(dòng)脈和膽管分支(圖2)。

        2.2 腎臟的組織結(jié)構(gòu)

        圖3 腎組織結(jié)構(gòu)×100

        圖4 腎組織結(jié)構(gòu)×400

        腎單位是組成腎臟的結(jié)構(gòu)和功能的基本單位,腎單位包括腎小囊、腎小球和腎小管。腎小球是由毛細(xì)血管網(wǎng)組成的,腎小球外有腎小囊的包囊,囊腔與腎小管相通(圖3,圖4)。

        3 討論

        3.1 組織的固定 在組織固定的過程中,應(yīng)將標(biāo)本于離體后,盡快浸泡于裝有足夠量固定液的容器中固定。固定液量應(yīng)為被固定標(biāo)本體積的5~10倍。切取的標(biāo)本置放于容器中固定后,應(yīng)盡快修整繼續(xù)固定。對(duì)未能及時(shí)、充分固定的標(biāo)本用于制做切片。

        3.2 組織的透明與浸蠟 組織塊在二甲苯中透明的時(shí)間不宜過長(zhǎng),組織呈現(xiàn)透明即可,以防組織硬、脆,尤其是肝臟的組織塊在透明的過程中更應(yīng)注意到這點(diǎn)。若組織經(jīng)二甲苯透明不充分,則在之后的浸蠟過程中,蠟不容易侵入組織塊內(nèi)。浸蠟時(shí)間適宜,過短時(shí)浸蠟不充分,組織會(huì)過軟,過長(zhǎng)時(shí)組織硬脆。

        3.3 切片的染色 在組織切片染色過程中,要不斷改變時(shí)間,摸索出蘇木精與伊紅的停留時(shí)間,用顯微鏡控制細(xì)胞核的蘇木素染色質(zhì)量,使細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)顏色鮮明,對(duì)比清晰。

        S852.16+2

        B

        1007-1733(2013)02-0071-01

        2012–12–07)

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