黃金波

（江蘇省新沂市動物衛(wèi)生監(jiān)督所 221400）

犬的部分器官切片的制備

黃金波

（江蘇省新沂市動物衛(wèi)生監(jiān)督所 221400）

犬做為實驗動物，目前已被廣泛應用于藥物試驗、毒理學、分子生物學和免疫學，功能與疾病、動物模型等領域的研究。因此研究正常犬的肝臟與腎臟的組織結構能夠為臨床診治患病犬、為臨床給藥的藥效學研究提供基本組織學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品的采集與固定 新沂地區(qū)健康成年雜種犬1只，以20g/L戊巴比妥鈉麻醉加頸動脈放血處死。采取肝、腎組織樣品，經(jīng)10 %中性福爾馬林溶液固定。

1.2 儀器與試劑 光學顯微鏡(O1ympus)，顯微成像系統(tǒng)(O1ympus)和組織切片機(LEICA RM2015)。試劑有福爾馬林、無水乙醇、二甲苯、蘇木精和伊紅等。

1.3 組織切片的制備 （1）脫水與透明：將固定好的犬的肝臟與腎臟投入酒精脫水，經(jīng)過70%、85%、95%I、95%II酒精各1h，100%I、100%II酒精各45min脫水，保證組織中水分脫除干凈。然后入二甲苯I、二甲苯II各7min。（2）透蠟：在透蠟以前，先將蠟放入溫箱內融化，溫箱溫度保持約55～60℃，將己經(jīng)透明的組織放入二甲苯和石蠟混合液內30min，然后入純蠟1，2杯各透蠟1h。（3）包埋：將溶好的石蠟注入包埋筐內，用鑷子夾取組織放入筐的適當位置，將要切的面朝向筐的底部。輕輕移入冷水中，待石蠟全部變硬即取出，在石蠟表面貼上有標本號碼的標簽紙。（4）修切蠟塊：剝出蠟塊，將蠟塊修切成正方形，將組織塊以外的多余石蠟修去，在組織四周留有少許石蠟，蠟塊兩邊必須切成平行的直線，避免切下的蠟條彎曲。（5）切片：用切片機LEICA RM2015進行切片，刀的傾斜角為30度左右；將蠟塊固定在切片機上，調整刻度指針到5μm，用右手握轉輪把柄，搖轉切片機，左手持一毛筆托住蠟帶，隨著切片機的轉動，輕輕把蠟帶拉開，用毛筆托住蠟帶，挑斷后順序放在紙上。（6）貼片、烤片：用一大燒杯盛溫水，放入42℃恒溫水浴鍋內，將蠟片攤于水面上，蠟片受熱自然張開浮游在水面上。將載玻片伸入水中把蠟片移至玻片上，撥正位置，傾去多余水滴后放入37℃溫箱中烤干，經(jīng)過10h后取出。（7）染色：將組織切片經(jīng)過二甲苯I、二甲苯II各10min進行脫蠟，經(jīng)過100%I、100%II酒精各1min，95%I、95%II酒精各2min，85%酒精1min，入蒸餾水1min。蘇木素液染色液7min，流水沖洗1min，1%鹽酸-乙醇1～3s，流水沖洗1～2min，蒸餾水洗1min，0.5%伊紅液染色2min，蒸餾水稍洗1～2s，80%酒精1～2s，95%酒精I、95%酒精II各2min，100%I、100%II酒精各5min，二甲苯I5min，二甲苯II10min，中性樹膠封片。（8）拍照：中性樹膠封片后，組織切片用O1ympus顯微鏡觀察并拍照。

2 結果

2.1 肝臟的組織結構

圖1 肝組織結構×40

圖2 肝組織結構×400

肝臟表面被膜極薄，被膜下毛細血管非常豐富。肝小葉間無結締組織，小葉間分界不清。肝細胞呈多邊形，核圓形，肝細胞排列較緊密，呈不規(guī)則條索狀形成肝細胞索，向四周延伸，在肝細胞索(肝板)之間是血竇，肝細胞索呈彎曲、分支和吻合狀態(tài)(圖1)。肝內結締組織極少，主要分布在門管區(qū)周圍，門管區(qū)內含門靜脈、肝動脈和膽管分支(圖2)。

2.2 腎臟的組織結構

圖3 腎組織結構×100

圖4 腎組織結構×400

腎單位是組成腎臟的結構和功能的基本單位，腎單位包括腎小囊、腎小球和腎小管。腎小球是由毛細血管網(wǎng)組成的，腎小球外有腎小囊的包囊，囊腔與腎小管相通(圖3，圖4)。

3 討論

3.1 組織的固定 在組織固定的過程中，應將標本于離體后，盡快浸泡于裝有足夠量固定液的容器中固定。固定液量應為被固定標本體積的5～10倍。切取的標本置放于容器中固定后，應盡快修整繼續(xù)固定。對未能及時、充分固定的標本用于制做切片。

3.2 組織的透明與浸蠟 組織塊在二甲苯中透明的時間不宜過長，組織呈現(xiàn)透明即可，以防組織硬、脆，尤其是肝臟的組織塊在透明的過程中更應注意到這點。若組織經(jīng)二甲苯透明不充分，則在之后的浸蠟過程中，蠟不容易侵入組織塊內。浸蠟時間適宜，過短時浸蠟不充分，組織會過軟，過長時組織硬脆。

3.3 切片的染色 在組織切片染色過程中，要不斷改變時間，摸索出蘇木精與伊紅的停留時間，用顯微鏡控制細胞核的蘇木素染色質量，使細胞核和細胞質顏色鮮明，對比清晰。

S852.16+2

B

1007-1733(2013)02-0071-01

2012–12–07）