劉學(xué)文楊衛(wèi)彬荊志偉

（1首都醫(yī)科大學(xué)潞河教學(xué)醫(yī)院中醫(yī)科，北京，101100；2中國中醫(yī)科學(xué)院，北京，100700）

益腎化濁顆粒對腺嘌呤飼喂法所致慢性腎衰大鼠血清中Bun，Crea含量的影響

劉學(xué)文1楊衛(wèi)彬2荊志偉2

（1首都醫(yī)科大學(xué)潞河教學(xué)醫(yī)院中醫(yī)科，北京，101100；2中國中醫(yī)科學(xué)院，北京，100700）

目的：探討益腎化濁顆粒對腺嘌呤飼喂法致慢性腎衰大鼠的治療作用及作用機(jī)制。方法：采用0.75%腺嘌呤飼喂法復(fù)制大鼠慢性腎衰模型，動物隨機(jī)分成6組，即空白對照組、模型對照組、尿毒清顆粒對照組和益腎化濁顆粒大、中、小劑量組，連續(xù)給藥30 d后，計(jì)算腎臟指數(shù)，ELISA法測定血清中尿素氮（Blood Urea Nitrogen，Bun）和肌酐（Creatinine，Crea）含量，HE染色觀察腎臟組織病理學(xué)變化。結(jié)果：與模型對照組大鼠比較，各給藥組大鼠腎臟臟器指數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各給藥組大鼠血清中Bun和Crea含量均顯著降低，益腎化濁顆粒大劑量組大鼠腎小管擴(kuò)張程度較輕（P＜0.05）。結(jié)論：益腎化濁顆粒可使腺嘌呤飼喂法所致慢性腎衰大鼠血清中Bun、Crea含量下降，改善腎臟病理變化。

益腎化濁顆粒；慢性腎功能衰竭；尿素氮；肌酐

1 材料

1.1 動物 SD大鼠100只，雄性，體重110～130 g，SPF級，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，許可證號SCXK（京）2002-0003。

1.2 藥物 益腎化濁顆粒（藥粉），由上海申宏益生物科技有限公司提供，每1 g藥粉中含生藥4.255 g，批號20050905；尿毒清顆粒，由廣州康臣藥業(yè)有限公司提供，批準(zhǔn)文號國藥準(zhǔn)字Z10970122，批號20051204，大鼠灌服5 g藥粉／kg，臨用時用去離子水配成所需濃度。

1.3 試劑 腺嘌呤，0.75%腺嘌呤飼料，尿素氮（Bun）試劑，肌酐（Crea）試劑。

1.4 儀器 Lisa 300型生化分析儀，法國生產(chǎn)。

2 方法

2.1 動物模型制作、分組及處理 取大鼠100只，20只做為正常對照組，自由飲水，食用常規(guī)飼料，其余用于制備模型，自由飲水，食用含有0.75%腺嘌呤飼料［2］，并記錄尿量及日?；顒訝顩r。4周后，測定血清Bun、Crea和腎臟臟器指數(shù)以驗(yàn)證造模是否成功，并根據(jù)測定值調(diào)整5組模型大鼠，使各組指標(biāo)均衡無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，5組分別為模型對照組、尿毒清顆粒對照組和益腎化濁顆粒大、中、小劑量組。益腎化濁顆粒大、中、小劑量組灌服劑量分別為11.27 g生藥／kg、5.64 g生藥／kg和2.82 g生藥／kg，尿毒清對照組灌服尿毒清顆粒5 g藥粉／kg，正常對照組和模型對照組灌服去離子水，連續(xù)灌胃30 d。

2.2 體重及飲水量檢測 給藥期間每天記錄大鼠的體重和飲水量的變化。

2.3 血清Bun和Crea含量檢測 給藥30 d后，取血，離心，分離血清，采用ELISA法測定大鼠血清中Bun和Crea的含量。

2.4 臟器系數(shù)計(jì)算 給藥30 d后，4%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，稱取體重，取血后處死，取大鼠腎臟稱重，并計(jì)算臟器指數(shù)（腎臟器指數(shù)＝濕質(zhì)量／體質(zhì)量× 100%）。

2.5 病理組織學(xué)檢查 將上述取血后處死的大鼠臟器和組織，用中性福爾馬林溶液固定、石蠟包埋、切片、HE染色，光鏡檢查其組織結(jié)構(gòu)的變化。以腎小管管腔短徑≥60μm腎小管的個數(shù)作為分級標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行半定量分級。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件10.0版進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，等級資料用Radit分析。

3 結(jié)果

3.1 對慢性腎功能衰竭大鼠體重的影響 進(jìn)食腺嘌呤期間，大鼠體重增長較慢，體毛欠光澤，不順滑，脫毛，精神不振，尿量增多。改為正常鼠料飼養(yǎng)后，大鼠體重增長加快。給藥前，模型組和各給藥組與正常對照組比較體重差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），模型組和各給藥組之間體重差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；給藥后，各給藥組與模型組比較，體重差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果見表1。

表1 益腎化濁顆粒對慢性腎功能衰竭大鼠體重的影響（n＝12，單位：g）

表2 益腎化濁顆粒對慢性腎功能衰竭大鼠飲水量的影響（n＝12，單位：mL／100g體重）

表3 益腎化濁顆粒對慢性腎功能衰竭大鼠血清生化學(xué)指標(biāo)的影響（n＝12）

3.2 對慢性腎功能衰竭大鼠飲水量的影響 給藥前，各模型組飲水量比正常對照組增多，差異顯著，給藥第2周，小劑量組飲水量減少，與正常對照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），給藥第3周，各給藥組飲水量均少于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果見表2。

3.3 對慢性腎功能衰竭大鼠血清Bun和Crea的影響益腎化濁顆粒各劑量組大鼠血清中Bun和Crea值均顯著低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01），并顯著低于給藥前大鼠血清中Bun和Crea值。結(jié)果見表3。

3.4 對慢性腎功能衰竭大鼠腎臟臟器指數(shù)的影響與模型對照組大鼠比較，各給藥組大鼠的腎臟臟器系數(shù)差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表4。

表4 益腎化濁顆粒對慢性腎功能衰竭大鼠腎臟的影響（n＝12）

3.5 對慢性腎功能衰竭大鼠腎臟的影響 （腎小管擴(kuò)張分級評分和腎小球徑長）飼喂0.75%腺嘌呤4周后，取16只大鼠進(jìn)行尸解檢查，正常對照組大鼠腎臟蠶豆?fàn)?，色暗紅，質(zhì)軟，切面皮質(zhì)暗紅，髓質(zhì)淺紅；造模組大鼠腎臟腫脹，色灰白，質(zhì)硬，切面灰白。給藥30 d，處死各組大鼠，空白對照組大鼠腎臟無明顯變化，模型對照組大鼠腎臟未見明顯恢復(fù)，各給藥組大鼠腎臟表面均出現(xiàn)不同程度紅、白相兼顆粒狀紋理，切面可見藥物結(jié)晶沉積；病理切片鏡檢觀察到模型對照組大鼠腎臟有黃綠色結(jié)晶沉積，形成異物性肉芽腫，腎小管擴(kuò)張，腎間質(zhì)增生，出現(xiàn)蛋白管型。除空白對照組未見病理變化外，各給藥組大鼠腎臟病變類型與模型對照組大鼠相同，但病變程度不同。與模型對照組比較，益腎化濁顆粒大劑量組大鼠腎小管擴(kuò)張程度較輕（P＜0.05）。

4 討論

CRF是指各種原因造成的慢性進(jìn)行性腎實(shí)質(zhì)損害，致使腎臟不能維持基本功能，從而呈現(xiàn)氮質(zhì)血癥、代謝紊亂和各系統(tǒng)受累等一系列臨床癥狀的綜合征［1］。腺嘌呤在體內(nèi)可導(dǎo)致腎單位大量喪失并造成腎功能衰竭，其特征與人類腎功能衰竭相似［3-5］，故本研究采用0.75%腺嘌呤飼喂法復(fù)制大鼠慢性腎衰模型。

CRF屬于中醫(yī)“水腫”“癃閉”“關(guān)格”等范疇，在CRF早、中期階段運(yùn)用中醫(yī)藥綜合療法治療，可改善腎功能，有效地延緩CRF病程進(jìn)展［6-8］。中醫(yī)腎病專家時振聲教授認(rèn)為［9-12］，腎主水，腎臟氣陰兩虛，氣化不行，體內(nèi)水濕不能及時排出，而致血行不暢，出現(xiàn)瘀血、濕阻、水停等病理產(chǎn)物蘊(yùn)積，加之陰虛燥熱，進(jìn)而化生熱毒、濕毒、瘀毒、濁毒等毒邪，毒邪久而入絡(luò)，損傷腎臟?，F(xiàn)代研究也發(fā)現(xiàn)，氣陰兩虛為CRF重要證型，CRF后期又有瘀血因素等實(shí)邪存在，實(shí)邪又可加重CRF進(jìn)展，正虛邪實(shí)兼夾出現(xiàn)是CRF臨床特征［13-15］。結(jié)合時振聲教授臨床經(jīng)驗(yàn)和現(xiàn)代中醫(yī)藥研究成果，確立了益氣養(yǎng)陰、活血化濁治法，以及益腎化濁顆粒組方。其組方為：太子參、黃芪、生地黃、山藥、山茱萸、茯苓、澤瀉、丹參、大黃、砂仁。方中太子參補(bǔ)益肺脾之氣，兼以生津養(yǎng)陰為君藥；黃芪補(bǔ)脾肺之氣，生地黃養(yǎng)陰生津，二者輔助太子參為臣藥；山藥益氣養(yǎng)陰，山茱萸補(bǔ)益肝腎，茯苓配山藥健脾利水滲濕濁，澤瀉配生地黃泄熱利水滲濕濁，丹參養(yǎng)血活血祛瘀，大黃活血祛瘀，清泄?jié)駸?，砂仁醒脾和胃，防養(yǎng)陰藥滋膩礙胃，且行氣化濕濁，諸藥合用，益氣養(yǎng)陰、活血化濁，驅(qū)邪兼以扶正，驅(qū)邪不傷正，補(bǔ)虛不留邪。

血尿素氮、肌肝能夠反映慢性腎衰進(jìn)展，是慢性腎功能衰竭分期的重要依據(jù)之一，也是考察腎小球?yàn)V過功能的臨床常用指標(biāo)［16-18］，與腎動脈內(nèi)徑、葉間動脈收縮期最大血流速度、舒張末期最低血流速度呈負(fù)相關(guān)，與阻力指數(shù)正相關(guān)［19］，相當(dāng)于中醫(yī)所指的濕濁瘀毒。益腎化濁顆粒有利于腎小球?yàn)V出血中Bun和Crea，具有保護(hù)腎小球?yàn)V過率（GFR）的作用。

與模型對照組比較，益腎化濁顆粒可以改善因飼喂0.75%腺嘌呤飼料所引起的大鼠營養(yǎng)不良，使其體重增長速度加快，一般狀態(tài)和精神狀況改善。由于腎小管功能病變引起的動物飲水量較多的狀況，給藥組動物也有所改善，飲水量較少。

綜上所述，益腎化濁顆粒具有保護(hù)腎臟腎小管和腎小球的藥理作用，能夠減緩慢性腎功能衰竭引起的腎臟實(shí)質(zhì)性病變惡化過程，降低血中Bun和Crea的含量，改善慢性腎功能衰竭引起的氮質(zhì)血癥，具有益氣養(yǎng)陰、活血化濁之效。

［1］復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院編.實(shí)用內(nèi)科學(xué)［M］.13版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：2187-2203.

［2］王暴魁.補(bǔ)脾腎瀉濕濁解毒活血法對實(shí)驗(yàn)性腎衰大鼠的病理學(xué)影響［J］.中國醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2001，16（5）：28-30.

［3］Isao Matsui l，TakayukiHamanol，SatoshiMikamil，etal.Fully phosphoryl-ated fetuin-A forms amineral complex in the serum of rats with adenine -induced renal failure［J］.Kidney International，2009，75（9）：915-928.

［4］劉洪彥，楊愛華，劉雪梅，等.腺嘌呤致大鼠慢性腎功能衰竭模型研究［J］.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2011，15（12）：2014-2017.

［5］肖煒.慢性腎衰動物模型方法學(xué)研究現(xiàn)狀［J］.中國試驗(yàn)動物雜志，2006，12（3）：176-179.

［6］屈超超，陳爽白.慢性腎功能衰竭的中醫(yī)現(xiàn)代研究［J］.長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，26（2）：198-199.

［7］朱凌波，薛莉，李靖.倍生沖劑聯(lián)合中藥灌腸治療早中期慢性腎衰竭的臨床觀察［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012；28（4）：324-326.

［8］郭立芳，王鳳麗，王月華，等.益氣通絡(luò)解毒降濁方結(jié)合西醫(yī)基礎(chǔ)療法治療早、中期慢性腎功能衰竭療效觀察［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012；32（8）：1042-1045.

［9］倪青.中醫(yī)治療慢性腎功能衰竭的思路與方法—時振聲臨床經(jīng)驗(yàn)運(yùn)用［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2001，28（12）：712-713.

［10］傅文錄.時振聲治療腎病方劑學(xué)應(yīng)用的特色［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2004，3（8）：624-625.

［11］劉宏偉，王國棟，張國強(qiáng).醫(yī)壇巨匠時振聲教授學(xué)術(shù)貢獻(xiàn)擷萃［J］.中醫(yī)藥學(xué)刊，2001，19（6）：534-535.

［12］郭教禮，王國柱.著名中醫(yī)學(xué)家時振聲學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)擷要［J］.山西中醫(yī)，2005，21（4）：8-9.

［13］孫升云，楊欽河，肖達(dá)民，等.慢性腎功能衰竭中醫(yī)證候?qū)W的臨床研究［J］.新中醫(yī)，2005，37（5）：30-31.

［14］張勐，劉曉敏.l80例慢性腎功能衰竭患者虛證證候分布規(guī)律調(diào)查［J］.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，3（7）：417-418.

［15］徐魯謙.中西醫(yī)結(jié)合治療氣陰兩虛型慢性腎功能衰竭38例［J］.國醫(yī)論壇，2009，24（4）：33-34.

［16］鄒川，吳禹池，林啟展，等.中藥結(jié)腸洗液聯(lián)合基礎(chǔ)療法對慢性腎功能衰竭患者BUN、SCr、UA及IS的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，32（9）：1192-1195.

［17］郭兆安，張愛真，徐炳俠，等.祛毒顆粒治療慢性腎衰竭的多中心臨床研究［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2011，18（4）：197-200.

［18］龔德華，徐斌，朱冬冬，等.復(fù)方α酮酸片聯(lián)合低蛋白飲食延緩慢性腎功能衰竭進(jìn)展的臨床隨機(jī)對照研究［J］.腎臟病與透析腎移植雜志，2012，21（5）：421-428.

［19］孫脊峰，趙柏山，焦凱，等.前列腺素E1對糖尿病腎病患者腎動脈血流動力學(xué)的影響［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，27（6）：342-644.

（2013-05-21收稿）

Effects of Yishenhuazhuo granules on Bun and Crea in Serum of Adenine Feeding Method Induced Chronic Renal Failure Rats

Liu Xuewen1，Yang Weibin2，Jing Zhiwei2
（1 Department of Chinese Medicine，Luhe Teaching Hospital of the Capital Medical University，Beijing 101100，China；2 China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China）

Objective：To investigate the effect and mechanism of Yishenhuazhuo granules on Adenine feedingmethod induced chronic renal failure Rats.Methods：The ratswere fed with 0.75%adenine tomake themodels of chronic renal failure，then they were randomly divided into six groups，including blank control group，model control group，Niaoduqing granules control group and Yishenhuazhuo granuleswith large，medium and small dosage groups.After administered continuously for 30 days，kidney index were calculated，Bun and Crea content in serum were determined by using ELISAmethod，and renal pathological changeswere observed by using HE staining.Results：Compared withmodel controlgroup of drug-treated rats，kidney index differenceswere not statistically significant，serum Bun and Crea were significantly reduced in each administration group，and tubular dilatation in Yishenhuazhuo granules large dosage group was slight（P＜0.05）.Conclusion：Yishenhuazhuo granules could reduce Bun and Crea content in serum in Adenine feeding method induced chronic renal failure rats，and improve renal pathological changes.

Yishenhuazhuo granules；Chronic renal failure；Blood urea nitrogen；Creatinine

10.3969／j.issn.1673-7202.2013.12.030慢性腎功能衰竭（Chronic Renal Failure，CRF）是指各種慢性腎臟疾病所致進(jìn)行性腎功能損耗所出現(xiàn)的一系列癥狀或代謝紊亂組成的臨床綜合征，我國每年每百萬人口中約有300人死于本?。?］。益氣養(yǎng)陰、活血化濁是中醫(yī)治療該病的主要治法之一。我們在本實(shí)驗(yàn)以0.75%腺嘌呤飼喂法致大鼠慢性腎衰為動物模型，觀察益腎化濁顆粒對其治療作用，探討其作用機(jī)制。

劉學(xué)文，醫(yī)學(xué)博士，博士后，主治醫(yī)師，主要從事中醫(yī)老年病防治研究，E-mail：tjtcmliu＠126.com

荊志偉，中國中醫(yī)科學(xué)院副研究員，主要從事中醫(yī)內(nèi)科研究，E-mail：drjzw＠163.com