李滿超何志明周祎石曉梅柴涵靜方群*

（1.中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，廣東廣州 510655；

2.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科胎兒醫(yī)學(xué)中心，廣東廣州 510080）

骨橋蛋白在體重不一致性雙胎胎盤中的表達(dá)

李滿超1何志明2周祎2石曉梅2柴涵靜2方群2*

（1.中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，廣東廣州 510655；

2.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科胎兒醫(yī)學(xué)中心，廣東廣州 510080）

目的探討骨橋蛋白在體重不一致性雙胎胎盤中的表達(dá)變化。方法用W estern blotting及實時熒光定量PCR檢測雙胎盤胎盤中的骨橋蛋白的表達(dá)。結(jié)果體重不一致DCDA雙胎的小胎與大胎胎盤比較，Western blotting結(jié)果顯示，體重不一致DCDA雙胎的小胎與大胎胎盤比較，胎盤中蛋白表達(dá)明顯減少（0.31±0.09 VS 0.62±0.08，t＝－4.182，P＝0.001），體重一致DCDA雙胎胎盤間OPN蛋白表達(dá)無明顯差異（0.62±0.16 VS 0.68±0.13，t＝－1.687，P＝0.724）；實時熒光定量PCR結(jié)果顯示，體重不一致DCDA雙胎的小胎與大胎胎盤比較，胎盤中OPnm RNA表達(dá)明顯減少（0.61±0.28 V S 1.01±0.12，t＝3.087，P＝0.014），體重一致DCDA雙胎胎盤間OPnm RNA表達(dá)無明顯差異（0.98± 0.18 V S 1.02±0.11，t＝1.884，P＝0.464）。Western blotting顯示體重不一致MCDA的小胎與大胎比較，OPN蛋白表達(dá)顯著下降，（0.24±0.06 VS 0.73±0.18，t＝5.687，P＜0.001），體重一致MCDA雙胎胎盤間OPN蛋白表達(dá)無明顯差異（0.48±0.12 VS 0.42±0.15，t＝－1.687，P＝0.586）；實時熒光定量PCR結(jié)果顯示，體重不一致MCDA的小胎與大胎胎盤比較，OPnm RNA表達(dá)顯著下降，（0.46± 0.16 VS 1.01±0.09，t＝5.128，P＜0.001），生長一致MCDA雙胎胎盤間OPnm RNA表達(dá)無明顯差異（0.89±0.15 VS 0.95±0.22，t＝0.697，P＝0.564）。結(jié)論體重不一致性雙胎胎盤中的骨橋蛋白表達(dá)有顯著生差異，小胎胎盤骨橋蛋白的表達(dá)量明顯減少。

雙胎；骨橋蛋白；生長不一致；胎盤份額

隨著輔助生殖技術(shù)的發(fā)展，雙胎妊娠的發(fā)生率逐年升高。雙胎妊娠按絨毛膜性質(zhì)分為單絨毛膜（monochorionic dia mniotic，MCDA）雙胎和雙絨毛膜（dichorionic dia mniotic，DCDA）雙胎，大多數(shù)DCDA雙胎各自的胎盤獨立，可以直接判斷各自胎盤的大??；MCDA雙胎共用一個胎盤，兩胎胎盤間普遍存在著血管吻合，通過2個胎兒臍帶發(fā)出的動靜脈分支判斷各自所占的胎盤份額，MCDA和DCDA雙胎妊娠都可并發(fā)雙胎體重不一致。雙胎妊娠的母體環(huán)境及宮內(nèi)環(huán)境相似，但雙胎的表型可以不同，其中雙胎的出生體重差值超過20%被定義為雙胎體重不一致（discordanTTwin），雙胎體重不一致極有可能是各自胎盤功能差異所致。利用雙胎胎盤間互相對照進(jìn)行研究，可以最大限度地控制母體因素、遺傳因素及環(huán)境因素對胎兒發(fā)育的影響，單胎妊娠合并FGR受到母體、胎兒、胎盤因素這些因素的共同影響，僅部分單胎妊娠FGR是由胎盤功能障礙導(dǎo)致的。因此雙胎妊娠是研究胎盤發(fā)育的天然對照模型，有利于探索胎盤發(fā)育差異對胎兒體重的影響。體重不一致雙胎在臨床產(chǎn)科很常見，一般隨著雙胎間體重差異增加，圍生期死亡率也相應(yīng)增加。體重不一致雙胎的病因?qū)W，尤其是胎盤發(fā)育大小與雙胎出生體重的關(guān)系是目前雙胎研究的熱點［1，2］。

骨橋蛋白（osteopontin，OPN）參與體內(nèi)多種生理活動，OPN及其受體整合素β3是子宮、胎盤微環(huán)境的重要組成部分。近年研究顯示OPN在胚胎植入、著床過程中發(fā)揮重作用，OPN通過RGD序列與整合素β3相互識別并結(jié)合，從而促進(jìn)胚泡和子宮內(nèi)膜細(xì)胞間的相互作用；定位在合體滋養(yǎng)層和細(xì)胞滋養(yǎng)層的整合素β3和OPN，可以促進(jìn)細(xì)胞間的黏附、誘導(dǎo)細(xì)胞趨化使滋養(yǎng)層遷徙，從而調(diào)節(jié)早期妊娠時胚胎的著床和胎盤形成［3］。OPN在人類胎盤也是主要表達(dá)于具有侵襲能力的絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞［4，5］，孕酮可以上調(diào)滋養(yǎng)細(xì)胞中OPN的表達(dá)［6］。說明OPN對胚胎植入過程中伴隨的胎盤形成可能起一定作用。因此本文擬研究骨橋蛋白在雙胎胎盤中的表達(dá)。

1 資料與方法

1.1 雙胎妊娠胎盤組織收集

1.1.1 雙胎胎盤組織基本資料 收集雙胎妊娠胎盤組織共46例，分娩孕周29.2～38.6周，平均36.4周，孕婦年齡23～38歲，平均29.6歲。胎盤娩出后在臍帶附著點對應(yīng)的母體面剪取胎盤組織，在預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液中漂洗3次，去除血液。一部分組織在液氮中保存2～24小時后，轉(zhuǎn)移至－80℃冰箱保存。采集胎盤組織前先檢查兩胎盤間胎膜分層情況，MCDA胎盤間羊膜分2層，DCDA胎盤間胎膜分4層，包括2層絨毛膜和2層絨毛膜，如果DCDA胎盤間絨毛膜融合，胎膜分為3層，包括2層羊膜和1層絨毛膜。MCDA雙胎22例，分娩孕周32.6～38.5周，平均35.4周，孕婦年齡21～42歲，平均31.4歲，其中體重不一致MCDA雙胎12例，分娩孕周29.2～34.1周，平均29.5周，孕婦年齡21～42歲，平均29.1歲；體重一致MCDA雙胎10例，分娩孕周33.2～38.6周，平均35.5周，孕婦年齡26～37歲，平均29.8歲。DCDA雙胎24例，分娩孕周32.6～38.5周，平均35.4周，孕婦年齡24～37歲，平均29.5歲，其中體重不一致DCDA雙胎10例，分娩孕周32.3～37.1周，平均36.1周，孕婦年齡24～34歲，平均29.4歲；體重一致DCDA雙胎14例，分娩孕周30.6～38.6周，平均37.2周，孕婦年齡25～37歲，平均29.6歲。

1.1.2 絨毛膜性質(zhì)診斷標(biāo)準(zhǔn) 單絨毛膜：妊娠5～7周超聲波示1個孕囊，妊娠11～13＋6周超聲波檢查兩胎間胎膜呈“T”征；雙絨毛膜：妊娠5～7周超聲波示2個孕囊，妊娠11～13＋6周超聲波檢查兩胎間胎膜呈“λ”征。

1.1.3 雙胎體重不一致診斷標(biāo)準(zhǔn) 雙胎出生體重差≥20%。

1.2 Western Blotting檢測胎盤組織OPN蛋白表達(dá)

1.2.1 胎盤組織總蛋白提取 在每1 ml冷Lysis Buffer加入10μl磷酸酶抑制劑、1μl蛋白酶抑制劑和5μl 100 mm P M SF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。取每份胎盤標(biāo)本約100 mg，組織塊放入預(yù)冷的研缽中進(jìn)行研磨，邊研邊加液氮，至組織塊研磨成粉沫狀，加入1 ml冷Lysis Buffer，玻璃勻漿器在低溫環(huán)境中上下手動勻漿，使組織進(jìn)一步研碎。取組織勻漿液轉(zhuǎn)移至1.5ml預(yù)冷的離心管，4℃、10 000 rpm離心5分鐘。取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷管，蛋白定量采用BCA法。分裝保存于－80℃環(huán)境，避免反復(fù)凍融。

1.2.2 SDS-PAGE電泳、轉(zhuǎn)膜、印跡反應(yīng) 12%濃縮膠時將電壓調(diào)至80～90 V，到5%分離膠以后電壓調(diào)至100～120 V，待溴酚藍(lán)遷移到分離膠底部，終止電泳。轉(zhuǎn)膜：100 V轉(zhuǎn)移90分鐘。免疫印跡反應(yīng)：電轉(zhuǎn)后取出P V D F膜，用T BS將膜從下向上浸濕后移至含封閉液的平皿中，室溫下脫色搖床搖動封閉2 h；孵育一抗：以T BS T將兔抗人OPN多克隆一抗、G A P D H多克隆一抗分別以1∶1000稀釋，4℃搖床孵育過夜；孵育二抗：以T BS T洗膜3次，每次10分鐘，按1∶2000稀釋辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔二抗。室溫?fù)u床孵育1小時，用T BS T在溫室下?lián)u床上清洗2次，再用T BS清洗1次后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光反應(yīng)?；瘜W(xué)發(fā)光：T BS T洗膜后，按說明書加發(fā)光劑，將膜蛋白面朝下與發(fā)光劑充分接觸后，反應(yīng)1分鐘，去盡殘液后置于X光片夾中，于暗室中放置X膠片，曝光1分鐘，顯影定影各1分鐘。將膠片進(jìn)行掃描或拍照，用凝膠圖像處理系統(tǒng)分析光密度值。

1.3 實時熒光定量PCR反應(yīng)檢測胎盤組織m RN A表達(dá)

1.3.1 RNA提取和純度鑒定 組織研磨、勻漿：組織塊放入預(yù)冷的研缽中進(jìn)行研磨，邊研邊加液氮，不要使液氮揮發(fā)干，至組織塊研磨成粉沫狀。每個研缽中加入Trizol 2 ml，轉(zhuǎn)移Trizol至玻璃勻漿器，進(jìn)一步勻漿5分鐘，再轉(zhuǎn)移至1.5 ml E P管，室溫下放置5分鐘。加入氯仿，0.2 ml／管，用力振搖15秒。室溫下孵育2～3分鐘，接著于4℃，12 000 g離心15分鐘。RNA全部分配于水相中。水相體積為加入的Trizol試劑的60%。RNA沉淀：小心吸取上層無色水相（500μl左右），將轉(zhuǎn)移至一干凈的1.5 ml E P管中，加入0.5 ml異丙醇，輕輕混勻。并將混合液于室溫下放置10分鐘。接著于4℃下12 000 g離心10分鐘。棄上清，加入1 ml 75%乙醇后，水平搖動離心管以清洗RNA沉淀，洗去鹽離子核殘余的異丙醇。隨后于4℃下7500 g離心5分鐘。小心吸取上清，于無菌環(huán)境中空氣干燥RNA沉淀3～5分鐘，但不能使沉淀過于干燥，以免影響RNA的溶解，加入20μl DEPC水溶解RNA，分裝備用，－80℃冰箱保存。

RNA純度及完整性鑒定，紫外分光光度計測定RNA純度：每2μl RNA中加入98μl DEPC水測定所提取RNA在260 nm和280 nm吸光度O D值，對各組RNA進(jìn)行濃度監(jiān)測，并用A260／A280判斷RNA的純度，比值在1.8～2.0之間，說明RNA較純，無蛋白質(zhì)污染。以DEPC水為空白調(diào)零。

1.3.2 m RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA cDNA第一鏈的合成參照Fermentas公司第一鏈合成系統(tǒng)試劑盒（K1622）操作指南上的說明進(jìn)行。在無菌的0.2 ml塑料離心管中準(zhǔn)備模板引物混合物。反應(yīng)條件為65℃5分鐘，之后將混合物置于冰上至少1分鐘。混合物體系為總RNA 1μg，Rando mhexamer primer 1μl，加DEPC水至總體積為12μl。加入8μl cDNA合成試劑，cDNA合成試劑包括5×第一鏈合成緩沖液4μl，RNA酶抑制劑1μl，M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶1μl，10 mmdNTP Mix 2μl。將上述20μl混合體系按以下條件進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，25℃5分鐘，42℃60分鐘，70℃5分鐘。反應(yīng)產(chǎn)物－80℃保存或進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

1.3.3 實時熒光定量PCR反應(yīng)引物設(shè)計和合成

由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司設(shè)計及合成熒光定量PCR所需引物（目的基因的擴(kuò)增片段大小為100～300 bp；退火溫度在58～60℃范圍之內(nèi)；3′末端避免有G／C重復(fù)序列；（G＋C）%＜60%等）。GAPDH作為內(nèi)參，引度溶解濃度為10μm ol／L?；蛞锏木唧w序列見表1。

表1 實時熒光定量PCR反應(yīng)引物序列

cDNA的PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系如下，2× S Y B R Green I PCR Mix 10μl，50×ROX Reference dye 0.4μl，模板cDNA 2μl，上游引物2μl，下游引物2μl，加dd H2O至20μl。按上述反應(yīng)體系進(jìn)行加樣于96孔反應(yīng)板，每個基因重復(fù)3個孔，反應(yīng)板封閉后放入實時熒檢測系統(tǒng)A BI 7500 Real Time PCR System中。反應(yīng)條件如下，預(yù)變性95℃10分鐘，40個循環(huán)反應(yīng)，每個循環(huán)95℃10秒，60℃20秒，72℃35秒，于延伸階段檢測熒光信號。反應(yīng)結(jié)束將96孔反應(yīng)板取出，將PCR產(chǎn)物4μl上樣于2.0%瓊脂糖凝膠中，以110 V電壓電泳1小時，檢測PCR反應(yīng)產(chǎn)物是否具有特異性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行獨立樣本t檢驗，計數(shù)資料以均數(shù)X±S D表示，P＜0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 DCDA雙胎胎盤中OPnm RNA和蛋白的表達(dá) 體重不一致DCDA雙胎的小胎與大胎胎盤比較，W estern blotting結(jié)果（見圖1）顯示，體重不一致DCDA雙胎的小胎與大胎胎盤比較，胎盤中蛋白表達(dá)明顯減少（0.31±0.09 V S 0.62±0.08，t＝－4.182，P＝0.001），體重一致DCDA雙胎胎盤間OPN蛋白表達(dá)無明顯差異（0.62±0.16 V S 0.68± 0.13，t＝－1.687，P＝0.724）；實時熒光定量PCR結(jié)果（見圖2）顯示，體重不一致DCDA雙胎的小胎與大胎胎盤比較，胎盤中OPnm RNA表達(dá)明顯減少（0.61±0.28 V S 1.01±0.12，t＝3.087，P＝0.014），體重一致DCDA雙胎胎盤間OPnm RNA表達(dá)無明顯差異（0.98±0.18 V S 1.02±0.11，t＝1.884，P＝0.464）。

圖1 DCDA雙胎胎盤OPN W estern blotting結(jié)果

圖2 DCDA雙胎胎盤OPN實時熒光定量PCR結(jié)果

2.2 MCDA雙胎胎盤中OPnm RNA和蛋白的表達(dá) 體重不一致MCDA雙胎的小胎與大胎胎盤比較，W estern blotting結(jié)果（見圖3）顯示，體重不一致MCDA的小胎與大胎比較，胎盤中OPN蛋白表達(dá)顯著下降，（0.24±0.06 V S 0.73±0.18，t＝－4.967，P＝0.001），體重一致MCDA的小胎與大胎比較，胎盤中蛋白表達(dá)無明顯差異（0.48±0.12 V S 0.42±0.15，t＝－1.687，P＝0.586）；實時熒光定量PCR結(jié)果（見圖4）顯示，體重不一致MCDA的小胎與大胎比較，胎盤中m RNA表達(dá)顯著下降，（0.46±0.16 V S 1.01±0.09，t＝5.128，P＜0.001），生長一致MCDA雙胎胎盤間OPnm RNA表達(dá)無明顯差異（0.89±0.15 V S 0.95±0.22，t＝0.697，P＝0.564）。

圖3 MCDA雙胎胎盤OPNW estern blotting結(jié)果

圖4 MCDA雙胎胎盤OPN實時熒光定量PCR結(jié)果

3 討 論

無論是MCDA還是DCDA雙胎都可并發(fā)雙胎體重不一致，DCDA雙胎發(fā)生的體重不一致通常發(fā)生在妊娠的中晚期；MCDA雙胎發(fā)生的體重不一致則不可預(yù)測，可以發(fā)生在妊娠的早期、中期或者晚期［7-9］。發(fā)病原因可能與胎盤、臍帶或胎兒之一先天畸形、染色體異常等有關(guān)，MCDA雙胎也可因雙胎輸血綜合征引起雙胎體重不一致，是由于血液的交換不平衡所致。雙胎體重不一致按起病時間可分為早發(fā)型及晚發(fā)型，早發(fā)型指孕20周前發(fā)現(xiàn)的體重不一致，晚發(fā)型指孕26周后發(fā)現(xiàn)的體重不一致，起病越早，胎兒預(yù)后越差［10-12］。

影響胎兒生長發(fā)育的因素包括母體、胎兒、胎盤三方面，雙胎妊娠具有相同的母體因素及相似的宮內(nèi)環(huán)境，胎盤份額或功能可能是雙胎體重不一致的主要影響因素。有研究發(fā)現(xiàn)，無論是在DCDA雙胎還是在MCDA雙胎，體重不一致雙胎的小胎胎盤重量?。?3］。本研究結(jié)果顯示，體重不一致雙胎胎盤間份額有明顯差別，胎盤份額差別越大，雙胎間體重差越明顯，兩者正相關(guān)關(guān)系。還有研究顯示體重不一致雙胎胎盤在氨基酸轉(zhuǎn)運功能有明顯差異［14］。一項前瞻性多普勒超聲研究顯示，體重不一致雙胎的小胎臍動脈舒張末期血流返向或缺失發(fā)生率高［15，16］。提示體重不一致雙胎中的小胎存在胎盤灌注不足。還有研究發(fā)現(xiàn)在MCDA體重不一致雙胎的小胎子宮螺旋動脈血流阻力增加［17］。以上研究顯示體重不一致雙胎胎盤在胎盤份額和胎盤灌注及轉(zhuǎn)運功能有明顯差異。

雙胎體重不一致還存在其他病因。MCDA雙胎具有相同的基因，理論上雙胎具備相似的生長潛力，體重差異不大，但當(dāng)受精卵內(nèi)細(xì)胞團(tuán)形成后發(fā)生分裂時在兩胚囊間的分裂球分配不等，可以使MCDA雙胎生長潛力出現(xiàn)差異；MCDA雙胎的臍帶異常和臍帶帆狀附著以及單臍動脈可能是其胎盤份額不均的影響因素［16］。DCDA雙胎可以存在遺傳學(xué)方面的生長潛能差異，獨立分隔的2個胎盤其中之一未能占據(jù)理想而有利的宮腔位置而得不到良好的血供。無論MCDA還是DCDA，雙胎先天性感染也是影響因素之一，雖然感染多影響到2個胎兒，但嚴(yán)重程度可能有所不同［18］。

Yusuf等［19］通過對正常孕婦、子癇前期和單胎妊娠FGR的胎盤組OPN表達(dá)的研究發(fā)現(xiàn)，OPN在細(xì)胞滋養(yǎng)層侵入母親血管和或細(xì)胞外基質(zhì)的過程中發(fā)揮重要作用，可能是胎盤床重塑的標(biāo)志。子宮和胎盤的免疫細(xì)胞分泌的OPN可調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的行為和細(xì)胞因子的生成，并在母胎免疫屏障的形成中發(fā)揮作用［20-22］。Fedarko等［23］發(fā)現(xiàn)OPN在正常妊娠子宮蛻膜基質(zhì)細(xì)胞及蛻膜自然殺傷細(xì)胞中高表達(dá)，并隨著妊娠的進(jìn)展而進(jìn)一步增高，在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者蛻膜OPN的表達(dá)明顯下調(diào)。研究發(fā)現(xiàn)在子癇前期患者胎盤組織中多種參與細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的胞質(zhì)蛋白和細(xì)胞骨架蛋白如OPN、Sre、Cas、PI-3 K及STAT3等蛋白表達(dá)較正常胎盤組織顯著減少［24-26］。本部分實驗采用免疫組織化學(xué)染色、W estem blotting和實時熒光定量PCR反應(yīng)，從轉(zhuǎn)錄到翻譯水平定性定量地研究了正常妊娠及子癇前期胎盤組織OPN表達(dá)的差異性，OPN蛋白在正常晚期妊娠組和子癇前期胎盤組織中均有表達(dá)，OPN要表達(dá)定位于胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞漿中，子癇前期胎盤組織中OPN的蛋白及m RNA表達(dá)量均明顯低于正常晚孕組。Batorfi等［27］指出，在正常妊娠中，OPN對滋養(yǎng)層生長和侵入的調(diào)節(jié)是一個復(fù)雜的過程，妊娠相關(guān)疾病如子癇前期、FGR、自然流產(chǎn)、葡萄胎這種調(diào)節(jié)被改變，其發(fā)病機(jī)制可能與OPN的下調(diào)有一定關(guān)系。本研究顯示，體重不一致DCDA雙胎與MCDA雙胎兩胎各自胎盤間份額差距明顯，說明胎盤發(fā)育的差異可能導(dǎo)致雙胎體重不一致。OPnm RNA及蛋白在體重不一致雙胎中的小胎胎盤中低表達(dá)，相關(guān)性分析顯示，胎盤中OPnm RNA的表達(dá)水平與胎盤份額大小成正相關(guān)，提示OPN分泌不足可能導(dǎo)致胎盤發(fā)育障礙有關(guān)?？赡苁菍?dǎo)致雙胎體重不一致的機(jī)制之一。

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編輯：劉勇

ObjectiveTo analyze the expression of OPN in placenta of discordanTTwins，and explore the relationship betweeNThe OPN expression and pathophysiology of discordanTTwins.MethodReal-time quantitat ive PCR reaction，Western blotting，immunohistochemistry，were used to detecTThe expression level of OPnm RMA and protein in placenta.ResultsAs to the discordant DCDA twin，placenta of small fetus co m pared with that oflarge fetus，Western blotting Results showed that OPN protein expression was significantly decreased in placenta of small fetus（0.31±0.09 VS 0.62±0.08，P＜0.05）；OPN protein expression was not significantly differentiNThe placenta betweeNThe concordant DCDA twins（0.62±0.16 VS 0.68±0.13，P＞0.05）；real-time quantitative PCR Results showed that OPnm RNA expression was significantly decreased in placenta of smallfetus for discordant DCDA twins（0.61±0.28 VS 1.01±0.12，P＜0.05），OPnm RNA expression was not significantly different iNThe placenta betweeNThe concordant DCDA twins（0.98±0.18 VS 1.02±0.11，P＞0.05）.As to the discordant MCDA twin，placenta of small fetus co m pared with that of large fetus，Western blottingResultsshowed that OPN protein expression was significantly decreased in placenta of small fetus（0.24±0.06 VS 0.73±0.18，P＜0.05）；OPN protein expression was not significantly differentiNThe placenta betweeNThe concordant DCDA twins（0.48 ±0.12 VS 0.42±0.15，P＞0.05）；real-time quantitative PCRResultsshowed that OPnm RNA expres-sion was significantly decreased in placenta of small fetus for discordant DCDA twins（0.46±0.16 VS 1.01±0.09，P＜0.05），OPnm RNA expression was not significantly different iNThe placenta betweeNThe concordant DCDA twins（0.89±0.15 VS 0.95±0.22，P＞0.05）.ConclusionsThe expression of OPnm RNA anDCorrelated with twin placentalterritory，suggesting that OPN involved in placental develop ment，low OPN expressionmay be associated with discordanTTwins.

twins；osteopontin；discordance；placental territory

R714.23

A

2013-08-04）

*通訊作者：方群，Email：fang＿qun＠163.co m