范文娟

【摘要】效液相色譜法檢測下限為3mg/mL的硒具有高選擇性、高效率、高靈敏度和操作簡單、快速等優(yōu)點，國外應用較多。國內(nèi)醫(yī)學檢驗上因儀器昂貴、試劑消耗大，推廣較慢。原子熒光分析法檢出極限lmg/mL，線性范圍為2.5～500ng/mL。它有一定的局限性，但在亞洲特別是中國和日本使用廣泛。

【關鍵詞】高效液相色譜法；原子熒光分析法；硒

一、原子熒光分析法測定魚中硒的含量

測定魚硒含量的方法有幾種：原子熒光分析法、微分極譜法、氣相色譜和高效液相色譜法、中子活化分析法、化學發(fā)光淬滅法等。本文采用原子熒光分析和高效液相色譜法對魚硒含量進行測定并比較。

（一）材料與方法

1、儀器與試劑

儀器：AFS-230雙道原子熒光光度計；硒高強度空心陰極燈；

試劑：鹽酸、硝酸、高氯酸均為國產(chǎn)GR級試劑，硼氫化鉀、氫氧化鉀為國產(chǎn)AR級試劑。

2、儀器條件選擇

光電倍增管負高壓：320V；硒空心陰極燈電流：80Ma；原子化器溫度：9000C；

爐高：8mm；載氣流量900mL/min；屏蔽氣流量1100mL/min；

測量方式：標準曲線法；讀數(shù)方式：峰面積；讀數(shù)時間：12s；進樣體積：1mL

3、樣品的獲取與前處理

取草魚的頭部皮膚，中間魚肉，尾巴和肝臟組織于60度左右的烘箱中烘干并碾成粉末狀。

準確稱取草魚樣品粉末0.2g，置于50mL小燒杯中，加入體積比為4：1的硝酸與高氯酸，室溫放置過夜，加熱消化。當溶液變?yōu)榍辶敛橛邪嘴F時，再加熱至剩余體積約1mL。冷卻，加入6mol/LHCl5mL，繼續(xù)加熱至溶液變?yōu)橥该鳠o色并伴有大量白霧出現(xiàn)。冷卻，轉移至容量瓶中，用10%HCl定容到10.00 mL。再準確稱取0.1g草魚粉末樣品，同上述方法操作，最終定容到5.00mL。

4、實驗方法

采用原子熒光法，將順序注射儀的進樣管放入盛有樣品的容量瓶中，設定儀器進樣量為1.0mL，以10%HC1為載流溶液，同體積進樣，并與樣品混合，進入反應器與還原劑硼氫化鉀混合，以氬氣為載氣，采用標準曲線法確定樣品硒含量。儀器工作條件如下：光電倍增管負高壓320V；原子化器高度8 mm；空心陰極燈燈電流80mA；載氣流量900mL/min；屏蔽氣流量1100mL/min；載流液10%HC1；進樣體積1.0mL。硒標準工作液質(zhì)量濃度為10ng/mL，制作標準曲線時，采用10%的HC1，儀器自動逐級稀釋為1、2、4、6、8和10ng/mL系列溶液，測定不同濃度硒標準溶液的含量。所有魚樣品硒含量均平行測定3次（n=3），取平均值。

5、硒標準曲線的繪制

配制硒標準系列0.004、0.012、0.020、0.040、0.120、0.200mg/L，根據(jù)實驗優(yōu)化條件進行魚硒的測定，硒濃度在此范圍與熒光強度呈線性正向關系，R=0.9997，曲線回歸方程y=51.298+23294.412x，x為硒濃度，y為熒光強度。

結果見表2-1。

表2-1 標準硒系列的測定結果

圖1 硒標準曲線

（二）結果

通過對草魚樣品的測定，平行測定三次得出三個熒光強度為771.51、769.79、801.56，得出平行三次測定的硒濃度為0.0353、0.0357、0.0366mg/kg。取其平均值為0.0359mg/kg。

（三）測定條件的選擇原因

負高壓和燈電流是影響測定靈敏度的主要因素，熒光強度隨負高壓或燈電流的增大而增加，但負高壓、高電流會縮短燈的壽命，使儀器噪聲增大，對測定不利，因此采用較高的負高壓（320V）和燈電流（80mA），以獲得較強的熒光強度和良好的信噪比。測定的靈敏度隨爐高的增加而減少但爐高太低時，散射光將造成很高的背景讀數(shù)，令空白值增大，本實驗結果顯示爐高8mm較合適。

二、高效液相色譜法測定魚中痕量硒含量

（一）儀器與試劑

高效液相色譜儀，附帶熒光檢測器；

數(shù)據(jù)處理機硬件為Epson計算機，軟件為Perkin—Elmer公司產(chǎn)品。

硒標準濃液：取l000μg/mL的硒標準貯存液（GSBG62029—90）1.0mL于100mL容量瓶中，以0.1mol/L HCL稀釋至刻度作為標準中間液，硒含量為10μg/mL。再以0.1mol/L HCL稀釋得硒含量為0.5μg/mL的標準使用液。

0.1 % 2，3-二氨基萘溶液：稱取100mg2-3-二氨基萘于250mL磨口三角瓶中，加入l00mL 0.1mol/L鹽酸，振搖至全部溶解后，加入20mL環(huán)己烷繼續(xù)振播5min，移入分液漏斗，靜置分層后將水相放回原三角瓶內(nèi)，再用環(huán)已烷淬取幾拔，直至環(huán)己烷相無色為止，將此純化的水溶液貯于棕色瓶中，加一層約lcm厚的環(huán)己烷隔絕空氣，置冰箱內(nèi)保存。

EDTA混和液：量取50mL 0.2mol/L EDTA、50mL 1.0 mol/L 鹽酸羥胺及5mL 0.02 mol/L 甲酚紅指示液.加水稀釋至1L混勻。

（二）實驗方法

1、樣品處理

稱取1.0g均勻魚樣于50mL試管中，加入6mL濃HNO3浸泡過夜，次日沸水浴消化至無色或淡黃色透明。再加入2.0mL飽和草酸銨溶液，沸水浴加熱60min，消除HNO3和NO-2對測定的影響，試管中溶液即為樣品消化液。

2、熒光物的生成

于上述樣品消化液中加入10mLEDTA混和液，用1 ： 1氨水及10% HCI調(diào)至粉紅色（pH 1.5～2.0），加入2.0mL 0.1 % DAN水溶液，振勻，沸水浴加熱5min后冷卻，反應生成的4，5-苯并苤硒（NSD）用2mL環(huán)己烷振搖萃取2min，于暗處放置l0min，取l0μL環(huán)己烷相進液相色譜儀。

3、標準曲線的繪制

準確取0.5ug/mL硒標準溶液0、0.2、0.6、1.0、1.4、2.0mL（分別相當于0、0.1、0.3，0.5、0.7、1.0μg），加水至5mL，按樣品消化液測定步驟同時進行測定，結果Se含量在0～1.0μg范圍內(nèi)。峰高與含量有良好的線性關系，線性方程為：Y=41.28x+0.4497 R=0.9923。

4、硒的回收率

表3-1 測定硒的回收率

5、 結果與討論

用本法測定魚中的痕量硒平行實驗三次得出結果分別為：0.0297、0.0312、0.0361mg/kg。

取其平均值0.0299mg/kg。

（1）流動相的選擇

反相液相色譜通常選用甲醇—水或乙腈—水體系為流動相。實驗證明。4，5-苯并苤硒腦在乙腈—水體系中的熒光強度比在甲醇—水體系中的熒光強度強，100%乙腈中熒光強度最強，且峰分離最好，靈敏度最高。所以本法選用l00%乙腈為流動相。

（2）發(fā)射波長的選擇

用一定量硒標準溶液的消化處理液多次注入液相色譜儀，分別選用不同波長進行實驗，波長在558nm處有最大吸收。

三、結論

高效液相色譜法檢測下限為3mg/mL的硒具有高選擇性、高效率、高靈敏度和操作簡單、快速等優(yōu)點，國外應用較多。現(xiàn)今雖然在國內(nèi)醫(yī)學檢驗上因儀器昂貴、試劑消耗大，使其方法推廣較慢。

原子熒光分析法檢出極限lmg/mL，線性范圍為2.5～500ng/mL。它有一定的局限范圍，在中國和日本用到的比較多。

因此，原子熒光分析法在現(xiàn)今的社會應用廣泛。