羅愛玲 陳緒華 江一飛

摘要：很多實(shí)驗(yàn)室在執(zhí)行國標(biāo)GB 5413.16-2010嬰幼兒食品和乳品中葉酸（葉酸鹽活性）的測定方法時，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)過程中會出現(xiàn)這樣那樣的問題，檢測結(jié)果不理想，實(shí)驗(yàn)難以成功。我們在反復(fù)實(shí)驗(yàn)，并對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合分析，最終，得到理想的線性結(jié)果，并準(zhǔn)確地實(shí)現(xiàn)了樣品的測量。

關(guān)鍵詞：標(biāo)準(zhǔn)曲線 測量數(shù)據(jù)

中圖分類號：TS252.51 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-5336（2013）14-0007-03

（1）測定培養(yǎng)基品牌青島海博，通過對實(shí)驗(yàn)條件的改善菌懸液的透光率T=（72%-75%），本底降低3倍，蒸餾水做處理（每100mL中加入0.5g抗壞血酸），培養(yǎng)時間t=16.5h，調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度（縮減了兩個濃度的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)，0.15ng和0.25ng），在本底以及培養(yǎng)時間（參考《奶粉中葉酸的測定時曲線沒有線性的可能因素分析》中4培養(yǎng)時間要適度）加以控制的情況下，取得曲線正生長。實(shí)驗(yàn)測量數(shù)據(jù)如表1。

以S2作為0點(diǎn)，線性方程：Y=10.501X-0.7897 R2=0.9913

（2）在標(biāo)準(zhǔn)曲線出現(xiàn)正生長的實(shí)驗(yàn)條件下，標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度按標(biāo)準(zhǔn)要求再次實(shí)驗(yàn)。菌懸液的透光率T=（72%-75%），蒸餾水做處理（每100mL中加入0.5g抗壞血酸），本底降低3倍，培養(yǎng)時間t=17h，本底及培養(yǎng)時間加以控制，實(shí)驗(yàn)獲得的測量數(shù)據(jù)如表2。

線性方程：Y=6.2477X-0.7418 R2=0.9953通過實(shí)驗(yàn)2的結(jié)果我們可以得到能夠滿足實(shí)驗(yàn)要求的標(biāo)準(zhǔn)曲線，實(shí)驗(yàn)1以S1作為參照管，實(shí)驗(yàn)2是按照標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定的S2作為參照管。吸光度值的差異：由于菌懸液濃度的不絕對一致，及培養(yǎng)時間的等長。

按標(biāo)準(zhǔn)GB 5413.16-2010通過后續(xù)多次帶樣實(shí)驗(yàn)，因帶樣測量后，樣品管的生長無梯度出現(xiàn)。及以上實(shí)驗(yàn)僅能夠滿足線性生長要求，無法完成樣品測量，考慮更換培養(yǎng)基再次實(shí)驗(yàn)。

（3）在實(shí)驗(yàn)1、2的基礎(chǔ)上，更換測定培養(yǎng)基，培養(yǎng)基品牌美國BD，菌懸液的透光率T=（72%-75%），蒸餾水做處理（每100mL中加入0.5g抗壞血酸），培養(yǎng)時間t=17h，實(shí)驗(yàn)獲得理想的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性測量數(shù)據(jù)如表3。

線性方程：Y=1.4948X-0.0199 R2=0.9960 實(shí)驗(yàn)3得到較理想的標(biāo)準(zhǔn)曲線，且正增長梯度明顯，培養(yǎng)基不降低本底，接種空白生長量很小，故無需考慮本底對曲線的影響。

（4）在實(shí)驗(yàn)3的情況下，進(jìn)行帶樣測量實(shí)驗(yàn)，稱取樣品1#4.3216g、2#4.4373g，按標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行處理測定，同時測回收率（使用1#樣品Y1中加入1mL濃度為0.1ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)葉酸鹽）曲線測量數(shù)據(jù)結(jié)果如表4。

線性方程：Y=1.5406X+0.0123 R2=0.9999

（5）樣品、空白測量數(shù)據(jù)及計(jì)算結(jié)果如表5。

回收率測量數(shù)據(jù)及計(jì)算結(jié)果如表6。

1#樣品測定結(jié)果計(jì)算：

X1（ug/100g）=[（0.1340+0.1227+0.1154+0.1104）/4-0.0165]×100×100×5×100÷1000÷4.3216=120.5

2#樣品測定結(jié)果計(jì)算：

X2（ug/100g）=[（0.1237+0.1261+0.1184+0.1146）/4-0.0165]×100×100×5×100÷1000÷4.4373=117.4

已知1#和2#為平行測定樣品，測定結(jié)果的絕對差值為3.1，低于相對測量平均值10%的11.9，即測量結(jié)果有效。

加標(biāo)分析：標(biāo)準(zhǔn)葉酸回收率X（%）=[（0.2429-0.1340）-0.0165]/0.1×100=92.4滿足線性回收測定要求。

6 結(jié)語

通過實(shí)驗(yàn)的不斷嘗試和努力，經(jīng)過長時間和多次的實(shí)驗(yàn)摸索，應(yīng)用國標(biāo)GB 5413.16-2010在相關(guān)實(shí)驗(yàn)條件加以控制的情況下，是可以實(shí)現(xiàn)奶粉中葉酸的測定。理想的標(biāo)準(zhǔn)曲線，實(shí)現(xiàn)樣品測量，測定加標(biāo)回收率，最終確定該方法可以實(shí)現(xiàn)奶粉樣品中葉酸的測量。

參考文獻(xiàn)

[1]江一飛，劉恒，韓淑君.奶粉中葉酸的測定時曲線沒有線性的可能性因素分析.生物技術(shù)世界，2012，12（61）22-24.

[2]GB 5413.16-2010嬰幼兒食品和乳品中葉酸（葉酸鹽活性）的測定.