亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        大鼠UQCRFS1基因的克隆及其表達(dá)模式分析

        2013-04-29 05:32:47張婷黃青松范雪暉
        湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2013年9期
        關(guān)鍵詞:克隆

        張婷 黃青松 范雪暉

        摘要:通過克隆獲得泛醌-細(xì)胞色素C還原酶鐵硫蛋白亞基1(Ubiquinol-cytochrome C reductase iron-sulfur subunit 1,UQCRFS1)基因,對基因序列及其編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析,研究了其在大鼠(Rattus norvegicus)心、腦、腎、肺組織中的表達(dá)模式。測序結(jié)果顯示UQCRFS1基因全長826 bp,RT-PCR結(jié)果顯示其在大鼠心臟中表達(dá)量較高,腦和肺中表達(dá)量稍低,腎臟組織中表達(dá)量最低,推測UQCRFS1的功能可能與大鼠的心臟發(fā)育有關(guān)。

        關(guān)鍵詞:大鼠(Rattus norvegicus);UQCRFS1基因;克隆;表達(dá)模式

        中圖分類號:Q786 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:0439-8114(2013)09-2174-03

        鐵硫蛋白作為電子載體在生命活動中起著重要的作用,其特征是存在著鐵硫簇,常見的鐵硫簇中含2、3或4個(gè)鐵原子,這些鐵原子與多肽鏈相連,并由無機(jī)硫進(jìn)行聯(lián)結(jié),由簡單的鐵硫簇通過金屬聯(lián)結(jié)組裝成更復(fù)雜的結(jié)構(gòu)[1-4],鐵硫蛋白正是基于鐵硫簇而具有優(yōu)異的電子傳遞功能。主要的鐵硫蛋白包括細(xì)菌和線粒體呼吸鏈中的復(fù)合體Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,光合作用中的光系統(tǒng)Ⅰ和鐵氧還原蛋白,氮養(yǎng)菌中的固氮酶,Krebs循環(huán)中的順烏頭酸酶,以及哺乳動物中對鐵的吸收起調(diào)控作用的鐵調(diào)控蛋白Ⅰ等[5,6]。參與鐵硫簇合成的關(guān)鍵蛋白已經(jīng)被確定,但對其分子水平上的機(jī)制及如何進(jìn)行相互作用在機(jī)體內(nèi)外合成鐵硫蛋白尚待進(jìn)一步研究[7-9]。泛醌-細(xì)胞色素C還原酶鐵硫蛋白亞基1(Ubiquinol-cytochrome C reductase iron-sulfur subunit 1,UQCRFS1)是線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ中的一個(gè)亞單位,廣泛分布在生物體中。目前對UQCRFS1基因的研究主要集中于阿爾茨海默病、心肌收縮疾病、亨廷頓舞蹈病、帕金森等相關(guān)疾病上。本研究根據(jù)前期工作所得的差異性片段,進(jìn)行生物信息學(xué)分析后設(shè)計(jì)出特異性引物,克隆出大鼠(Rattus norvegicus)UQCRFS1基因的全長,進(jìn)而研究該基因在大鼠心、腦、肺、腎發(fā)育過程中的表達(dá)動態(tài),為探討其在大鼠發(fā)育過程中的作用提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        健康SD純系大鼠,雌雄不限,購自新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心。分別取1日齡、10日齡、20日齡健康SD大鼠的心、腦、肺、腎組織用作基因表達(dá)譜分析。Taq DNA聚合酶、pGEM-T Easy載體和DNA回收試劑盒均購自TaKaRa公司,反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自Fermentas公司,PCR引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

        1.2 方法

        2 結(jié)果與分析

        2.1 UQCRFS1基因的克隆

        2.1.2 UQCRFS1基因的序列測定結(jié)果 采用DNA回收試劑盒回收并純化擴(kuò)增得到的UQCRFS1基因,連接pGEM-T Easy載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,挑選陽性菌落提取質(zhì)粒,對UQCRFS1基因測序,所得結(jié)果見圖2。UQCRFS1基因全長826 bp,編碼274個(gè)氨基酸。

        2.2 UQCRFS1基因的表達(dá)模式分析

        3 小結(jié)與討論

        不同結(jié)構(gòu)的鐵硫蛋白具有不同的生物學(xué)功能,主要包括參與電子傳遞、底物的結(jié)合與激活、鐵/硫的存儲、基因表達(dá)的調(diào)控、酶活力的調(diào)控等[10,11]。本研究克隆得到UQCRFS1基因,并根據(jù)測序結(jié)果得到其編碼的氨基酸序列,利用相關(guān)的預(yù)測軟件對該蛋白進(jìn)行了結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)方面的分析。結(jié)果顯示,UQCRFS1含有274個(gè)氨基酸殘基,推測其分子式為C1306H2088N366O390S9,不穩(wěn)定指數(shù)為46.87,表明其三維結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。預(yù)測UQCRFS1在哺乳動物網(wǎng)織紅細(xì)胞中的半衰期為30 h,在酵母中的半衰期為20 h以上,在大腸桿菌中的半衰期為10 h以上。

        對UQCRFS1基因在大鼠心、腦、肺、腎各組織中的表達(dá)模式進(jìn)行分析,結(jié)果表明該基因在心臟組織中表達(dá)量較高,腦和肺組織中表達(dá)量稍低,腎臟組織中表達(dá)量最低,同時(shí)發(fā)現(xiàn)該基因的表達(dá)水平隨組織的發(fā)育有上升趨勢??梢奤QCRFS1與大鼠心臟發(fā)育有關(guān),但其在大鼠發(fā)育過程中的作用機(jī)制還不清楚,有待進(jìn)一步的研究。

        參考文獻(xiàn):

        [1] REES D C. Great metalloclusters in enzymology[J]. Annual Review of Biochemistry, 2002,71(1):221-246.

        [2] FU W, JACK R F, MORGAN T V, et al. niFu gene product from Azotobacter vinelandii is a homodimer that contains two identical[2Fe-2S] clusters[J]. Biochemistry,1994,33(45):13455-13463.

        [3] BEINERT H. Iron-sulfur proteins: Ancient structures, still full of surprises[J]. Journal of Biological Inorganic Chemistry,2000,5(1):2-15.

        [4] BEINERT H, HOLM R H, M NCK E. Iron-sulfur clusters: Nature's modular, multipurpose structures[J]. Science,1997, 277(5326):653-659.

        [5] BALK J, LOBR AUX S. Biogenesis of iron-sulfur proteins in plants[J]. Trends in Plant Science, 2005,10(7): 324-331.

        [6] LILL R, M HLENHOFF U. Iron-sulfur-protein biogenesis in eukaryotes[J]. Trends in Biochemical Sciences,2005,30(3):133-141.

        [7] EMAHAZION T, BESKOW A, GYLLENSTEN U, et al. Intron based radiation hybrid mapping of 15 complex I genes of the human electron transport chain[J]. Cytogenetic and Genome Research, 1998,82(1-2):115-119.

        [8] 侯萬儒,陳 瑜,彭正松,等. 大熊貓輔酶Q-細(xì)胞色素C氧化還原酶的輔酶Q連接蛋白基因cDNA的克隆及序列比較[J]. 獸類學(xué)報(bào),2007,27(2):190-194.

        [9] 王祖秀,郝彥哲,侯萬儒.大熊貓NADH-輔酶Q氧化還原酶鐵硫蛋白亞基6基因(NDUFS6)的序列分析[J].獸類學(xué)報(bào),2008, 28(3):321-324.

        [10] DAI S D, SCHWENDTMAYER C, SCH?譈RMANN P, et al. Redox signaling in chloroplasts: Cleavage of disulfides by an iron-sulfur cluster[J]. Science,2000,287(5453):655-658.

        [11] 孫 飛,周強(qiáng)軍,孫 吉,等.線粒體呼吸鏈膜蛋白復(fù)合體的結(jié)構(gòu)[J].生命科學(xué),2008,20(4):566-578.

        猜你喜歡
        克隆
        克隆狼
        浙江:誕生首批體細(xì)胞克隆豬
        桃MYB3基因的克隆及表達(dá)分析
        河北果樹(2020年2期)2020-05-25 06:58:12
        侏羅紀(jì)世界 當(dāng)克隆遇到恐龍
        鹽芥WBC11克隆與RNAi載體的構(gòu)建
        抗BP5-KLH多克隆抗體的制備及鑒定
        屬于“我們”
        屬于“我們”
        鯉TYK2基因的克隆鑒定及組織表達(dá)分析
        熱不對稱交錯(cuò)PCR 克隆bapt 基因側(cè)翼序列
        国产黄色精品高潮播放| 亚洲av成人无码网站大全| 1000部拍拍拍18勿入免费视频下载| 午夜福利不卡无码视频| 在线观看国产自拍视频| 成午夜福利人试看120秒| 天天综合网天天综合色| 久久精品无码一区二区三区不| 亚洲一区二区视频蜜桃| 国产av精品一区二区三区久久| 9 9久热re在线精品视频| 中文字幕国产欧美| 亚洲高清在线视频网站| 日本一二三区在线观看视频| 国产亚洲精品久久777777| 国模无码视频专区一区| 国产精品自拍网站在线| 刺激一区仑乱| 精品人妻久久一区二区三区| 18禁无遮拦无码国产在线播放| 亚洲天堂手机在线| 亚洲国产精品一区亚洲国产| 国产亚洲精品97在线视频一| 免费观看又色又爽又湿的视频| 国产亚洲精久久久久久无码苍井空| 亚洲国产精品无码久久九九大片健| av网站免费观看入口| 中文字幕无线码免费人妻| 国产AV无码专区久久精品网站| 中文字幕亚洲精品第一页| 亚洲综合一区中文字幕| 免费观看又色又爽又黄的| 高清国产美女一级a毛片在线| 日韩精品人妻视频一区二区三区 | 在线麻豆精东9制片厂av影现网| 风韵饥渴少妇在线观看| 欧美日韩中文字幕日韩欧美| 日韩av免费一区二区| 婷婷色婷婷开心五月四房播播| 精品国产香蕉伊思人在线又爽又黄| 亚洲天堂线上免费av|