夏曉華　張林霞等

摘要：為了估測(cè)農(nóng)藥毒死蜱的環(huán)境毒性，以大鱗副泥鰍（Paramisgurnus dabryanus）為受試動(dòng)物，研究毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍的急性毒性和生理毒性作用。研究結(jié)果表明，毒死蜱稀釋液對(duì)大鱗副泥鰍的24、48、96 h的半數(shù)致死濃度（LC50）分別為524.76、291.53、193.20 μg/L，安全濃度為26.99 μg/L；對(duì)照組肝組織谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）的平均活力分別為24.53 U/g和16.69 U/g；試驗(yàn)組肝組織的GPT和GOT活力最低分別可達(dá)到2.65 U/g和2.81 U/g。毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍具有明顯的急性毒性和生理毒性效應(yīng)，并表現(xiàn)出明顯的劑量-時(shí)間效應(yīng)。

關(guān)鍵詞：毒死蜱；大鱗副泥鰍（Paramisgurnus dabryanus）；急性毒性；谷丙轉(zhuǎn)氨酶；谷草轉(zhuǎn)氨酶

中圖分類號(hào)：S948；Q958.116 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）09-2116-03

魚(yú)類是水生生物鏈的重要環(huán)節(jié)，對(duì)水質(zhì)變化尤為敏感，是水質(zhì)污染的高危種群。大鱗副泥鰍（Paramisgurnus dabryanus）屬魚(yú)綱鯉形目鰍科花鰍亞科副泥鰍屬，其肉質(zhì)鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，富含蛋白質(zhì)和多種維生素，并具有較高的藥用價(jià)值，是人們所喜愛(ài)的水產(chǎn)佳品。常散養(yǎng)于田間和池塘，因此是檢測(cè)水體中農(nóng)藥殘留的理想水生生物。

毒死蜱（Chlorpyrifos）又名氯吡硫磷，其化學(xué)名稱為O，O-二乙基-O-（3，5，6-三氯-2-吡啶基）硫代磷酸酯，是一種廣譜、高效的有機(jī)磷農(nóng)藥。其具有殺蟲(chóng)范圍廣、毒性較小等特點(diǎn)，在農(nóng)業(yè)病蟲(chóng)害防治上被廣泛使用；但由于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的不合理使用，雨水沖刷、淋溶及農(nóng)藥廠污水的任意排放等，使毒死蜱進(jìn)入河流、湖泊、海洋等水生生態(tài)系統(tǒng)，對(duì)水生生物的生存及人類健康構(gòu)成潛在威脅，成為常見(jiàn)的農(nóng)藥污染物之一。

近年來(lái)，Li等[1]曾報(bào)道過(guò)毒死蜱對(duì)草魚(yú)的毒性效應(yīng)，侯方浩等[2]報(bào)道過(guò)毒死蜱對(duì)錦鯽性腺的影響及其在魚(yú)組織中的富集。因此，研究毒死蜱對(duì)水生生物的毒性效應(yīng)，特別是利用生物標(biāo)志物為指標(biāo)，評(píng)價(jià)毒死蜱對(duì)水生生態(tài)的影響具有重要意義。國(guó)內(nèi)目前尚未見(jiàn)有毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍肝細(xì)胞轉(zhuǎn)氨酶影響方面的研究。本研究以大鱗副泥鰍為材料，探究了毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍的急性毒性效應(yīng)和肝臟中兩種轉(zhuǎn)氨酶活性的影響，旨在探索毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍的毒害作用，從而為殺蟲(chóng)劑的合理使用、保障漁業(yè)生產(chǎn)和生物安全提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.2 方法

1.2.2 生理毒性試驗(yàn) 在急性毒性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，設(shè)置3個(gè)試驗(yàn)組和1個(gè)空白對(duì)照組，每組均隨機(jī)投放10尾健康大鱗副泥鰍。試驗(yàn)組毒死蜱質(zhì)量濃度依次為26.99、45.11、63.23 μg/L，每24 h更換一次等體積等濃度的毒死蜱溶液；空白對(duì)照組不添加毒死蜱，用曝氣自來(lái)水進(jìn)行試驗(yàn)，每24 h更換一次等體積的曝氣自來(lái)水。生理毒性試驗(yàn)條件同急性毒性試驗(yàn)。分別于試驗(yàn)的2、4、6 d各取材一次，每次每個(gè)濃度隨機(jī)取2尾大鱗副泥鰍，迅速取其肝臟制成肝臟勻漿液，按質(zhì)量體積1∶99比加入魚(yú)用生理鹽水進(jìn)行研磨，制成1%勻漿。將研磨好的勻漿移入2個(gè)離心管中，一管以3 500 r/min離心10 min，用于GPT活力的測(cè)定；另一管以2 500 r/min離心10 min，用于GOT活力的測(cè)定。GPT和GOT活力分別用谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒（賴氏法）和谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒（賴氏法）測(cè)定，組織蛋白含量用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定。所有測(cè)定方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作步驟進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍的急性毒性

2.2 毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍肝臟GPT和GOT活性的影響

毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍肝臟GPT和GOT活力的影響如圖1和圖2所示。由圖1和圖2可知，2、4、6 d 3次取材測(cè)得的肝臟中GPT和GOT活力的變化趨勢(shì)相似：同一時(shí)間段內(nèi)隨著毒死蜱濃度的增加，肝臟中GPT和GOT活力也隨之降低，具有明顯的劑量效應(yīng)；在毒死蜱質(zhì)量濃度相同時(shí)，只有在26.99 μg/L試驗(yàn)組中GOT活力和在63.23 μg/L試驗(yàn)組中GPT和GOT活力呈現(xiàn)出2 d>6 d>4 d，這可能是由于大鱗副泥鰍自身抵抗能力的差異所致，而其余各組GPT和GOT活力均呈現(xiàn)出2 d>4 d>6 d，具有一定的時(shí)間效應(yīng)。由表2可知，對(duì)照組肝臟GPT和GOT的平均活力分別為24.53 U/g和16.69 U/g；試驗(yàn)組肝組織的GPT和GOT活力最低分別可達(dá)到2.65 U/g和2.81 U/g。經(jīng)過(guò)One-way ANOVA程序中的LSD分析，除了26.99 μg/L試驗(yàn)組在處理2 d時(shí)GPT活力與對(duì)照組相比有顯著差異（P<0.05），處理6 d時(shí)GPT活力與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異外，其余各試驗(yàn)組的GPT活力與對(duì)照組相比均有極顯著差異（P<0.01）；各試驗(yàn)組處理2、4、6 d時(shí)GOT活力與對(duì)照組相比均有極顯著差異（P<0.01）。試驗(yàn)結(jié)果表明，毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍肝臟有損傷作用，具有較強(qiáng)的生理毒性作用，表現(xiàn)出明顯的時(shí)間-劑量效應(yīng)。

3 小結(jié)與討論

本研究以大鱗副泥鰍為材料，探究農(nóng)藥毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍的急性毒性和生理毒性作用。毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍96 h的LC50為193.20 μg/L，根據(jù)中國(guó)《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》[6]的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍為高毒（96 h LC50<1.0 mg/L）。本研究結(jié)果與Li等[1]報(bào)道的毒死蜱對(duì)草魚(yú)的96 h LC50為0.05 mg/L，以及夏錦瑜等[7]報(bào)道的毒死蜱對(duì)鯽魚(yú)的96 h LC50為0.184 9 mg/L的研究結(jié)果一致，均表明毒死蜱對(duì)水生生物尤其魚(yú)類屬于高毒農(nóng)藥。毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍的安全濃度為26.99 μg/L，而毒死蜱農(nóng)藥的田間使用濃度遠(yuǎn)高于其安全濃度，因此，要合理有效地使用農(nóng)藥，避免其對(duì)環(huán)境和水生生物以及人類造成危害。

GPT和GOT是肝細(xì)胞受損最靈敏的指標(biāo)，是廣泛存在于動(dòng)物細(xì)胞線粒體中的重要氨基酸轉(zhuǎn)移酶，在機(jī)體蛋白質(zhì)代謝中起重要作用。這兩種酶活力的高低反映出大鱗副泥鰍體內(nèi)氨基酸代謝情況，同時(shí)反映出肝臟的功能。肝臟是大鱗副泥鰍營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化的主要腺體，也是尿素合成的主要場(chǎng)所，具有解毒功能。在正常情況下，肝臟中轉(zhuǎn)氨酶活力較高，血清中轉(zhuǎn)氨酶活力較低。當(dāng)機(jī)體中毒時(shí)，組織病變引起細(xì)胞膜通透性增加或損傷的組織范圍較大時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)氨酶大量釋放進(jìn)入血漿中，導(dǎo)致肝臟中轉(zhuǎn)氨酶含量降低和血清中轉(zhuǎn)氨酶含量升高[8]。

因GPT和GOT活力變化是反映肝細(xì)胞受損傷的主要敏感指標(biāo)，可以借以評(píng)價(jià)毒死蜱是否對(duì)大鱗副泥鰍存在生理毒害作用。研究顯示，隨著毒死蜱濃度的增加，肝臟中GPT和GOT活力隨之降低，具有明顯的劑量效應(yīng)；隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng)，肝臟中GPT和GOT酶活力也基本呈下降趨勢(shì)，具有時(shí)間效應(yīng)。推測(cè)毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍肝臟具有損傷作用，產(chǎn)生一定的生理毒性影響。該研究結(jié)果與南平等[9]研究的8-羥基喹啉對(duì)錦鯉肝臟中GPT和GOT活力的影響結(jié)果一致，而與張彬彬[10]研究的乙草胺對(duì)泥鰍肝臟GPT和GOT活力影響是隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng)，酶活力先上升后下降的結(jié)果不一致，這可能是由于染毒時(shí)間的不同或者是不同毒物對(duì)不同泥鰍的毒性效應(yīng)不同，從而導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果的不同。

以上研究結(jié)果表明，毒死蜱對(duì)大鱗副泥鰍具有明顯的急性毒性和生理毒性效應(yīng)，田間使用量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)試驗(yàn)用量，因此在使用農(nóng)藥時(shí)一定要適量施用，合理處理廢液，避免污染水源，以減少對(duì)生態(tài)環(huán)境和人類健康造成的威脅。該研究結(jié)果在一定程度上彌補(bǔ)了毒死蜱對(duì)水生生物毒性數(shù)據(jù)的不足，為有機(jī)磷類農(nóng)藥制定完善的地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并對(duì)其進(jìn)行生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供毒理學(xué)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

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