張 淼，李虹霖，徐 飛

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001；2.黑龍江省醫(yī)院 康復(fù)科，黑龍江 哈爾濱 150036)

運(yùn)動(dòng)性疲勞是機(jī)體各種復(fù)雜內(nèi)在變化的一種綜合外在表現(xiàn)，是機(jī)體在長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)動(dòng)后，其生理現(xiàn)象在運(yùn)動(dòng)過(guò)程中表現(xiàn)為機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力下降，使其運(yùn)動(dòng)能力不能持續(xù)在特定的運(yùn)動(dòng)水平和/或預(yù)定的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度。對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞防治的研究是運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)關(guān)注的熱點(diǎn)和焦點(diǎn)。大量研究[1-2]顯示，中醫(yī)藥對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞有良好的防治前景。本組研究采用針刺預(yù)處理方法，觀察頭穴透刺對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞的防治作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 取8周齡健康Wistar大鼠48只,雌雄各半，體質(zhì)量(200±10) g。由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，大鼠質(zhì)量合格證書(shū)編號(hào)：SCXK(黑)2008004。

1.2 試劑與儀器 試劑主要有TPH抗體和MAO抗體均購(gòu)自于millipore公司，熒光定量Realtime PCR試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均購(gòu)自于takara公司產(chǎn)品。主要儀器有電子天平(賽多科斯，萬(wàn)分之一)、水浴鍋、游泳箱(55 cm×55 cm×40 cm)、秒表。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物分組 將48只大鼠隨機(jī)分為4組，每組12只，分別為空白對(duì)照組、模型組、頭穴透刺組和傳統(tǒng)針刺組。

1.3.2 造模方法 模型組和治療組方法參見(jiàn)文獻(xiàn)[3-4]建立疲勞力竭模型?？瞻讓?duì)照組適應(yīng)性訓(xùn)練1周，正常飼養(yǎng)。

1.3.3 治療方法 頭穴透刺組和傳統(tǒng)針刺組大鼠每天在針刺預(yù)處理1 h后進(jìn)行造模。每只大鼠針刺前束縛固定，參照中國(guó)針灸學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)針灸研究會(huì)制定的《動(dòng)物針灸穴位圖譜》選穴。頭穴透刺組:針刺雙側(cè)百會(huì)透太陽(yáng)、雙側(cè)足三里、腎俞、關(guān)元，留針15 min，出針1 h后進(jìn)行造模。傳統(tǒng)針刺組:針刺雙側(cè)足三里、腎俞、關(guān)元，留針15 min,出針1 h后進(jìn)行造模?？瞻讓?duì)照組：正常飼養(yǎng)不給予任何處置。模型組：正常造模，造模前后均不給予任何治療。共進(jìn)行4周的游泳大鼠模型訓(xùn)練，每周游6 d。第1周每天游30 min，每周遞增30 min。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 一般狀況 觀察造模后各組大鼠的精神狀態(tài)、體毛、體質(zhì)量、大小便及活動(dòng)情況等。

1.4.2 力竭游泳實(shí)驗(yàn) 第4周末進(jìn)行力竭性游泳，記錄游泳時(shí)間，力竭標(biāo)準(zhǔn)以大鼠游泳的協(xié)調(diào)動(dòng)作消失，水淹沒(méi)鼻尖，身體下沉，至再次浮出水面的時(shí)間超過(guò)10 s,并連續(xù)3次者。

1.4.3 標(biāo)本采集及熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng) 用1%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)腹腔注射麻醉，麻醉滿意后固定于鼠板上，用含4%多聚甲醛緩沖液灌注固定取下丘腦。參照文獻(xiàn)[5]提取RNA。逆轉(zhuǎn)錄參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 造模后，各模型組大鼠的飼料、飲水量均有所減少，體毛干枯，體質(zhì)量緩慢增長(zhǎng)，活動(dòng)減少，眼裂變小，瞇眼明顯，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍。

2.2 各組力竭時(shí)間結(jié)果比較 見(jiàn)表1。

表1 各組力竭時(shí)間結(jié)果比較(±s,n=12)

2.3 對(duì)各組下丘腦組織中TPH、MAO-AmRNA表達(dá)的影響 見(jiàn)表2。

表2 對(duì)各組下丘腦組織中TPH、MAO-AmRNA表達(dá)的影響(±s,n=12)

3 討論

運(yùn)動(dòng)性疲勞是機(jī)體運(yùn)動(dòng)進(jìn)行到一定階段必然出現(xiàn)的生理功能變化。本實(shí)驗(yàn)采用目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)疲勞的研究比較公認(rèn)的成熟的動(dòng)物模型——大鼠游泳疲勞模型。大鼠隨著游泳天數(shù)的增加神情倦怠，皮毛蓬亂枯槁，食欲減退，體質(zhì)量不增或略有降低，雙眼暗淡無(wú)光，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍等疲勞癥狀,提示運(yùn)動(dòng)性疲勞模型建立成功。研究[6-8]顯示,5-羥色胺在運(yùn)動(dòng)性疲勞中起著重要作用，是運(yùn)動(dòng)性疲勞的重要遞質(zhì)之一。MAO主要存在于線粒體內(nèi)，5-羥色胺的主要代謝途徑是在MAO作用下氧化脫胺，在適宜的條件下，通過(guò)MAO-A酶代謝生成5-HIAA。TPH是芳香族氨基酸羥化酶家族的一員，被認(rèn)為是5-羥色胺合成的關(guān)鍵酶，其活性是5-羥色胺合成的前提，能催化L-色氨酸轉(zhuǎn)化為5-羥色胺，并影響著5-羥色胺的代謝功能。

中醫(yī)藥在扶正補(bǔ)虛，提高運(yùn)動(dòng)能力，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，延緩疲勞等方面積累了大量經(jīng)驗(yàn)[9-10]。運(yùn)動(dòng)性疲勞屬中醫(yī)“虛證”范疇。針刺具有疏通經(jīng)絡(luò),激發(fā)正氣，改善血液循環(huán)，抗脂質(zhì)過(guò)氧化，清除自由基，調(diào)節(jié)免疫功能，糾正代謝紊亂，糾正運(yùn)動(dòng)性神經(jīng)—內(nèi)分泌—免疫調(diào)節(jié)紊亂等作用。研究發(fā)現(xiàn)，頭穴透刺能降低大鼠下丘腦組織中TPH mRNA表達(dá)，增強(qiáng)MAO-A mRNA表達(dá)，其抗運(yùn)動(dòng)性疲勞機(jī)制可能與此有關(guān)。

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