肖艷華，李彥超，帥 維，曹 輝，高 婷

（1．武漢工程大學(xué)化工與制藥學(xué)院，綠色化工過(guò)程省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北省新型反應(yīng)器與綠色化學(xué)工藝重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430074；2．凱里學(xué)院化學(xué)系，貴州 凱里 55600）

0 引 言

藎草［Arthraxonhispidus（Thunb）Makino］屬于禾本科（Gramineae），味苦，性平，無(wú)毒．始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，屬下品，歷代本草均有記載．藎草資源豐富且有悠久的民間用藥歷史，其汁液可做黃色染料，莖葉入藥可治療久咳，外用洗瘡等．藎草也是一種廣泛分布的農(nóng)田雜草，喜潮濕，在田邊溝邊和低濕莊稼地常常密集生長(zhǎng)，生物量較大［1－2］．由于目前尚無(wú)關(guān)于藎草化學(xué)成分系統(tǒng)研究的報(bào)道，為了尋找其用藥基礎(chǔ)，對(duì)藎草的乙醇提取物進(jìn)行柱色譜分離純化，共分離并鑒定10個(gè)化合物，其中化合物1～3為首次從該植物中分離得到．

圖1 化合物1，2和3的結(jié)構(gòu)Fig．1 Structure of compands 1 3

1 儀器和材料

Perkin Elmer Spectrum One FT－IR 光 譜 儀（溴化鉀壓片）；Bruker Avance 400核磁共振儀，以化學(xué)位移值（δ）表示，以TMS作為內(nèi)標(biāo)，偶合常數(shù)（J）用 Hz表示；Finnigan LCQ DECA 質(zhì)譜儀；國(guó)產(chǎn)X－4熔點(diǎn)儀測(cè)定（上海精科物理光學(xué)儀器廠）；Shimadzu UV 2550型紫外光譜儀；柱色譜和薄層色譜用硅膠由青島海洋化工廠生產(chǎn)；所用試劑均為分析純；常規(guī)顯色劑為質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的磷鉬酸無(wú)水乙醇溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的硫酸乙醇溶液．

所用藥材藎草樣品采自云南景東斗閣鎮(zhèn)（海拔約2 000 m）．由西南師范大學(xué)化學(xué)系唐天君教授提供并鑒定，樣品保存在武漢工程大學(xué)化工與制藥學(xué)院704室．

2 提取分離

將藎草地上部分粉碎，水提并且噴霧干燥得到藎草粗提物7．5 kg，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%乙醇浸提3次，每次2 h，濃縮后得到浸膏2．6 kg．在浸膏中加入適量水稀釋使浸膏懸浮，分別用石油醚、氯仿和乙酸乙酯萃取，經(jīng)減壓濃縮得氯仿部分54．8 g，乙酸乙酯部分64 g．氯仿部位經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿－甲醇（50∶1～2∶1）梯度洗脫，共收集107流份（每流份500 m L），F(xiàn)r1－4（流份1～4）氯仿重結(jié)晶，得到化合物10（16 mg）；Fr 9～13氯仿重結(jié)晶，得到黃色針晶化合物1（14 mg）．Fr 22～24合并后10．8 g經(jīng)硅膠柱色譜（柱子規(guī)格5 cm×45 cm，50～75μm硅膠220 g），和重結(jié)晶得到化合物4（25 mg）．Fr 25～33合并后經(jīng)硅膠柱色譜和重結(jié)晶得到化合物7（22 mg）．Fr 34～40合并后經(jīng)硅膠柱色譜和重結(jié)晶得到化合物9（12 mg）．Fr 52～63合并后經(jīng)硅膠柱色譜和重結(jié)晶得到化合物6（15 mg）和化合物2（23 mg）．乙酸乙酯部位經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿－甲醇（30∶1～2∶1）梯度洗脫，共收集88部分（500 m L／每部分），F(xiàn)r 1～7合并，并用氯仿重結(jié)晶得到白色固體化合物5（15 mg）．Fr 8～32合并濃縮后，硅膠柱色譜分離得到三個(gè)部分，第一部分重結(jié)晶得到化合物3（11 mg）．第二個(gè)部分再經(jīng)過(guò)硅膠柱層析得到化合物8（16 mg）．

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色針晶（丙酮）；m．p．：273～275℃；易溶于丙酮，甲醇，難溶于氯仿．HCl－Mg反應(yīng)顯紅色，磷鉬酸－乙醇液噴后薄層板在紫外燈下顯亮黃色熒光．UVλmax（MeOH）：220，350．IRυmax（KBr）∶ 1 605，1 658，3 328．1H－NMR（400 MHz，DMSO－d6）δ：9．36（1H，s，3－OH），12．98（1 H，s，5－OH），6．21（1H，d，J＝2．0 Hz，4－H），10．83（1 H，s，7－OH），6．56（1H，d，J＝2．0 Hz，H－6），7．001（1H，s，H－4＇），7．336（2 H，s，H－2′，6′），3．893 （6 H，s，－OCH3）．13C－NMR（100 MHz，DMSO－d6）δ∶148．63（C－2），140．28（C－3），182．28（C－4），164．12（C－5），99．28（C－6），164．58（C－7），94．66（C－8），157．80（C－9），104．79（C－10），120．84（C－1′），104．19（C－2′，6′），161．86（C－3′，5′），104．05（C－4′），56．81（－OCH3）．對(duì)照文獻(xiàn)數(shù)據(jù)［3－4］，鑒定其為3，5，7－三羥基－3′，5′－二甲氧基黃酮．

化合物2：黃色針晶（丙酮），易溶于丙酮．碘化鉍鉀顯紅色，顯示為生物堿類(lèi)化合物．ESI－MS m／z∶366．1［M＋H］＋，推測(cè)該化合物的分子式為C22H24O4N．UVλmax（MeOH）：289，338，420．1 Rυmax（KBr）：3 411，1 599，1 567，1 505，1 456，1 372，1 277，1 216，1 113，1 022，957，817．1HNMR（400 MHz，DMSO－d6）δ∶9．89（1H，s，H－8），4．84（3H，s，H－2），4．83（3H，s，H－3），4．11（3 H，s，H－9），3．89（3 H，s，H－10），3．16（2 H，t，H－5），2．98（3 H，s，H－13）．13C－NMR（100 MHz，DMSO－d6）δ∶61．97（C－6），56．88（C－10），56．72（C－9），56．02（C－2），55．72（C－3），26．71（C－5），17．58（C－13）．HMBCδ∶26．71（C－5），61．97（C－6）．該化合物的物理性質(zhì)與文獻(xiàn)報(bào)道［5－9］一致，故確定為去氫紫堇堿．

化合物3：白色針晶（丙酮），溶于丙酮，硫酸－乙醇噴霧顯紅色，在紫外（254 nm）燈下無(wú)熒光．1H－NMR （400 MHz，DMSO－d6）∶0．65（3H，s，H－18），0．98（3 H，s，H－19），δ0．80（3 H，s，H－21），0．89（3H，s，H－26），0．90（3H，s，H－27），0．95（3 H，s，H－29），3．66（1 H，m，H－3），5．32（1H，H－6），4．88（2H，m，H－22，23），4．20（1H，d，J＝6．9）．13C－NMR（100 MHz，DMSO－d6）∶38．7（C－1），31．8（C－2），77．3（C－3），42．2（C－4），140．9（C－5），121．7（C－6），31．8（C－7），50．0（C－8），51．05（C－9），36．7（C－10），21．0（C－11），39．8（C－12），45．6（C－13），56．6（C－14），24．3（C－15），28．9（C－16），55．9（C－17），12．2（C－18），19．9（C－19），40．2（C－20），21．4（C－21），138．5（C－22），129．3（C－23），56．6（C－24），29．7（C－25），18．5（C－26），19．5（C－27），25．3（C－28），11．5（C－29），101．26（Glu－1），77．22（Glu－2），73．94（Glu－3），70．59（Glu－4），61．57（Glu－5），60．83（Glu－6）．綜合上述信息推測(cè)該化合物為△5，22豆甾醇－3－O－β－D－葡萄糖苷．NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10－11］對(duì)照一致，確定化合物為△5，22豆甾醇－3－O－β－D－葡萄糖苷．

化合物4：白色固體（氯仿），在紫外（254 nm）燈下無(wú)熒光，硫酸－乙醇，磷鉬酸－乙醇條件下均不顯 色．ESI－MS m／z∶198．2 ［M］＋，H－NMR（400 MHz，CDCl3）δ∶0．856（6 H，t），1．255［H－（2～13），m］．以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道一致，鑒定該化合物為正十四烷．

化合物5：白色固體（氯仿），在紫外（254 nm）燈下無(wú)熒光，硫酸－乙醇溶液和磷鉬酸乙醇條件下均不顯色．ESI－MS m／z∶212．2 ［M］＋，1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ∶0．90（6H，t），1．253［H－（2～14），m］．確定該化合物為正十五烷．

化合物6：白色固體（氯仿），在紫外（254 nm）燈下無(wú)熒光，硫酸乙醇，磷鉬酸乙醇條件下均不顯色．ESI－MS m／z ∶ 250．3 ［M］＋，1H－NMR（400 MHz，CDCl3）δ∶0．86（6 H，t），1．26［H－（2～17），m］．確定為正十八烷．

化合物7：白色固體（氯仿），在紫外（254 nm）燈下無(wú)熒光，硫酸－乙醇，磷鉬酸－乙醇條件下均不顯色．1H－NMR（400 MHz，CDCl3）δ∶1．034（6 H，t），1．152［H－（2～18），m］．13C－NMR（100 MHz，CDCl3）δ∶14．189（C－1），14．125（C－25），22．706－37．407［C－（2～18）］．鑒定該化合物為正十九烷．

化合物8：白色固體（氯仿），在紫外（254 nm）燈下無(wú)熒光，硫酸乙醇，磷鉬酸乙醇條件下均不顯色．ESI－MS m／z∶310．4 ［M］＋，1H－NMR（400 MHz，CDCl3）δ∶0．85（6H，t），1．25［H－（2～21），m］．鑒定該化合物為正二十二烷．

化合物9：白色固體（氯仿），在紫外（254 nm）燈下無(wú)熒光，硫酸，磷鉬酸條件下均不顯色．ESIMS m／z∶338．4 ［M］＋，1H－NMR（400 MHz，CDCl3）δ∶0．857（6 H，t），1．25［H－（2～23），m］．鑒定該化合物為正二十四烷．

化合物10：白色蠟狀固體（氯仿），在紫外燈下不顯色，磷鉬酸和硫酸烘烤后均不顯色．1H－NMR（400 MHz，CDCl3）δ∶0．88（6 H，t，H－1，25），0．84［46H，m，H－（2～24）］．13C－NMR（100 MHz，CDCl3）δ∶14．12（C－1，25），22．7～38．15［C－（2～24）］．參照文獻(xiàn)［13］，鑒定該化合物為正二十五烷．

4 討 論

從藎草中分離得到10個(gè)化合物，其中化合物1～3為首次從該種植物中分離得到．其中1為黃酮，2為生物堿，3為三萜苷類(lèi)化合物，都具有一定的生理活性．現(xiàn)代藥理研究表明：1具有廣泛的生理作用，如抗炎癥、抗過(guò)敏、抑制細(xì)菌、抑制病毒、預(yù)防肝病、防止血栓形成、并具有護(hù)肝抗癌、有效活化細(xì)胞、增強(qiáng)人體免疫力、抗氧化、延緩衰老、對(duì)心腦血管疾病有防止和改善微循環(huán)等作用，能被人體迅速吸收，能通過(guò)血腦屏障，能深入脂肪組織［14］．2是延胡索治療心血管疾病的有效成分，具有擴(kuò)張冠狀血管、提高冠脈血流量、改善冠脈血流量、改善心肌耐缺氧能力等作用，對(duì)心肌缺血、壞死亦有保護(hù)作用［15］．3可以抑制人肝癌耐藥細(xì)胞Hep G2／ADM增殖并誘導(dǎo)其凋亡，作用機(jī)制可能與線粒體功能障礙及抑制c－Raf／MEK／ERK通路的活化有關(guān)［16］．實(shí)驗(yàn)結(jié)果豐富了藎草中化合物的類(lèi)型，為進(jìn)一步研究藎草的藥理活性成分奠定了一定的基礎(chǔ)．

致謝

感謝湖北省教育廳優(yōu)秀中青年人才科研項(xiàng)目組織的資助．

［1］中國(guó)科學(xué)院植物研究所．中國(guó)植物志［M］．北京：科學(xué)出版社，1984：218－220．

［2］Nobru S，Makotog K．Extracting Yellow Dye from Arthraxon hispidus Makino：JP，7300164［P］2004－08－26．

［3］王斌，李慧梁，湯建．藜蘆的黃酮類(lèi)化學(xué)成分研究［J］．藥學(xué)服務(wù)與研究，2007，7（5）：347－349．

［4］Yang Xiao Dong，Mei Shuang Xi，Yang Rong．Study on the chemical constitutents of lagotis yunnanesis［J］．Natural product research and development，2002，14（6）：1－3．

［5］王文蜀，肖巍，喻蓉．中藥延胡索化學(xué)成分研究［J］．中央民族大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，16（1）：80－85．

［6］陳屏，楊峻山．蒲葵籽化學(xué)成分研究［J］．中草藥，2007，38（5）：665－667．

［7］許翔鴻，王崢濤，余國(guó)奠．延胡索中生物堿成分的研究［J］．中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，33（6）：483－486．

［8］張曉麗，曲楊，侯家鳴．延胡索的化學(xué)成分［J］．沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，25（7）：537－539．

［9］肖艷華，帥維，高婷，等．去氫紫堇堿的結(jié)構(gòu)［J］．武漢工程大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，8（34）：26－30．

［10］王延年，艾路，喬延江．沙漠嘎種子化學(xué)成分的分離與鑒定［J］．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2004，10（3）：345－347．

［11］劉桂艷，鄭健，余振喜．五葉木通莖甾體和三萜成分研究［J］．中藥材，2005，28（12）：1060－1062．

［12］秦楓．川佛手化學(xué)成分的研究［D］．四川：西南交通大學(xué)，2008，30－34．

［13］張前軍，楊小生，朱海燕．假木豆脂溶性成分研究［J］．貴州 大 學(xué) 學(xué)報(bào)：自 然科學(xué)版，2006，23（3）：270－271．

［14］趙聲蘭，陳朝銀，葛峰，等．核桃油功效成分研究進(jìn)展［J］．云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，33（6）：71－74．

［15］蔣變榮，吳慶仙，施化蓮，等．脫氫紫堇堿對(duì)心血管系統(tǒng)的藥理作用［J］．藥學(xué)學(xué)報(bào)，1982，17（1）：61．

［16］石俊敏，張冬梅，姚楠，等．三萜皂苷Saxifragifolin D抑制人肝癌耐藥細(xì)胞HepG2／ADM生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用研究［J］．中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（1）：34－38．