陶令峰

（武漢大學(xué)藥學(xué)院 ，湖北 武漢 430071）

0 引 言

骨質(zhì)疏松癥是常見(jiàn)的老年病之一，是嚴(yán)重危害老年人健康、致殘的重要原因．雙磷酸鹽是防治骨質(zhì)疏松癥的有效藥物，迄今己開(kāi)發(fā)出十幾種，包括依替磷酸鈉（Etidronate）、帕米磷酸鈉（Pamidronate）、阿侖磷酸鈉（Alendronate）、伊班膦酸鈉（Ibandronate）等［1－3］．雙磷酸鹽類(lèi)藥物對(duì)雜質(zhì)亞磷酸鹽有嚴(yán)格的限度要求，一般不得過(guò)0．5%～1．0%［4－5］．

雙麟酸鹽是以P—C—P鍵為結(jié)構(gòu)特征，文獻(xiàn)報(bào)道其精制亞磷酸鹽大多采用醇類(lèi)溶劑進(jìn)行精制［6－8］，但是精制過(guò)程中有可能產(chǎn)生基因毒性雜質(zhì)．在歐盟委員會(huì)聯(lián)合研究中心（JRC））Benigni R，Bossa C，TcheremenskaiaO＆Worth A 發(fā)布《Development of structural alerts for the in vivo micronucleus assay in rodents》中明確指出，有下列結(jié)構(gòu)的雙磷酸酯類(lèi)具有基因毒性［9］：

注：R代表烷基要求碳鏈小于5（有可能被鹵素取代），或者是芐基R1代表是除了OH，SH，O－，S－以外的任何原子或基團(tuán)．

此外，用醇類(lèi)溶劑精制雙磷酸鹽容易形成溶劑化合物［10］，用乙醇形成半乙醇化合物或者1／3的乙醇化合物、半丁醇化合物［10］，同時(shí)筆者發(fā)現(xiàn)用甲醇和異丙醇都存在同樣問(wèn)題．尋找新的雙磷酸鹽類(lèi)藥物精制工藝成為該類(lèi)藥物工業(yè)化的關(guān)鍵．采用非醇類(lèi)溶劑（丙酮和甲基異丁酮）精制的精制工藝可以很好的達(dá)到藥典要求［4－5］，該研究具有較大的市場(chǎng)前景．

1 實(shí)驗(yàn)部分

1．1 試劑與儀器

乙醇、丙酮 、甲基異丁基酮分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)藥劑有限公司生產(chǎn)．試驗(yàn)用水為去離子的純化水．

1．2 溶劑檢測(cè)條件

儀器：Agilent 7890N及FID檢測(cè)條件見(jiàn)表1．

1．3 精制工藝研究

1．3．1 精制工藝原理 亞磷酸鹽雜質(zhì)溶于水，但產(chǎn)物也溶于水，適當(dāng)析晶溶劑是工藝的重點(diǎn)．雙磷酸鹽類(lèi)藥物精制工藝大多采用甲醇、乙醇等醇類(lèi)溶劑［6－8］，采用醇類(lèi)溶劑精制效果好，但是無(wú)法避免生成基因毒性雜質(zhì)和溶劑化合物．

本試驗(yàn)選取丙酮和甲基異丁基酮作為精制的反向溶劑對(duì)伊班膦酸鈉和帕米磷酸鈉進(jìn)行精制，通過(guò)測(cè)定精制前后亞磷酸鹽含量及產(chǎn)物的殘留溶劑，檢測(cè)該精制工藝的效果．

表1 色譜條件Table 1 Chromatographic conditions

1．3．2 采用醇類(lèi)溶劑基因毒性問(wèn)題 如用醇類(lèi)精制可能會(huì)存在以下副反應(yīng)，生成雙磷酸酯．

雙膦酸鹽類(lèi)藥物具有上面通用的結(jié)構(gòu)式，在用醇類(lèi)溶劑精制過(guò)程中，雙膦酸可以和醇上面羥基反應(yīng)生成酯，該類(lèi)警示結(jié)構(gòu)已經(jīng)明確具有基因毒性．

1．3．3 乙醇精制法 取伊班膦酸鈉5．0 g，加入20 m L去離子水，攪拌使溶解，緩慢加入4 m L乙醇（分析純），有大量白色固體析出，攪拌2～3 h后，抽濾，溫度40～50℃，真空度≤－0．08 MPa，真空干燥20 h，得樣品3．5 g．

取帕米磷酸鈉5．0 g，加入15 m L去離子水，攪拌使溶解，緩慢加入5 m L乙醇（分析純），有大量白色固體析出，攪拌2～3 h后，抽濾，溫度40～50℃，真空度≤－0．08 MPa，真空干燥20 h，得樣品3．8 g．

參照《中國(guó)藥典》（2010年版）伊班膦酸鈉和帕米磷酸鈉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［4－5］，采用硫代硫酸鈉滴定法測(cè)亞磷鹽含量，氣相色譜法測(cè)殘留溶劑，精制結(jié)果見(jiàn)表2，殘留溶劑圖譜，如圖1、2所示．

表2 精制數(shù)據(jù)結(jié)果Table 2 Rssults of refined data

1．3．4 丙酮精制法 取伊班膦酸鈉5．0 g，加入15 m L去離子水，攪拌使溶解，緩慢加入5 m L丙酮（分析純），有大量白色固體析出，攪拌2～3 h后，抽濾，溫度40～50℃，真空度≤－0．08 MPa，真空干燥20 h，得樣品4．5 g．

取帕米磷酸鈉5．0 g，加入15 m L去離子水，攪拌使溶解，緩慢加入5 m L丙酮（分析純），有大量白色固體析出，攪拌2～3 h后，抽濾，溫度40～50℃，真空度≤－0．08 MPa，真空干燥20 h，得樣品4．0 g．

參照《中國(guó)藥典》（2010年版）伊班膦酸鈉和帕米磷酸鈉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［4、5］，采用硫代硫酸鈉滴定法測(cè)亞磷酸鹽含量，氣相色譜法測(cè)殘留溶劑，結(jié)果見(jiàn)表3，殘留溶劑圖譜，如圖1、2所示．

表3 精制數(shù)據(jù)結(jié)果Table 3 Rssults of refined data

1．3．5 甲基異丁基酮精制法 取伊班膦酸鈉5．0 g，加入50 m L甲基異丁基酮（分析純），加熱至40～50℃，攪拌2～3 h后，冷卻，抽濾，溫度40～50℃，真空度≤－0．08 MPa，真空干燥20 h，得樣品4．5 g．

取帕米磷酸鈉約5 g，加入50 m L甲基異丁基酮（分析純），加熱至40～50℃，攪拌2～3 h后，冷卻，抽濾，溫度40～50℃，真空度≤－0．08 MPa，真空干燥20 h，得樣品4．6 g．

參照《中國(guó)藥典》（2010年版）伊班膦酸鈉和帕米磷酸鈉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［4－5］，采用硫代硫酸鈉滴定法測(cè)亞磷酸鹽含量，氣相色譜法測(cè)殘留溶劑，結(jié)果見(jiàn)表4，殘留溶劑圖譜，如圖1、2所示．

表4 精制數(shù)據(jù)結(jié)果Table 4 Rssults of refined data

圖1 殘留溶劑圖譜 （伊班膦酸鈉）Fig．1 Rssults of residual solvents（Ibandronate）

圖2 殘留溶劑圖譜（帕米磷酸鈉）Fig．2 Rssults of residual solvents（Pamidronate）

2 結(jié)果與討論

通過(guò)表2～4中的試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果表明，采用傳統(tǒng)的醇類(lèi)溶劑（乙醇）精制雙膦酸藥物，殘留溶劑均超過(guò)限度5 000 mg／kg的藥典要求，形成的為乙醇化合物．采用非醇類(lèi)溶劑（丙酮和甲基異丁基酮）精制殘留溶劑在20～100 mg／kg，遠(yuǎn)小于限度5 000 mg／kg的藥典要求，避免了溶劑化的問(wèn)題．

采用丙酮和甲基異丁基酮作為精制溶劑的雙磷酸鹽類(lèi)精制工藝均能取得較好的精制效果，亞磷酸鹽的精制一次可以下降70%～80%．

而非醇類(lèi)溶劑（丙酮和甲基異丁基酮）的雙磷酸鹽精制工藝，因使用非醇類(lèi)溶劑，避免醇和雙磷酸結(jié)構(gòu)反應(yīng)生成雙磷酸酯，生成基因毒性雜質(zhì)，規(guī)避了基因毒性風(fēng)險(xiǎn)．

3 結(jié) 語(yǔ)

雙磷酸鹽類(lèi)工業(yè)化過(guò)程多采用醇類(lèi)作為精制溶劑，存在一定的基因毒性風(fēng)險(xiǎn)．用丙酮和甲基異丁基酮作為精制溶劑的雙磷酸鹽精制工藝，可以避免精制工藝的基因毒性和溶劑化問(wèn)題，是一個(gè)比較好的工業(yè)化路線，值得進(jìn)一步研究和推廣．

致謝

首先要感謝課題組的老師，在文章的寫(xiě)作過(guò)程中，他們幫助我克服了很多的難題；另外，要感謝對(duì)本文進(jìn)行分析工作的同事，他們?yōu)槲姨峁┝撕芏嗑_的數(shù)據(jù)．

［1］張宏業(yè)，鄒春溶 ．雙膦酸鹽類(lèi)藥物的研究進(jìn)展［J］．中國(guó)藥業(yè)，1999，8（2）：39－39．

［2］商紅，張石革．雙磷酸鹽類(lèi)藥物的應(yīng)用及進(jìn)展藥物與臨床［J］．中國(guó)藥房，2003，14（4）：245－246．

［3］閔理，王以朋，吳志宏 ．二膦酸鹽類(lèi)藥物治療骨質(zhì)疏松癥的研究進(jìn)展［J］．中國(guó)骨與關(guān)節(jié)外科，2009，4（2）：131－133．

［4］國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（二部）［S］．2010版．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：457－458，477－487．

［5］國(guó)家藥典委員會(huì)．國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn) ［S］．41冊(cè)．2004：160－161．

［6］劉曉霞，薛翌佳．阿侖硫酸鈉的合成［J］．現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生 ，2011，27（23）：3560－3561．

［7］趙凱，侯建平，簡(jiǎn)勇學(xué)．伊班膦酸鈉的合成研究［J］．應(yīng)用化工，2011，40（3）：556－558．

［8］黃毅，彭國(guó)強(qiáng)．一種化合物伊班膦酸鈉的制備方法：中國(guó)，CN101863919［P］．2010－07－05．

［9］Romualdo B，Cecilia B，Olga T，et al．Development of structural alerts for the invivo micronucleus assay in rodents．［DB］．2009，http：／／ihcp．jrc．ec．europa．eu／our＿labs／computational＿toxicology／doc／EUR＿23844＿EN．pdf

［10］特瓦制藥公司．固體和晶型伊班膦酸鈉的制備方法：中國(guó)，CN101022812［P］．2007－02－25．