陸永光，李 浪，符春暉，嚴(yán) 華，蘇 強，陳妍梅，黃軍章

冠狀動脈粥樣硬化是一種慢性免疫和炎癥性疾病[1]。有研究證實，冠心病患者輔助性T細(xì)胞(Th)1/Th2的失衡參與了冠狀動脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生、發(fā)展及急性冠脈綜合征(ACS)的發(fā)病過程[2]。內(nèi)皮細(xì)胞微粒(EMPs)是內(nèi)皮細(xì)胞在各種病理因素的刺激下被激活或凋亡后所釋放出來的微小囊泡。近年來研究表明，冠心病患者外周血中EMPs水平的明顯升高能反映內(nèi)皮功能及其障礙的程度[3]。但EMPs能否反映冠心病患者血管炎癥的反應(yīng)程度，以及與ACS患者斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系尚不清楚。本研究探討了冠心病患者外周血EMPs水平與Th1/Th2細(xì)胞因子水平的關(guān)系，以揭示外周血EMPs水平升高在冠心病發(fā)病中的意義及其作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 病例入選標(biāo)準(zhǔn) (1)穩(wěn)定性心絞痛(SA)：勞累引起的胸骨下或心前區(qū)壓榨性、緊縮性疼痛或不適，經(jīng)休息或舌下含服硝酸甘油片5 min內(nèi)可緩解；(2)不穩(wěn)定性心絞痛(UA)：包括初發(fā)心絞痛、勞累惡化性心絞痛和靜息性心絞痛，且在入院前48 h內(nèi)至少發(fā)作過1次心絞痛。(3)急性心肌梗死(AMI)：入選前24 h內(nèi)心肌缺血癥狀持續(xù)30 min以上，休息或服用硝酸酯類藥物無緩解；心肌損傷標(biāo)記物肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌鈣蛋白水平超過參考范圍上限的2倍；(4)對照組：同期有胸痛癥狀，但無心電圖缺血改變，且冠狀動脈造影檢查正常的住院患者。

1.2 病例排除標(biāo)準(zhǔn) (1)感染、惡性腫瘤、嚴(yán)重肝腎功能不全；結(jié)締組織疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病及自身免疫性疾?。?2)其他心臟疾病，如心肌炎、心內(nèi)膜炎、風(fēng)濕性心臟??；(3)近3周內(nèi)服用抗感染藥物、免疫抑制劑者。

1.3 臨床資料 選取2011年入住我院的SA患者27例(SA組)、UA患者28例(UA組)、AMI患者30例(AMI組)及同期冠狀動脈造影檢查正常的住院患者20例(對照組)為研究對象，均符合入選標(biāo)準(zhǔn)。除超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)外，4組間其他指標(biāo)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，見表1)。

表1 4組受檢者臨床資料比較Table 1 Comparison of the clinical data in four groups

注：SA=穩(wěn)定性心絞痛，UA=不穩(wěn)定性心絞痛，AMI=急性心肌梗死，ACEI=血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑，ARB=血管緊張素受體拮抗劑，hs-CRP=超敏C反應(yīng)蛋白；與SA組和對照組比較，*P<0.05；△為F值

1.4 方法

1.4.2 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測細(xì)胞因子 對照組和SA組于入院后次日清晨空腹、UA組和AMI組于入院后即刻用真空抗凝試管抽取患者新鮮外周靜脈血4 ml，將全血以3 000 r/min離心15 min，取上層血清分裝后存于-80 ℃冰箱中待測。所有標(biāo)本收集后采用ELISA法集中檢測血清中γ干擾素(IFN-γ)、白介素(IL)-2、IL-4和IL-10的表達(dá)水平，操作嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 EMPs水平比較 4組受檢者的血漿EMPs水平間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(H=80.925，P=0.000)，其中UA組和AMI組血漿EMPs水平明顯高于對照組和SA組，SA組明顯高于對照組，AMI組明顯高于UA組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表2)。

表2 4組受檢者血漿EMPs水平比較個/μl)Table 2 Comparison of EMPs level in four groups

注：與對照組和SA組比較，*P<0.05；與對照組比較，▲P<0.05；與UA組比較，△P<0.05

2.2 細(xì)胞因子水平比較 4組受檢者的血清IFN-γ和IL-2水平間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)，其中UA組和AMI組血清IFN-γ和IL-2水平明顯高于對照組和SA組，SA組血清IFN-γ和IL-2水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。4組受檢者的血清IL-4和IL-10水平間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，見表3)。

2.3 相關(guān)性分析 EMPs與IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10相關(guān)分析結(jié)果顯示，EMPs水平與IFN-γ和IL-2水平呈正相關(guān)(r=0.795，P=0.000；r=0.804，P=0.000)，與IL-4和IL-10水平無直線相關(guān)性(r=-0.088，P=0.374；r=-0.156，P=0.112)。

組別例數(shù)IFN-γIL-2IL-4IL-10對照組20 7 5±1 69 8±2 7 18 6±2 531 3±5 3SA組2710 6±2 4△12 6±2 9△18 4±2 130 3±3 6UA組2826 5±6 4?21 9±3 8?17 8±1 430 0±3 2AMI組3032 6±6 0?28 4±5 2?17 6±1 629 3±3 6H值83 84083 6091 6001 090P值0 0000 0000 1930 357

注：與對照組和SA組比較，*P<0.05；與對照組比較，△P<0.05

3 討論

不穩(wěn)定冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂和血栓形成是ACS的主要發(fā)生機(jī)制。炎癥不僅在介導(dǎo)動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用，而且是導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定的關(guān)鍵因素。近年來研究表明，ACS患者存在明顯的Th1/Th2細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)失衡，主要以Th1分泌的細(xì)胞因子如IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6、IL-12和IL-18等水平明顯增加為主，且與冠狀動脈病變嚴(yán)重程度相關(guān)，表明其對斑塊的不穩(wěn)定發(fā)揮著重要作用[4-6]。本研究結(jié)果表明，AMI組和UA組患者IFN-γ和IL-2水平明顯高于對照組和SA組，而4組IL-4和IL-10水平間無明顯差異，提示Th1細(xì)胞因子的變化不僅與動脈粥樣硬化斑塊形成有關(guān)，還可能參與促進(jìn)斑塊的不穩(wěn)定。

作為內(nèi)皮細(xì)胞激活或凋亡的產(chǎn)物，EMPs可真實地反映內(nèi)皮細(xì)胞的功能和狀態(tài)。近年來，在多種具有顯著內(nèi)皮功能受損和功能障礙的疾病如冠心病、高血壓、糖尿病、多發(fā)性硬化、血栓性血小板減少性紫癜、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和先兆子癇等患者中均可觀察到血漿EMPs水平的明顯升高，因此EMPs可作為內(nèi)皮功能障礙的標(biāo)志物[3,7]。本研究結(jié)果顯示，SA患者血漿EMPs水平明顯高于對照組，表明EMPs可以反映冠心病患者內(nèi)皮功能障礙的程度。而AMI組和UA組患者血漿EMPs水平明顯高于SA患者，表明EMPs可能與冠心病患者動脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性相關(guān)。

本研究還顯示，冠心病患者血漿EMPs水平與Th1型細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2呈正相關(guān)，而與Th2型細(xì)胞因子IL-4和IL-10無直線相關(guān)性。鑒于IFN-γ和IL-2水平的升高與冠狀動脈粥樣硬化斑塊的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，因此，與IFN-γ和IL-2水平明顯相關(guān)的EMPs可能也在一定程度上反映了斑塊的炎癥反應(yīng)程度。Th1/Th2失衡所導(dǎo)致的相關(guān)細(xì)胞因子分泌異常及其所導(dǎo)致的斑塊炎癥和不穩(wěn)定，可能是導(dǎo)致EMPs生成增多的重要原因。

但更為重要的是，既往研究還表明，EMPs對炎癥、凝血過程及血管功能等均有一定影響，與心血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)。EMPs不僅可以反映內(nèi)皮的功能狀態(tài)，還是內(nèi)皮功能障礙的標(biāo)志物，EMPs從內(nèi)皮細(xì)胞釋放的過程中攜帶了多種生物活性物質(zhì)，可以作為細(xì)胞遞質(zhì)的有效載體參與細(xì)胞信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)和效能的發(fā)揮。從心肌梗死患者血循環(huán)中提取的EMPs可選擇性地?fù)p害內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮(NO)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路導(dǎo)致內(nèi)皮舒張功能障礙。EMPs還參與了凝血的過程。EMPs表面含有血管性血友病因子，它可以促進(jìn)血小板聚集，形成血栓[8]。EMPs還可以促進(jìn)黏附分子的產(chǎn)生和促進(jìn)炎性細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)合[9]。此外，EMPs還具有調(diào)節(jié)免疫功能的作用[10]。本研究結(jié)果提示，EMPs不僅反映冠心病患者內(nèi)皮功能障礙和斑塊炎癥反應(yīng)的程度，可能還通過影響Th1/Th2細(xì)胞因子的分泌，參與對Th1/Th2細(xì)胞分化和功能的調(diào)控，參與斑塊的形成和炎癥過程，促進(jìn)斑塊的不穩(wěn)定。但EMPs是否參與了該過程以及其程度有待后續(xù)研究證實。

綜上所述，冠心病患者外周血中EMPs水平和Th1/Th2失衡密切相關(guān)，在一定程度上反映了內(nèi)皮功能障礙、斑塊內(nèi)炎癥反應(yīng)程度和斑塊的穩(wěn)定性。EMPs還可能通過調(diào)控Th1/Th2細(xì)胞分化和功能，參與冠狀動脈動脈粥樣硬化的免疫和炎癥反應(yīng)過程，在斑塊形成和不穩(wěn)定中具有重要的作用。

1 段鵬，謝英.膽固醇代謝失調(diào)與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的關(guān)系[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2010，13(1)：207.

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