厲向 夏君慧 張旭

血清抗髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白抗體對多發(fā)性硬化的診斷意義

厲向 夏君慧 張旭

目的 探討血清抗髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白（MOG）抗體對多發(fā)性硬化（MS）的診斷意義。 方法 利用放射免疫方法分別測定23例MS、57例臨床孤立綜合征（CIS）、41例其他炎癥性神經(jīng)系統(tǒng)疾病（OIND）、37例非炎癥性神經(jīng)系統(tǒng)疾病（ONND）患者的血清抗MOG抗體水平。并對MRI發(fā)現(xiàn)中樞神經(jīng)脫髓鞘患者的病灶負荷進行測定，將其與患者血清中抗MOG抗體水平作相關(guān)性分析。通過繪制受試者受試者工作特征（ROC）曲線，比較血清抗MOG抗體水平、腦脊液IgG指數(shù)、24h鞘內(nèi)IgG合成率等參數(shù)對MS診斷的敏感性和特異性。結(jié)果 MS組患者血清中抗MOG抗體的水平及抗MOG抗體陽性率明顯高于CIS組、OIND組和ONND組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．01）。MS組活動期血清抗MOG抗體的水平及陽性率高于緩解期（P＜0．05）。中樞脫髓鞘病變（MS和CIS）患者MRI顯示的病灶負荷與其血清抗MOG抗體水平呈正相關(guān)（P＜0．01）?？筂OG抗體的ROC曲線下面積，高于腦脊液IgG指數(shù)、24h鞘內(nèi)IgG合成率。結(jié)論 血清抗MOG抗體可以成為可靠的診斷MS的生物學(xué)指標(biāo)之一。

髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白自身抗體 多發(fā)性硬化 放射免疫分析 受試者工作特征曲線 病灶負荷

多發(fā)性硬化（multiple sclerosis，MS）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)對髓鞘抗原發(fā)生自身攻擊性免疫應(yīng)答所致的炎性脫髓鞘疾病，是導(dǎo)致中青年致殘的常見神經(jīng)科疾病。迄今為止，MS仍缺乏公認的診斷、判斷預(yù)后和指導(dǎo)其治療決策的特異性生物學(xué)標(biāo)志。抗髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白（myelin oligodendrocyte glycoprotein，MOG）抗體是在MS髓鞘脫失過程中的一種重要效應(yīng)分子[1]，已成為國外關(guān)于MS生物學(xué)標(biāo)志研究的熱點，但國內(nèi)鮮有此類研究[2]。本研究檢測MS患者血清中的抗MOG抗體，分析血清抗MOG抗體與MS臨床表征及MRI、病灶負荷的關(guān)系，探討抗MOG抗體檢測在MS診斷中的臨床意義。

1 對象和方法

1.1 對象 2006-12—2007-12本院收治MS患者23例（MS組），臨床孤立綜合征（clinically isolated syndrome，CIS）患者57例（CIS組），其他炎癥性神經(jīng)系統(tǒng)疾病（other inflammatory neurological diseases，OIND）患者41例（OIND組），以及非炎癥性神經(jīng)系統(tǒng)疾?。╫ther non-inflammatory neurological diseases，ONND）患者37例（ONND組）。MS組男10例，女13例；年齡19～66（40.61± 13.64）歲；病程3個月～20年，平均（6.84±6.82）年；發(fā)病2～20次，均≈2次，臨床表現(xiàn)或MRI表現(xiàn)為時間多發(fā)、空間多發(fā)，符合2005年McDonald標(biāo)準(zhǔn)[3]，均為緩解復(fù)發(fā)型多發(fā)性硬化（relapsing remitting MS，RRMS）；入組時均為2個月內(nèi)未接受治療，同時進行殘疾狀態(tài)擴展評分（expanded disability status scale，EDSS），結(jié)果為2～7（4.06±1.98）分；其中獲得完整MRI數(shù)據(jù)7例，進行病灶負荷檢測；活動期（患者出現(xiàn)新的癥狀或者原來癥狀加重為活動期）10例，緩解期13例。CIS組男24例，女33例；年齡18～62（38.44±12.72）歲；均僅發(fā)作1次，發(fā)作時間＞24h；其顱內(nèi)或脊髓MRI均發(fā)現(xiàn)中樞神經(jīng)脫髓鞘病灶，符合2005年McDonald標(biāo)準(zhǔn)[3]；其中獲得完整的MRI數(shù)據(jù)5例，進行病灶負荷檢測。OIND組均為病毒性腦炎患者，男25例，女16例，年齡17～69（34.98± 13.42）歲。ONND組37例，男18例，女19例；年齡16～77（44.21±16.12）歲；其中腦梗死28例，慢性酒精中毒性腦病1例，腦白質(zhì)營養(yǎng)不良1例，腦膜癌1例，腦膠質(zhì)瘤1例，頭痛5例。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集及檢測設(shè)備 采集上述4組患者血清及腦脊液標(biāo)本158份，儲存于-70℃冰箱，采用單向免疫擴散方法檢測腦脊液及血清IgG、白蛋白。125I-MOGIgd融合蛋白（本實驗室制備25 000～35 000 cpm）[4]、羊抗人IgG（玉環(huán)南方試劑廠），稀釋液 PBS（pH 7.4，1%BSA、0.1%Tween-20、0.02mM NaCl），GC-1200型γ放射性檢測儀（中國科大創(chuàng)新股份有限公司），Signa1.5T超導(dǎo)型MRI儀（美國GE公司）。

1.2.2 定量評價鞘內(nèi)IgG合成的方程式 IgG指數(shù)=（腦脊液IgG/血清IgG）/（腦脊液Alb/血清Alb），IgG指數(shù)＞0.7為陽性。24h鞘內(nèi)IgG合成率：IgG合成率（mg/ 24h）=[（腦脊液IgG-血清IgG/369）-（腦脊液Alb-血清Alb/230）×（血清IgG/血清Alb）×0.43]×5。IgG合成率＞9mg/24h即為陽性。

1.2.3 人血清抗MOG抗體測定及病灶負荷測定 2μl血清加入25μl125I-MOGIgd融合蛋白，4℃低溫冰箱孵育過夜。加入羊抗人IgG 50μl（稀釋液1∶2稀釋），4℃低溫冰箱孵育過夜。4℃1 400 g低溫離心20min，吸取上清液，用γ放射性檢測儀測定沉淀的cpm值（該cpm值代表抗MOG抗體水平）。每個標(biāo)本反復(fù)測定3次，取平均值。病灶負荷測定方法：應(yīng)用Image pro plus6.0軟件。以O(shè)NND組的+1.96SD（3383）為界，大于者為陽性。

1.2.4 以2005年McDonaldMS診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]評價血清抗MOG抗體、IgG指數(shù)和IgG合成率對MS診斷的特異性和敏感性，并對4組數(shù)據(jù)進行ROC曲線分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件，計量資料首先進行正態(tài)性檢驗，符合正態(tài)分布的計量資料以表示，非正態(tài)分布計量資料用中位數(shù)表示。兩獨立樣本間均數(shù)比較采用t檢驗（方差齊性）或近似t檢驗（方差不齊）；多組樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法。兩個樣本率的比較采用χ2檢驗，若T＜5時，采用Fisher確切概率法。相關(guān)分析采用Pearson或Spearman分析。評價抗MOG抗體水平、腦脊液IgG合成率與IgG指數(shù)的診斷價值，做受試者工作特征（ROC）曲線進行比較。

2 結(jié)果

2.1 4組血清抗MOG抗體水平及陽性率的比較 見表1。

表1 4組血清抗MOG抗體水平及陽性率的比較

由表1可見，4組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=6.207，P=0.001）。進一步分析顯示，MS組的水平高于其他3組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.003、0.001、0.000）。CIS組與OIND組、ONND組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.142、0.117）?；颊哐蹇筂OG抗體陽性率遠高于CIS組、OIND組、ONND組（χ2=7.762，P=0.005；χ2=11.1，P=0.001；P=0.000）。CIS患者血清抗MOG抗體陽性率與OIND組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=1.181，P=0.277），與ONND組的陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.045）。

2.2 MS患者血清抗MOG抗體水平的性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.59，P=0.563）。MS患者年齡與血清抗MOG抗體水平無相關(guān)性（r=-0.111，P=0.661）。

2.3 MS患者抗MOG抗體水平與EDSS評分、病程的關(guān)系 Spearman等級相關(guān)分析顯示MS患者血清抗MOG抗體水平與EDSS評分無相關(guān)性（r=0.256，P= 0.304），與病程亦無相關(guān)性（r=-0.445，P=0.064）。

2.4 MS不同時期血清抗MOG抗體水平的比較 MS組活動期（10例）與緩解期（13例），其血清抗MOG抗體水平（cpm）分別為3 652±756、3 079±357，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=2.129，P=0.049）。MS組活動期與緩解期的陽性率分別是70%（7/10），23%（3/13），兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.04）。

2.5 血清抗MOG抗體水平與病灶負荷的相關(guān)性 12例中樞炎性脫髓鞘疾病（MS和CIS）患者的病灶負荷值和血清抗MOG抗體水平進行相關(guān)性分析，具有高度正相關(guān)性（r=0.822，P=0.001），見圖1。

圖1 12例中樞炎性脫髓鞘疾病患者的病灶負荷值和血清抗MOG抗體水平的相關(guān)性

2.6腦脊液免疫分析指數(shù)與抗MOG抗體的ROC曲線分析 見表2。

表2 4組腦脊液免疫分析指數(shù)

由表2可見，MS組IgG指數(shù)的陽性率與CIS組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.492，P=0.483），而與OIND組及ONND組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.036，P= 0.005；P=0.001）。MS患者IgG合成率的陽性率與CIS組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=2.247，P=0.134）。而與OIND組及ONND組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2= 6.538，P=0.011；χ2=10.455，P=0.001）。

2.7 血清抗MOG抗體、IgG指數(shù)和IgG合成率對MS診斷的特異性和敏感性 血清抗MOG抗體、鞘內(nèi)IgG合成率及IgG指數(shù)曲線下面積（AUC）分別為0.78±0.063（P=0.001）、0.68±0.073（P=0.035）及 0.58±0.082（P= 0.347）?？筂OG抗體的AUC數(shù)值雖大于鞘內(nèi)IgG合成率，但兩者的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.298）。3者聯(lián)合診斷的AUC是0.781±0.045，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P= 0.001）。腦脊液IgG合成率、IgG指數(shù)和抗MOG抗體3者聯(lián)合診斷MS與抗MOG抗體、腦脊液IgG合成率和IgG指數(shù)單一診斷的ROC曲線見圖2。

圖2 血清抗MOG抗體與腦脊液IgG指數(shù)、24h鞘內(nèi)IgG合成率和3者聯(lián)合對MS診斷的ROC曲線（A：血清抗MOG抗體與腦脊液IgG指數(shù)對MS診斷的ROC曲線；B：血清抗MOG抗體與24h鞘內(nèi)IgG合成率對MS診斷的ROC曲線；C：血清抗MOG抗體與3者聯(lián)合對MS診斷的ROC曲線）

3 討論

國內(nèi)外文獻報道中MS患者血清抗MOG抗體陽性率差異很大，且均較低。國外Mantegazza等[5]采用ELISA方法得出陽性率為13.7%；高楓等[2]同樣用ELISA方法得出陽性率為35.7%；Reindl等[6]應(yīng)用免疫印跡法，陽性率為38%；Lampasona等[7]盡管采用了RIA法，但其陽性率也僅為5.7%。本實驗室曾以MOGIgd融合蛋白為抗原建立ELISA法，陽性率為0%[8]?，F(xiàn)改進檢測手段，選用具有較高比放射性、高敏感性等優(yōu)點的放射性核素125I標(biāo)記MOGIgd融合蛋白，在此基礎(chǔ)上建立RIA方法，提高了血清抗MOG抗體檢測的敏感性，MS總體的陽性率為47.83%。本研究顯示CIS組、OIND組及ONND組的陽性率分別為17.85%、9.76%及2.70%，均低于MS組。絕大多數(shù)的研究顯示抗MOG抗體非MS患者所特有，在OIND、ONND患者，甚至在正常人都能檢測到抗MOG抗體，Tejada-Simon等[9]研究發(fā)現(xiàn)來源于MS患者血清的抗MOG抗體主要針對MOG1-60，而健康人血清的抗MOG抗體則是針對MOG54-218，提出針對MOG1-60的自身抗體與MS的發(fā)生有關(guān)。85%的MS患者在早期表現(xiàn)為CIS，Berger等[10]認為血清髓鞘抗體可作為一個預(yù)測CIS轉(zhuǎn)歸的指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)血清抗MOG抗體及抗MBP抗體陽性的CIS更早、更多地發(fā)展為CDMS。本研究CIS患者血清抗MOG抗體稍高于ONND組，但隨訪年限不足，未能將抗MOG抗體與CIS轉(zhuǎn)歸進行比較。

在多項隨機對照臨床試驗中，病灶負荷作為判斷藥物療效的客觀指標(biāo)之一[11]。病灶負荷與抗MOG抗體的關(guān)系如何，文獻中未見報道。本研究發(fā)現(xiàn)MS和CIS患者的病灶負荷與抗MOG抗體水平呈高度正相關(guān)性，支持MS脫髓鞘病灶與抗MOG抗體的產(chǎn)生有關(guān)，推測是由于抗MOG抗體的產(chǎn)生導(dǎo)致了髓鞘破壞，而髓鞘破壞導(dǎo)致更多的MOG抗原表位暴露，從而產(chǎn)生更多的抗MOG抗體，兩者互為因果。因此，抗MOG抗體水平變化或許可等同于MRI，來體現(xiàn)MS亞臨床髓鞘破壞。

反映CNS內(nèi)異常IgG合成的指標(biāo)包括寡克隆區(qū)帶（oligoclonal band，OCB）、IgG指數(shù)及IgG合成率，MS的Poser標(biāo)準(zhǔn)[12]將其作為診斷MS的實驗室依據(jù)。國外MS患者OCB、IgG合成率和IgG指數(shù)的陽性率分別為90%～95%、97%和88%～90%；國內(nèi)的陽性率較低[13]，分別為36.9%、60.4%和60%。本研究的結(jié)果與此相近，IgG合成率及IgG指數(shù)的陽性率均為43.48%。此外，這些指標(biāo)并非MS所特有，本研究OIND患者IgG合成率及IgG指數(shù)的陽性率分別為14.63%、12.20%，ONND IgG合成率及IgG指數(shù)的陽性率分別為8.11%、5.41%。本研究利用ROC方法來評價各項指標(biāo)的診斷效益。由圖2可見，血清抗MOG抗體水平和IgG合成率明顯大于IgG指數(shù)的AUC，提示血清抗MOG抗體及IgG合成率對MS均有一定的診斷價值。若同時聯(lián)合IgG合成率、IgG指數(shù)及血清抗MOG抗體共同診斷MS，作ROC曲線分析。結(jié)果顯示，其AUC（0.781）與單獨檢測血清抗MOG抗體（0.78）比較無差異，提示單獨檢測血清抗MOG抗體已能達到相當(dāng)?shù)脑\斷效率。

Markovic等[14]發(fā)現(xiàn)腦脊液抗MOG抗體水平在急性活動期MS有增高的趨勢，但與病情嚴(yán)重程度及病程無關(guān)。與本研究相符，MS活動期患者的血清抗MOG抗體水平及陽性率高于緩解期患者，但與病情嚴(yán)重程度、病程、年齡、性別以及EDSS評分均無關(guān)。

多種因素參與多發(fā)性硬化的發(fā)病機制以及治療過程，單一生物學(xué)指標(biāo)無法完成對多發(fā)性硬化診斷、病程及預(yù)后等預(yù)測。因此，同時檢查多個生物標(biāo)志物可能提供更好的敏感性和特異性[15]。我們認為血清抗MOG抗體可以成為可靠的診斷MS的生物學(xué)指標(biāo)之一。其對治療及預(yù)后的指導(dǎo)價值將在今后的實驗加以明確。

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Serum levels of anti-myelin oligodendrocyte glycoprotein antibody in diagnosis of multiple sclerosis

Objective To assess serum levels of anti-myelin oligodendrocyte glycoprotein(MOG)antibody in diagnosis of multiple sclerosis(MS)．Methods The serum levels of anti-MOG antibody were detected with radioimmunoassay(RIA)in 23 patients with MS,57 patients with clinically isolated syndrome(CIS),41 patients with other inflammatory neurological diseases(OIND) and 37 patients with other non-inflammatory neurological diseases(ONND)．The burden of disease(BOD)in patients with central nervous system demyelinating diseases was assessed by T2-weighted MRI and the relationship between anti-MOG antibody level and BOD was analyzed．The sensitivity and specificity of serum anti-MOG antibody,CSF IgG index,IgG 24-h synthesis rate for diagnosis of MS were evaluated with receiver operating characteristic curve(ROC)．Results The serum levels of anti-MOG antibody and positive rate in MS group were significantly higher than those in CIS group,OIND group and ONND group(P＜0．01)．The serum levels and positive rate of anti-MOG antibody in MS patients were correlated with disease activity(P＜0．05)．The serum levels of anti-MOG antibodies were correlated with BOD in patients with demyelinating disease(MS and CIS group)(P＜0．01)．In ROC curve the area under the curve(AUC)of anti-MOG antibody was larger than that of CSF IgG index and 24-h IgG synthesis rate．Conclusion The serum levels of anti MOG antibody can be used as a reliable biomarker for diagnosis of MS．

Anti-myelin oligodendrocyte glycoprotein antibody(anti-MOG antibody) Multiple Sclerosis(MS) Radioimmunoassay(RIA)Receiver operating characteristic curve(ROC curve) Burden of disease(BOD)

2013-03-08）

（本文編輯：楊麗）

溫州市科技局基金資助項目（Y20080094，Y20090004，Y20100275）

325000 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科

張旭，E-mail：zhangxu@wz.zj.cn