摘要：亞硝胺是三大強致癌食品污染物之一，普遍存在于腌制和熱加工食品中。本研究建立了一種基于液質聯(lián)用技術結合多級反應監(jiān)測模式掃描（MRM）檢測N亞硝胺的新型固相萃取液相色譜方法，可以快速直接檢測腌菜中9種N亞硝胺。實驗優(yōu)化了液相色譜分離與檢測條件，同時考察了4種固相萃取單柱（堿性氧化鋁Al2O3、C18、硅膠、硅藻土）和2種雙填料的混合固相萃取柱（Al2O3C18， Al2O3硅膠）吸附解析的凈化效果。結果表明，采用Al2O3C18混合柱純化，液相色譜檢測，外標法定量，對9種亞硝胺的回收率達75.7%～116.0%，檢出限為0.20～0.49 mg/L。采用本方法檢測不同產地的6類腌菜產品中亞硝胺含量，二甲基亞硝胺和二乙基亞硝胺的檢出率相對較高，分別為37.5%和25.0%，其中二乙基亞硝胺在雪里蕻腌菜中最高含量達59.1 mg/L，亞硝基嗎啉在所有樣品中未檢出。

關鍵詞：N亞硝胺；液相色譜；質譜；雙填料固相萃??；腌菜

1引言

N亞硝胺是世界公認的強致癌性食品污染物，在食品加工和貯藏過程中形成的亞硝胺是人體中亞硝胺的主要來源。腌制、油炸、煙熏、焙烤、飲用水等食品中均有檢測出亞硝胺的報道[1～5]。毒理學實驗證明，亞硝胺具有強大的細胞毒性、誘變性，可導致神經(jīng)中毒、腎中毒、致畸，誘導肝、肺、腸、胃等癌變，嚴重威脅人體健康[6]。

腌制食品是含亞硝胺的代表性食品，傳統(tǒng)的腌制工藝中由于其前體亞硝酸鹽及胺類的廣泛存在，或添加亞硝酸鹽作為防腐劑和發(fā)色劑，大大增加了亞硝胺的生成概率，因此對亞硝胺的檢測、控制亞硝胺的形成尤為重要[7，8]。目前，亞硝胺的測定主要通過水蒸汽蒸餾、液液萃?。↙LE）、固液萃取法（SLE）提取[9～12]，氣相色譜質譜（GCMS）[13，14]、氣相熱能分析儀（GCTEA）[15，16]、液相色譜（HPLC）[17～19]、氣相色譜[20]、液相色譜質譜串聯(lián)方法（HPLCMS）檢測[21，22]。但是腌菜樣品基質復雜，N亞硝胺含量相對較低，凈化分離難、不穩(wěn)定，常規(guī)檢測方法存在分析程序復雜、檢測種類少等缺點。目前對蔬菜類腌制食品中N亞硝胺類化合物的檢測報道較少。

固相萃取技術可以高效、快速并大批量處理樣品，不僅提高了分析質量和效率，減少有機溶劑使用量，節(jié)約成本，而且可以降低環(huán)境污染。Al2O3是一種常規(guī)無機萃取材料，穩(wěn)定性好，吸附性強；C18作為一種高效有機型萃取材料，適用范圍廣，也常被應用于食品污染物檢測分析的預處理[23]。本實驗首先采用HPLC/MS結合MRM掃描對9種N亞硝胺進行定性分析，根據(jù)9種亞硝胺的不同分子極性特點并結合腌菜樣品基質的復雜性研究單種填料和混合填料對亞硝胺的分離純化效果。建立了雙填料（Al2O3C18）混合固相萃取柱凈化腌菜亞硝胺提取樣品的新方法，經(jīng)高效液相色譜分離檢測，定量分析腌菜中的亞硝胺，取得了良好的實驗結果。本方法簡便、重現(xiàn)性好、實現(xiàn)了有機無機混合材料分離純化復雜基質樣品中的痕量亞硝胺，可用于普通實驗室對不同食品中N亞硝胺的快速直接檢測，為食品安全檢測和評價提供實際參考依據(jù)。

2實驗部分

2.1儀器與試劑

LTQXL超高效液相色譜質譜聯(lián)用儀（美國Thermo公司），15252998高效液相色譜儀（美國Waters公司）；VPODS C18 色譜柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm，日本SHIMADZU公司）；R3旋轉蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）；NEVAP氮吹儀（美國Organomation公司）；固相萃取裝置（天津Auto Science公司）；MilliQ Integral超純水機（美國Millipore公司）。

亞硝胺混合標準品（Nitrosamines，純度>98%）、冰乙酸（色譜純），均購自Sigma公司；甲醇、乙腈、甲酸、乙酸銨（色譜純，國藥公司）；固相萃取柱層析用C18（10 μm，美國Alltech公司）；Al2O3（100～200目，國藥公司）；硅膠（200～300目，青島海洋公司）；硅藻土（上海奉賢公司）。

2.2樣品預處理

2.2.1樣品提取從超市分別采購最新批次雪里蕻腌菜、酸豆角、腌蘿卜干、榨菜、冬菜及紅油豇豆，準確稱取上述樣品各10.0 g，加入20 mL純水，浸提4 h，初濾后，低溫真空旋蒸濃縮至5 mL，8000 r/min離心15 min，取上清液置于10 mL試管中，2 ℃冷藏保存。

2.2.2樣品凈化分別稱取2.5 g Al2O3和C18，裝填至85 mm×20 mm的固相萃取柱，用水、甲醇和正戊烷進行預處理，將提取的樣液以2.0 mL/min流速過Al2O3C18固相萃取柱，用20 mL正戊烷淋洗除雜，20 mL甲醇以1.0 mL/min流速洗脫回收待測物質，收集洗脫液后經(jīng)過低溫真空旋轉蒸發(fā)儀部分濃縮至1～2 mL，轉移至濃縮瓶，通過氮吹儀濃縮至干，定容至1 mL。進樣分析前溶液經(jīng)過0.45 μm濾膜過濾。

2.3檢測方法

2.3.1液相色譜條件進樣量：10 μL；流速：0.8 mL/min；波長：230 nm；柱溫：25 ℃；流動相：乙腈水，梯度洗脫：0～16 min，20%～100% 乙腈。