中國人民解放軍第302醫(yī)院（100039）馬艷芹 張蓉蓉 房吉祥 王國強 王江江 董旖 張萍

中藥作為人們防病治病的常用藥物，在維護人類健康方面發(fā)揮著重要作用。但中藥由于來源廣泛、產地繁多、成分復雜以及加工方法、采收時節(jié)甚至摻假偽劣等諸多因素的影響，使其質量控制一直是中醫(yī)藥行業(yè)的熱點和難點。筆者分別匯總和分析了近年來指紋圖譜、定量指紋圖譜、化學模式識別、生物效價檢測等現(xiàn)代分析技術的應用特點及其在中藥質量控制方面的應用進展，以期為相關工作提供參考。

1 指紋圖譜在中藥質量控制中的應用

指紋圖譜依據所用方法不同可分為三大類：色譜指紋圖譜、光譜指紋圖譜和DNA指紋圖譜。目前指紋圖譜憑借其科學的理論依據，已被國際認可為中藥質量控制的有效模式，如德國用指紋圖譜技術控制銀杏制劑的質量[1]，美國FDA對植物藥的質量控制則要求必須控制指紋圖譜的檢測標準[2]。

1.1 色譜指紋圖譜

1.1.1 氣相色譜 氣相色譜具有高效、高選擇性、高靈敏度、進樣量小及分析速度快等優(yōu)點，主要用于一些揮發(fā)性成分的鑒定。氣相色譜-指紋圖譜主要應用于含揮發(fā)性成分較多的中藥材及中藥制劑的質量鑒定和質量控制。黃天來等[3]應用氣相色譜方法研究生姜所含的揮發(fā)油成分，為生姜的鑒別和質量監(jiān)測提供依據。

1.1.2 高效液相色譜 高效液相色譜是一種用于中藥質量控制的主要手段，也是目前應用較廣泛的一種分析方法。HPLC具有分離速度快、分離效率高、檢測靈敏度高等優(yōu)點。王躍飛[4]等采用HPLC研究金銀花藥材的指紋圖譜測定方法，建立了金銀花藥材HPLC標準指紋圖譜，為控制金銀花的內在質量提供依據

1.1.3 薄層色譜法 薄層色譜法是一種經典的平面色譜方法。因其多路柱效應、樣品的靜態(tài)檢測、靈活的色譜后衍生化等特點，已成為中藥成分分析的一個主要方法[5]。張麗艷等[6]用TLC法對12批吳茱萸藥材的薄層色譜圖進行研究，證明該方法可用于吳茱萸藥材采購及生產中的快速檢驗。

1.1.4 毛細管電泳 毛細管電泳適合水溶性或醇溶性成分的分離分析，具有分離效能高、分析速度快、分析成本低、對環(huán)境影響小、樣品前處理簡單、有時甚至無需處理等優(yōu)點，是進行中藥質量控制的綠色分析方法[7]。谷巍[8]等采用該法建立安徽道地藥材牡丹皮的毛細管電泳指紋圖譜，結果可作為牡丹皮內在質量評價的依據。

1.1.5 色譜與其他技術的聯(lián)用 在中藥的質量控制中，還經常選擇色譜與其他技術的聯(lián)用，這不僅能較系統(tǒng)、較完整地解決中藥及其制劑面臨的保證藥效和質量的難題，而且還為解決中藥研究中缺乏標準品的難題提供了一條可行之路。目前最常用的是高效液相色譜（或毛細管電泳）-二極管陣列檢測-質譜-質譜聯(lián)用方式[1]。

1.2 光譜指紋圖譜 中藥光譜指紋圖譜包括紫外光譜、熒光光譜和紅外、拉曼光譜。不同中藥材所含物質基礎不同，相應的光譜性質也會有差別[9]。

1.2.1 近紅外光譜 近紅外光譜是可見光譜與中紅外光譜之間的一段譜區(qū)，波長范圍在780～2526nm之間，是有機分子振動的倍頻或合頻，能對特定波段電磁波產生吸收而形成的譜帶。近幾年，近紅外光譜不僅可用于快速識別形相近的中藥材的真?zhèn)?，而且可以用于中藥材的產地鑒別、種類分析和質量控制等，應用前景廣泛[10]。丁念亞等[11]用近紅外光譜技術對白芷中混有淀粉的模擬偽劣樣品能夠進行有效的鑒定。王剛力等[12]用近紅外光譜技術準確地鑒別了紅參及其偽品。王平等[13]用基線校正和方差處理方法對黃芪和人參進行了地域性鑒別。

1.2.2 拉曼光譜 拉曼光譜給出的是分子內部的信息，可以有效地反映單一或混合體系的結構特征，尤其是傅里葉變換拉曼光譜儀的出現(xiàn)，激發(fā)光源的能量相對減弱了許多，最大程度地抑制樣品產生熒光，而且采用邁克爾遜干涉儀代替?zhèn)鹘y(tǒng)的光柵進行分光，光通量大、信噪比高、掃描速度快，是一種快速、簡便、準確的分析方法[14]。蘇松柏等通過介紹拉曼光譜在中藥材鑒別、中藥中有效成分的分析和中成藥的質量控制中的一些應用，并列舉了林文碩等[15]采用近紅外拉曼光譜對山藥進行的分析結果及周殿鳳[16]采用拉曼光譜檢測了中藥燈盞花素注射劑和紅花注射液的結果等，表明將拉曼光譜應用于中藥成分的分析意義深遠。

1.3 DNA指紋圖譜 DNA指紋圖譜多運用聚合酶鏈反應（PCR）從不同生物樣品中人工合成DNA片斷，這種DNA片斷大小、數目因不同生物而異，因而稱之為DNA指紋圖譜。由于DNA分子標記技術直接分析的是生物遺傳因子而非表現(xiàn)型，故結果不易受外界條件的影響，因此為中藥品種鑒定中極為可靠的手段。其中隨機擴增多態(tài)DNA （RAPD）標記可在特異DNA序列不是很清楚的情況下檢測DNA的多態(tài)性[9]。黃蕓[17]等應用RAPD法能有效地對射干類藥材及其混淆品進行區(qū)分。

2 定量指紋圖譜

豐加濤等以丹參定量組分制備為切入點，發(fā)展了一種中藥質量控制研究的新方法，并表明基于定量指紋圖譜技術的中藥質量控制模式是以傳統(tǒng)中醫(yī)理論體系為基礎的綜合控制模式，將中藥指紋圖譜技術與多指標成分定量分析相結合，突出了指標性成分的作用，同時兼顧了微量成分及多成分融合調節(jié)作用的傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論。定量指紋圖譜技術在原有的指紋圖譜的方法上賦予指紋圖譜大量的定性、定量信息共同應用于中藥質量控制，對指紋圖譜中的多個目標成分尤其是有效成分進行準確定量，使得中藥質量控制更加準確、更能真實反映中藥的質量狀況、所對應的產品組成更加清晰、產品的質量和穩(wěn)定性更加可靠[18]。

3 化學模式識別

戴云等以主成分分析法、聚類分析人工神經網絡等模式為例，總結為化學模式識別是用現(xiàn)代分離分析檢測方法對中藥材或藥品樣本中的有機或無機的藥用化學成分進行檢測，用化學計量學方法關聯(lián)檢測數據陣，確定可用于樣品質量控制的模式。此方法綜合了中藥材或中藥制劑內各種化學成分的整體信息，能夠更準確、更全面、更科學的對中藥材及其制劑進行質量評價，在對大批量樣品進行鑒別分類時，其快速、準確的特點尤為突出[19]。

4 生物效價檢測

肖小河等通過分析現(xiàn)行中藥質量模式的局限性，提出生物活性/效價檢測應成為中藥質量控制和評價的主要手段和內容之一。生物效價檢測是在嚴格控制的試驗條件下通過比較標準品和供試品對生物體或離體器官與組織的特定生物效應從而控制和評價供試品的質量或活性，適用于結構復雜或理化方法不能測定其含量或理化測定不能反映其臨床生物活性的藥物。目前，生物效價檢測的常用方法有酶活力、凝集素活性、抗病毒測試、抗菌活性、抗炎活性等。這些方法的專屬性較強，而通用性較差，有限的實驗條件難以同時滿足幾百甚至幾千種不同中藥及中藥制劑的質量控制和評價。生物熱活性檢測技術具有普適性好、實時在線、客觀靈敏、定性定量、經濟高效等特點，符合中藥藥效與質量評價的客觀現(xiàn)實和發(fā)展方向，有利于中藥質量控制和藥效評價等復雜性難題。在理論上比現(xiàn)行的中藥指標性成分定性定量分析具有較明顯的優(yōu)越性。

隨著人類對中藥需求量的擴大以及人類用藥安全意識的不斷加強，中藥質量控制格外重要[5]。但由于中藥本身的復雜性，各種質控方法均有局限，質控過程中對藥理、藥效、藥動及生物效應等多方面進行的相關性研究還有待深入。