李玉山

（陜西惠豐制藥有限公司，陜西西安 710075）

迷迭香的綜合提取工藝研究

李玉山

（陜西惠豐制藥有限公司，陜西西安 710075）

介紹了一種新的溶劑提取迷迭香的工藝和方法，通過(guò)乙醇直接提取迷迭香，采用逐級(jí)溶劑分離的方法對(duì)迷迭香油、水溶性成分、脂溶性成分進(jìn)行綜合提取。該方法工藝簡(jiǎn)單，成本低，并已實(shí)現(xiàn)工業(yè)化。

迷迭香；迷迭香酸；鼠尾草酸；鼠尾草酚

前言

迷迭香（Rosemary）屬唇形科植物，原產(chǎn)于地中海沿岸，盛產(chǎn)于西歐國(guó)家（近幾年在我國(guó)云南、廣西、貴州、海南等地進(jìn)行了栽培）。戰(zhàn)國(guó)時(shí)期，我國(guó)曾從西域引種種植，1981年中科院北京植物研究所引入并種植成功[1]。迷迭香具有抗腫瘤，抗艾滋、抗炎、抗氧化，抗血栓，調(diào)節(jié)免疫保肝降酶等藥理作用[2]。迷迭香油可用于治療肝炎，防止心腦血管疾病，具有提神醒腦、活化腦細(xì)胞、增強(qiáng)記憶力的功效[3]。迷迭香酸具有抗血栓和抗血小板聚集的作用，它能抑制靜脈血栓形成，阻抑膠原誘導(dǎo)的血小板聚集，促進(jìn)纖維蛋白溶解活性[4]，還具有較強(qiáng)抗氧化活性，強(qiáng)于咖啡酸，綠原酸，葉酸，還具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤活性[5-6]。鼠尾草酚能有效提高大鼠肝中的谷光甘肽轉(zhuǎn)移酶和醌還原酶的活力，有效抑制DMBA-DNA加成物的生成，并抑制DMBA引起的大鼠腫瘤，是一個(gè)選擇性很高的乳腺癌細(xì)胞增殖抑制劑[7]。溶劑法提取迷迭香是一種最經(jīng)典、常用的提取方法，一般先通水蒸汽蒸餾去掉迷迭香植物中的精油，再進(jìn)行提取，工藝復(fù)雜、成本高。本研究采用溶劑一次提取、逐級(jí)分離的方法，具有工藝簡(jiǎn)單、成本低等優(yōu)點(diǎn)。該方法已經(jīng)工業(yè)化，并取得了良好的效果。

1 儀器與試劑

迷迭香采自廣西百色地區(qū)，迷迭香酸，鼠尾草酸，鼠尾草酚對(duì)照品購(gòu)自sigma公司；石油醚（60～90℃），乙醇、乙酸乙酯均為分析純。R-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海申科機(jī)械研究所；BS1101型電子分析天平，北京賽多利斯儀器有限公司；101-2-BS電熱真空烘箱，上海躍進(jìn)醫(yī)療；美國(guó)Waters高效液相色譜儀，日本島津LC-10AVP高效液相色譜儀。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)方法

2.1.1 鼠尾草酸和鼠尾酚檢測(cè)方法

色譜條件：以C18為固定相，乙腈-水為流動(dòng)相，在285nm下檢測(cè)。流動(dòng)相：52%乙腈-10mmol/L冰乙酸，流速0.8mL/min，柱溫：室溫。

2.1.2 供試品配制：精密稱取0.5g樣品，加入甲醇25mL，超聲提取30min，用甲醇定容于50mL容量瓶中，根據(jù)含量高低稀釋成上機(jī)液，過(guò)0.45μm微孔濾膜，按上述色譜條件分析。

2.1.3 迷迭香酸的檢測(cè)方法

色譜條件：色譜柱，Shim-packVP-ODS（4.6mm×150mm,4.6μm），流動(dòng)相甲醇-0.1%甲酸液（45∶55v/v），柱溫30℃，流速0.8mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)330mm。2.1.4 對(duì)照品液配制

精密稱取迷迭香酸對(duì)照品適量，置于100mL容量瓶中，用稀乙醇溶解，定容，制成濃度為0.244mg/mL的溶液即可。

2.1.5 供試品溶液配制

取迷迭香酸提取物適量，以50%稀乙醇溶解，過(guò)濾，濾液作為樣品

2.2 提取工藝流程

圖1 提取工藝流程圖Fig.1 The flow chart of extraction technology

2.3 工藝過(guò)程

2.3.1 提取

采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)選提取工藝，迷迭香粗粉以乙醇回流提取，提取物得率的計(jì)算提取物的質(zhì)量（g）除以所用原料質(zhì)量（g），得到迷迭香提取物的得率（%）。單因素實(shí)驗(yàn)方法對(duì)影響提取物得率的幾個(gè)因素-甲醇濃度，料液比，提取時(shí)間，提取溫度，提取次數(shù)，分別進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。提取條件優(yōu)化在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，確定了甲醇濃度，料液比，提取時(shí)間，提取溫度4個(gè)因素的3水平正交試驗(yàn)，篩選了一個(gè)最佳組合，每個(gè)處理進(jìn)行了3個(gè)重復(fù)，取其平均值進(jìn)行分析。

選取乙醇濃度，料液比，提取時(shí)間，提取溫度4個(gè)因素進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，優(yōu)化提取方案，結(jié)果見(jiàn)表1，表2。

表1 試驗(yàn)因素水平Table 1 The level of factor of experiment

2.3.2 濃縮

合并提取液，過(guò)濾，減壓下濃縮，分別濃縮至比重=1.0，1.05，1.08，1.10測(cè)乙醇醇度。

2.3.3 萃取

濃縮液以60～90℃石油醚等體積萃取3次，分出石油醚液和醇水液。

2.3.4 精油的制取

將石油醚液濃縮至一半體積后以等量水洗滌3次，水液下一步備用，石油醚液濃縮，脫色后制得產(chǎn)品a。

2.3.5 水溶性抗氧化成分制備

將2.3.3中的水液濃縮至呈浸膏狀，以2.3.4中的水液溶解，分出不溶物，水液加入飽和NaCl液，以等體積乙酸乙酯萃取4次，乙酸乙酯液合并濃縮，真空干燥，得產(chǎn)品b。

2.3.6 脂溶性抗氧化成分制備

將2.3.5中的水不溶物直接減壓干燥，得產(chǎn)品c。

3 結(jié)果分析

3.1 提取工藝優(yōu)化

表2 正交試驗(yàn)方案Table 2 The orthogonal experiment design

由表2可知影響因素的主次分別為：A→B→D→C，最佳工藝組成A3B3C2D1，即：80%乙醇20倍量，在70℃下提取1.0 h。

3.2 濃縮結(jié)果分析

表3 濃縮液比重與醇度的關(guān)系Table 3 The relation between the SG of concentrated solution and alcohol degree

由上表可見(jiàn)濃縮至密度1.08g·cm-3比較好，醇度較低，且濃縮也不黏稠。

3.3 產(chǎn)品a的分析

產(chǎn)品a為迷迭香油ρ（20℃）：0.892～0.920，折光系數(shù)（20℃）：1.464～1.4720，精油中主含龍腦，乙酸龍腦酯，樟腦，1，8-桉葉油素，菠烯，馬鞭草烯酮，月桂烯，對(duì)聚傘素。本工藝以高醇度的乙醇將所有成分全部提出，然后再逐個(gè)分離，提取液濃縮后為乙醇-水液，此時(shí)以石油醚萃取迷迭香油，而石油醚在低醇度乙醇中與其不互溶，因此分層現(xiàn)象明顯，可有效地將油類成分萃取出，這是本工藝區(qū)別于其他所有工藝的最大不同。

3.4 產(chǎn)品b的分析

產(chǎn)品b為迷迭香酸的水溶性抗氧化成分，經(jīng)檢測(cè)其含量高達(dá)82.5%，迷迭香酸耐100℃以上高溫，淺黃粉末，萃取迷迭香油后的成分，濃縮后以水溶解，而此處的水液來(lái)自純化產(chǎn)品Ⅰ的水液，因此充分節(jié)省物耗，同時(shí)在提高精油的品質(zhì)時(shí)又不使其他有效成分流失。水溶物過(guò)濾，得到水液，為迷迭香酸水溶液，此時(shí)加入NaCl減少其溶解度后以乙酸乙酯萃取出，可有效地將迷迭香酸與其他水溶性成分分開(kāi)，達(dá)到純化之目的。

3.5 產(chǎn)品c的分析

產(chǎn)品c主要含鼠尾草酸和鼠尾草酚，含量分別為22.3%和13.6%，為黃綠色粉末，脂溶性抗氧化成分耐高溫，利用水中溶解度不同，將水溶性成分與脂溶性成分分離，工藝既簡(jiǎn)單又方便，而且在水溶解時(shí)生成的沉淀很容易過(guò)濾。

4 結(jié)論

采用溶劑（乙醇）直接提取迷迭香，然后逐級(jí)溶劑分離的方法可行。該方法工藝簡(jiǎn)單，成本低，易于工業(yè)化。該迷迭香的提取方法國(guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)道。

［1］廖霞利,凌敏,趙金和,等．溶劑法提取迷迭香天然抗氧化劑工藝研究［J］．廣西工學(xué)院學(xué)報(bào),2006,17（2）:87～88．

［2］田亞雄,迷迭香的藥物應(yīng)用［J］．醫(yī)學(xué)信息,2002,15（9）：4～5．

［3］廖俊杰,楊偉柱,廖鵬程,等．粵產(chǎn)迷迭香的精油提取及其主要成分分析［J］．中成藥,2007,29（7）:1035～1038．

［4］鄒延午,徐理納,田金英．迷迭香酸抗血栓和抗血小板聚集的作用［J］．藥物學(xué)報(bào),1993,28（4）:241～245．

［5］李榮貴,滕大為,杜桂彩,等．此蘇紫愈傷迷迭香酸的純化及抗菌活性研究［J］．微生物學(xué)通報(bào),2000,27:324～327．

［6］MAZUMDERA,NEAMATIN,SUNDER S,et al．Curcunin analogs with altered potencies against HIV-1 integrase as probes for biochemical mechanisms of drug action［J］．J Med chem．,1997,40（19）: 3057～3063．

［7］SINGLETARY K W,MACDENALD C,WALLIG M．Inhibition by rosemary and carnosol of 7,12-dimethylbenz［a］anthracene（DMBA）induced rat mammary tum origenesis and in vivo DMBADNA adduct formation［J］．Cancer lett,1996,104:43～48．

［8］呂岱竹,王明月,袁宏球,等．高效液相色譜法測(cè)定迷迭香超臨界提取物中的鼠尾草酸和鼠尾酚［J］．分析測(cè)試學(xué)報(bào),2006,25（3）:109～111．

［9］吳良,袁干軍,蘇秋玲．高效液相色譜法測(cè)定迷迭香中為迭香酸的含量［J］．湖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,12（2）:112～114．

Study on the Comprehensive Extraction of Rosemary

LI Yu-shan
（Shaanxi Huifeng Pharmacy Limited Company,Xi’An 710075,China）

A novel technology and method for extracting rosemary by solvent is introduced．The rosemary is extracted by ethanol directly,and the rosemary oil,water-soluble components and fat-soluble components are comprehensively extracted by step-by-step solvent separation．This method has simple process,low cost,and it has been applied in industrial production．

Rosemary;rosmarinic acid;carnosic;carnosol

TQ028.32

B

1001-0017（2013）02-0076-03

2012-10-29

李玉山（1974-）,男，陜西西鄉(xiāng)人，碩士，從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究。E-mail:liyushan0508@sina.com