周 濤 (湖北省武漢市普仁醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，湖北 武漢 430080)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)的病因和發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，RA是一種免疫介導(dǎo)以滑膜炎為病理特征的自身免疫病，關(guān)節(jié)破壞是RA最主要的表現(xiàn)，體液免疫參與RA的發(fā)病［1］。近些年研究表明，基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)可降解軟骨和骨質(zhì)，在關(guān)節(jié)的破壞中占有極重要地位。筆者通過檢測(cè)RA患者和健康者血清免疫球蛋白及滑膜液MMP－1、MMP－3水平，探討體液免疫與MMPs在RA發(fā)病過程中的變化和兩者之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料:42例RA患者為2010年10月～2012年5月在武漢市普仁醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院患者，男13例，女29例，年齡27～62歲，平均(47.91±13.79)歲;平均病程(5.3± 3.28)年;正常對(duì)照組27例，男10例，女17例，平均(45.64± 11.27)歲。兩組年齡、性別、職業(yè)構(gòu)成等方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。RA患者均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)2010年(ACR)修訂的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除其他風(fēng)濕性疾病、感染、腫瘤、嚴(yán)重肝腎損害及心腦血管疾病等;根據(jù)RA疾病活動(dòng)度積分(DAS28)將RA患者分為兩組:DAS28評(píng)分≥3.2為RA活動(dòng)組(男7例，女15例)，DAS28評(píng)分≤2.6為RA緩解組(男6例，女14例)，兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 取樣:①空腹取肘中靜脈血3 ml，3 000 r/min，離心15 min，分離血清，用1.5 ml Eppendorf管分裝，置－20℃保存待測(cè)。②抽取膝關(guān)節(jié)滑液1～2 ml，抽取前做關(guān)節(jié)屈伸運(yùn)動(dòng)，保障關(guān)節(jié)內(nèi)滑液混合均勻，并無血液混入。

1.2.2 檢測(cè):采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)滑液組織中MMP－1及MMP－3的表達(dá)(MMP－1，MMP－3檢測(cè)試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司);采用免疫散射比濁法測(cè)定滑膜液中免疫球蛋白IgG及IgM水平，兔抗人IgG、IgM血清由上海長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司提供.采用日立7600～020全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:所有數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件處理，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用ANOVA進(jìn)行組間差異比較，MMPs與免疫球蛋白的相關(guān)性采用線性回歸分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 滑膜液中MMP－1及MMP－3的表達(dá)情況:MMP－1及MMP－3在RA活動(dòng)組中的表達(dá)均顯著高于RA緩解組和正常對(duì)照組(P＜0.05)。詳見表1。

表1 滑膜液中MMP－1及MMP－3的表達(dá)情況比較(±s)

表1 滑膜液中MMP－1及MMP－3的表達(dá)情況比較(±s)

注:與正常對(duì)照組比較，①P＜0.05;RA活動(dòng)組與緩解組比較，②P＜0.05

組別 例數(shù) MMP－1(ng/ml) MMP－3(ng/ml) RA活動(dòng)組 22 179.54±53.82② 243.79±78.56①②RA緩解組 20 118.41±35.74① 165.34±50.27①正常對(duì)照組27 47.6±25.93 76.61±36.50

2.2 血清中IgG及IgM表達(dá)情況:IgG及IgM在RA活動(dòng)組中的表達(dá)均顯著高于RA緩解組(P＜0.05)。詳見表2。

表2 血清中IgG及IgM表達(dá)情況(±s)

表2 血清中IgG及IgM表達(dá)情況(±s)

注:與正常對(duì)照組比較，①②P＜0.05;RA活動(dòng)組與緩解組比較，③P＜0.05

組別 例數(shù) IgG(μg/ml) IgM(μg/ml) RA活動(dòng)組 22 19.47±3.72①③ 6.18±0.46①③RA緩解組 20 14.62±2.59② 2.75±0.38正常對(duì)照組27 10.71±5.22 2.23±3.15

2.3 RA患者滑膜液中MMP－1及MMP－3與血清中IgG及IgM的相關(guān)性:RA患者滑膜液中MMP－1、MMP－3與血清中IgG及IgM均呈現(xiàn)直線正相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)。詳見表3。

表3 RA患者滑膜液中MMP－1及MMP－3與血清中IgG及IgM的相關(guān)性

3 討論

目前RA被認(rèn)為是一種病因不明的、以反復(fù)發(fā)作滑膜炎為主要病理表現(xiàn)的自身免疫病。近些年來研究表明，體液免疫在RA發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用，免疫球蛋白是一組具有抗體活性的蛋白質(zhì)，血清IgG、IgM水平可作為RA病情、療效評(píng)價(jià)的客觀指標(biāo);本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，RA患者隨著病情的緩解，血清IgG、IgM的表達(dá)水平顯著下降，與上述結(jié)論一致。RA致病因子通過活化Th細(xì)胞，激活B細(xì)胞分泌大量免疫球蛋白，形成大量免疫復(fù)合物，沉積于關(guān)節(jié)滑膜處，誘導(dǎo)滑膜炎性反應(yīng)的產(chǎn)生;另外活化的Th細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子及炎性反應(yīng)介質(zhì)，亦會(huì)進(jìn)一步加劇免疫聯(lián)級(jí)反應(yīng)，加重關(guān)節(jié)滑膜組織損傷［2］。影像學(xué)研究顯示，RA患者在發(fā)病早期就會(huì)表現(xiàn)出顯著的軟骨侵蝕及骨髓內(nèi)水腫，隨病情發(fā)展軟骨及骨質(zhì)破壞進(jìn)一步加劇，這與RA患者滑膜液中大量表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)有著密切聯(lián)系;研究發(fā)現(xiàn)，MMPs的異常表達(dá)可降解關(guān)節(jié)軟骨及骨質(zhì)，從而造成關(guān)節(jié)破壞，參與RA發(fā)?。?］; MMP－3被認(rèn)為是導(dǎo)致軟骨降解的最重要的蛋白酶，不僅能直接降解軟骨和骨質(zhì)對(duì)RA患者關(guān)節(jié)產(chǎn)生破壞，還能激活間質(zhì)膠原酶MMP－1發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)破壞關(guān)節(jié)，而蛋白水解酶的釋放和其后在基質(zhì)中的活化破壞了基質(zhì)屏障，導(dǎo)致膠原崩解和蛋白多糖的分裂，從而導(dǎo)致軟骨細(xì)胞生存的微環(huán)境惡化。釋放的炎性細(xì)胞因子參加關(guān)節(jié)炎性反應(yīng)，軟骨細(xì)胞無法從基質(zhì)中獲得充分的營(yíng)養(yǎng)而致功能受損，形成基質(zhì)－軟骨細(xì)胞之間惡性循環(huán)，導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨結(jié)構(gòu)可溶性增加。同時(shí)血管增生形成血管翳－軟骨結(jié)合區(qū)纖維增生，造成關(guān)節(jié)變形畸形強(qiáng)直致殘［4］。本文試驗(yàn)結(jié)果顯示，RA患者滑膜液MMP－1、MMP－3均顯著升高，當(dāng)RA病情緩解時(shí)，MMP－1、MMP－3表達(dá)亦降低，這與文獻(xiàn)報(bào)道一致。本試驗(yàn)對(duì)RA患者血清免疫球蛋白IgG、IgM與滑膜液MMP－1、MMP－3的相關(guān)性分析表明，MMPs與免疫球蛋白呈直線相關(guān)，提示RA致病過程中免疫球蛋白的異常表達(dá)會(huì)促進(jìn)局部MMP－1、MMP－3水平的上調(diào)，這可能是加劇軟骨和骨質(zhì)破壞的重要過程。筆者認(rèn)為，抑制RA體液免疫反應(yīng)，下調(diào)MMPs表達(dá)可能是緩解RA骨質(zhì)破壞的有效治療方法。

［1］ 潘繼承，倪黎剛，朱 建.聯(lián)合檢測(cè)RA患者血清IG、C、ESR、RF和CRP的臨床意義［J］.江蘇醫(yī)藥，2011，7(5):598.

［2］ 徐 雯，陶 娟.血清免疫球蛋白、補(bǔ)體水平與初診類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活動(dòng)度的相關(guān)性［J］.臨床醫(yī)藥實(shí)踐雜志，2008，17(10):815.

［3］ 盧 潔，魏國(guó)忠，戴利亞.IL－17、MMP－3在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜液及血漿中的表達(dá)及意義［J］.放射免疫學(xué)雜志，2011，24(2):205.

［4］ 周沈賢，金忠棋，陳 健.基質(zhì)金屬蛋白酶及活性酶在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎上表達(dá)研究［J］.浙江創(chuàng)傷外科，2006，11(1):12.