尚曉素 楊望孫

研究顯示[1]，運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法對(duì)慢性肝炎進(jìn)行檢驗(yàn)均可以取得一定的效果。為比較酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法對(duì)慢性肝炎的檢驗(yàn)結(jié)果，本研究選取西安市未央?yún)^(qū)第一人民醫(yī)院2009年3月～2012年4月間住院治療的84例慢性肝炎患者，對(duì)其相關(guān)比例資料進(jìn)行比較分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取西安市未央?yún)^(qū)第一人民醫(yī)院2009年3月～2012年4月間住院治療的84例慢性肝炎患者為研究對(duì)象。其中男49例（58.33%），女35例(41.67%)；乙型肝炎患者48例，占57.14%，丙型肝炎患者36例，占為42.86%；患者年齡最大75歲，最小22歲，平均年齡（53±7）歲。病程最長(zhǎng)的13年，病程最短的3年，平均病程（7±2）年。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 先把特異性抗體附著在固體相上,然后洗滌，加入含有抗原的試驗(yàn)溶液,或者與酶標(biāo)記的抗原混合或者在一定時(shí)間后,再加入酶標(biāo)記的抗原,使標(biāo)記抗原和抗原與限量抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，反應(yīng)平衡后，加入分離劑，使游離抗原與抗原抗體復(fù)合物分離，測(cè)定沉淀中放射性強(qiáng)度；加入標(biāo)本后，再用酶標(biāo)記的抗原或抗體測(cè)定抗體或抗原，使底物顯色[2]，操作時(shí)室溫宜在15℃～30℃，使用前先預(yù)熱儀器15～30 min，測(cè)讀結(jié)果更穩(wěn)定。

1.2.2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法 用裂解液提取DNA模板總反應(yīng)體系為20 ta，擴(kuò)增片段為314 bp。各反應(yīng)管置入5700自動(dòng)熒光檢測(cè)儀中，按 93℃ 2 min預(yù)變性，93℃30 s、55℃30 s、72℃ 1 min進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，結(jié)果熒光定量由電腦自動(dòng)計(jì)算DNA含量[3]。

1.3 統(tǒng)計(jì)指標(biāo) 總符合率=（真陰性數(shù)+真陽(yáng)性數(shù)）/（真陰性數(shù)+假陰性數(shù)+真陽(yáng)性數(shù)+假陽(yáng)性數(shù)）×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.5軟件包進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（±s）表示，計(jì)數(shù)資料組間比較進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 總符合率比較 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的總符合率為72.62%（61/84），聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法的總符合率為96.43%（81/84），組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 檢測(cè)后的一致性結(jié)果比較 兩種檢測(cè)方法檢測(cè)后，結(jié)果均為陰性3例、陽(yáng)性61例，兩種檢測(cè)方法檢測(cè)后的一致性比率均為76.19%[（3+61）/84]。

3 討論

所謂慢性肝炎實(shí)際上是指由不同病因而引起的患者肝臟壞死和炎癥的現(xiàn)象，但是對(duì)于慢性肝炎有一個(gè)時(shí)間上的相對(duì)界限，那就是患者的病程基本上都相對(duì)較長(zhǎng)，一般情況下超過(guò)半年以上病程患者才被定義為慢性肝炎[4]。它包含了我們臨床上常見(jiàn)的肝炎病毒感染（其中包含乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等），還有長(zhǎng)期飲酒所導(dǎo)致的慢性肝炎，以及由于某種慢性疾病而長(zhǎng)期服用肝毒性藥物所導(dǎo)致的慢性肝炎等。慢性肝炎在臨床上可以呈現(xiàn)出一些相應(yīng)的癥狀、體征和肝生化檢查異常，同時(shí)對(duì)于部分患者還可能不出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，而僅僅在臨床上表現(xiàn)出肝組織的壞死和炎癥。如果對(duì)慢性肝炎患者不采用及早、有效的的治療，很多患者會(huì)發(fā)展為肝硬化[5]。

目前在臨床上對(duì)于乙型肝炎病毒的檢測(cè)主要采用血清學(xué)的相關(guān)方法[6]。這些方法主要包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法、免疫擴(kuò)散、對(duì)流免疫電泳和膠體金層析法等[6]。各種方法在臨床實(shí)踐的過(guò)程中都取得了一定的效果。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法反應(yīng)時(shí)間較為迅速、檢驗(yàn)過(guò)程中所應(yīng)用的儀器設(shè)備也十分簡(jiǎn)單，對(duì)于相關(guān)人員的技術(shù)要求水平也不高。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法是一種新型技術(shù)，檢測(cè)快速、準(zhǔn)確，同時(shí)具有適用于大量樣本的特點(diǎn)，但是成本較高。本研究結(jié)果表明，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的總符合率為72.62%（61/84），聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法的總符合率為96.43%（81/84），組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

因此，針對(duì)慢性肝炎進(jìn)行臨床實(shí)踐檢驗(yàn)的過(guò)程中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法在總符合率上存在著一定的差異，要通過(guò)綜合評(píng)價(jià)來(lái)進(jìn)行實(shí)際選擇。

[1]Paudel MK, Takei A, Sakoda J, et al. Preparation of a singlechain variable fragment and a recombinant antigen-binding fragment against the anti-malarial drugs, artemisinin and artesunate, and their application in an ELISA[J].Anal Chem, 2012,84(4):2002-2008.

[2]楊少華，胡北俠，許傳田，等.禽流感病毒RT-PCR ELISA診斷方法的建立[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012，28(2):48-52.

[3]張艷敏，杜曉峰，張麗梅，等.實(shí)時(shí)定量PCR和ELISA法快速檢測(cè)角膜組織HBV和HCV的效果[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2012，47(3):411-413.

[4]Jakubowski JA, Bourguet N, Boulay-Moine D, et al. Comparison of a new ELISA assay with the flow cytometric assay for platelet vasodilatorassociated stimulated phosphoprotein (VASP) phosphorylation in whole blood to assess P 2 Y(12) inhibition[J].Thromb Haemost, 2012,107(2):388-395.

[5]張滿(mǎn)娥，張洪彬，明燕.實(shí)時(shí)熒光PCR和ELISA在乙型肝炎病毒檢測(cè)中的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9(2):190-191.

[6]郭彩琴，陳道楨，項(xiàng)靜英，等.兩種免疫學(xué)方法檢測(cè)弓形蟲(chóng)感染的比較研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7(3):195-196.