張慧燕 巴彥淖爾市鐵路動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)站 015000

采集動(dòng)物檢驗(yàn)樣品是動(dòng)物檢疫工作的重要內(nèi)容。采樣的時(shí)機(jī)是否適宜，樣品是否具有代表性，樣品的處理、保存、運(yùn)送是否合適及時(shí)，這些與檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性關(guān)系極大，所以要按照規(guī)定采集檢驗(yàn)樣品。

1 適時(shí)采樣

根據(jù)檢疫要求及檢驗(yàn)項(xiàng)目的不同，選擇適當(dāng)?shù)牟蓸訒r(shí)機(jī)十分重要。采樣是有時(shí)間要求的，應(yīng)該嚴(yán)格按規(guī)定時(shí)間采樣；有臨診癥狀需要作病原分離的，必須在病初的發(fā)熱期或癥狀典型時(shí)采樣，病死的動(dòng)物應(yīng)立即采樣。

2 合理采樣

按照檢疫規(guī)定要求，除了必須嚴(yán)格按照規(guī)定采集各種足夠數(shù)量的樣品外，不同疫病的需檢樣品各異，應(yīng)按可能的疫病側(cè)重采樣。對(duì)未能確定為何種疫病的應(yīng)全面采樣。

3 典型采樣

選取未經(jīng)藥物治療、癥狀最典型或病變最明顯的樣品采樣，如有并發(fā)癥還應(yīng)兼顧采樣。

4 無(wú)菌取樣

采集檢驗(yàn)樣品除供病理組織學(xué)檢驗(yàn)外，供病原學(xué)及血清學(xué)等檢驗(yàn)的樣品必須無(wú)菌操作采樣，采樣用具和容器均須滅菌處理，尸體剖檢需采集樣品的先采樣后檢查，以免人為污染樣品。

5 適量采樣

采集樣品的數(shù)量要滿足檢疫檢驗(yàn)的需要并留有余地，以備必要的復(fù)檢使用。

6 樣品處理

采集的樣品應(yīng)一種樣品一個(gè)容器立即密封，根據(jù)樣品的性狀及檢疫檢驗(yàn)要求不同，作暫時(shí)的冷藏、冷凍或其他處理。凍結(jié)方法是將樣品放入－30℃冰箱內(nèi)凍結(jié)，然后再裝入有大小冰塊或干冰的冷藏瓶（箱）內(nèi)運(yùn)送，亦可將裝入樣品的容器放入隔熱保溫瓶?jī)?nèi)再放入冰塊，然后按100g 冰塊加入食鹽約35g，立即將隔熱瓶瓶口塞緊，保證瓶?jī)?nèi)溫度達(dá)到－21℃左右。供細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)或血清學(xué)檢驗(yàn)的樣品冷藏送實(shí)驗(yàn)室即可。裝樣品的容器應(yīng)貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽要防止因凍結(jié)而脫落，標(biāo)簽標(biāo)明采集時(shí)間、地點(diǎn)、號(hào)碼和樣品名稱，并附上發(fā)病、死亡等相關(guān)資料，盡快送實(shí)驗(yàn)室。

7 安全采樣

采樣過(guò)程中必須做好采樣人員的安全防護(hù)，并防止病原污染，尤其必須防止外來(lái)疫病的擴(kuò)散，避免事故發(fā)生。

8 樣品包裝

裝載樣品的容器可選擇玻璃的或塑料的，可以是瓶式、試管式或袋式。容器必須完整無(wú)損，密封不漏出液體。裝供病原學(xué)檢驗(yàn)樣品的容器，用前徹底清潔干凈，必要時(shí)經(jīng)清潔液浸泡，沖洗干凈后經(jīng)干熱或高壓滅菌并烘干。如選用塑料容器，能耐高壓的經(jīng)高壓滅菌，不能耐高壓的經(jīng)環(huán)氧乙烷熏蒸消毒或紫外線距離20cm 直射2h 滅菌后使用。根據(jù)檢驗(yàn)樣品性狀及檢驗(yàn)?zāi)康倪x擇不同的容器，一個(gè)容器裝量不可過(guò)多，尤其液態(tài)樣品不可超過(guò)容量的80%，以防凍結(jié)時(shí)容器破裂。裝入樣品后必須加蓋，然后用膠布或封箱膠帶固封。如果是液態(tài)樣品，在膠布或封箱膠帶外還須用熔化的石蠟加封，以防液體外泄。如果選用塑料袋則應(yīng)用兩層袋，分別用線結(jié)扎袋口，防止液體漏出或入水污染樣品。

9 送檢迅速

樣品經(jīng)包裝密封后必須盡快送往實(shí)驗(yàn)室，延誤送檢時(shí)間常會(huì)嚴(yán)重影響檢疫結(jié)果。因此在樣品送檢過(guò)程中，要根據(jù)樣品的保存要求及檢驗(yàn)?zāi)康耐咨瓢才胚\(yùn)送計(jì)劃。供細(xì)菌檢驗(yàn)、寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)及血清學(xué)檢驗(yàn)的冷藏樣品，必須在24h 內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室；供病毒檢驗(yàn)的冷藏處理樣品，須在數(shù)小時(shí)內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室；經(jīng)凍結(jié)的樣品須在24h 內(nèi)送到，24h 內(nèi)不能送到實(shí)驗(yàn)室的，必須使送檢樣品在運(yùn)送過(guò)程中保持溫度處于-20℃以下。樣品在送檢過(guò)程中，為了防止樣品的容器破損，樣品裝入冷藏瓶(箱)后應(yīng)妥善包裝，防止碰撞。用飛機(jī)運(yùn)送時(shí)，樣品應(yīng)放在增壓倉(cāng)內(nèi)，以防壓力改變導(dǎo)致樣品受損。

10 送檢樣品的采集

10.1 病毒檢驗(yàn)樣品的采集

一般情況下，采集樣品適宜在動(dòng)物發(fā)病初體溫升高時(shí)進(jìn)行，對(duì)于沒(méi)有癥狀的帶毒動(dòng)物，一般在進(jìn)入隔離場(chǎng)后7天以前采樣。血樣品必須是脫纖血或是抗凝血?？鼓齽┛蛇x擇肝素或EDTA，枸櫞酸鈉對(duì)病毒有微毒性，一般不宜采用。采血前，在真空采血管或其他容器內(nèi)按每10mL 血加入0.1%肝素1mL 或EDTA20mg。牛、馬、羊從頸靜脈或尾靜脈真空采血，豬從前腔靜脈真空采血或用注射器抽取，用量少時(shí)也可以從耳靜脈抽取，家禽從翅膀靜脈或頸靜脈用注射器抽取血液。采得的血樣立即與抗凝劑充分混合，防止凝固；采脫纖血時(shí)，先在容器內(nèi)加入適量小玻珠，加入血液后反復(fù)振蕩血液，以便脫去血液纖維。采得的血液經(jīng)密封后貼上標(biāo)簽，以冷藏狀態(tài)立即送實(shí)驗(yàn)室。必要時(shí)可在血中按每毫升加入青霉素和鏈霉素各500-1000IU，以抑制血源性或采血中污染的細(xì)菌。

10.2 細(xì)菌檢驗(yàn)樣品的采集

采血應(yīng)在動(dòng)物發(fā)病初體溫升高或發(fā)病期，并未經(jīng)藥物治療期間采集，血應(yīng)脫纖或加肝素抗凝劑(或EDTA 或枸櫞酸鈉)，但不可加入抗生素。血液密封后貼上標(biāo)簽，冷藏盡快送實(shí)驗(yàn)室，否則須置4℃冰箱內(nèi)作暫時(shí)保存，但時(shí)間不宜過(guò)久，以免溶血。

10.3 血清學(xué)檢驗(yàn)樣品

全血用真空采血管或注射器由動(dòng)物頸靜脈或其他靜脈采集，用作血清學(xué)檢驗(yàn)的血液不加抗凝劑或脫纖處理。為了保障血清質(zhì)量，一般情況下空腹采血較好。采得的血樣貼上標(biāo)簽，室溫靜置待凝固后送實(shí)驗(yàn)室，并盡快將自然析出的血清或經(jīng)離心分離出的血清吸出，按需要分裝若干小瓶密封，再貼上標(biāo)簽冷藏保存?zhèn)錂z或冷藏送檢。作血清學(xué)檢驗(yàn)的血液，在采血、運(yùn)送和分離血清的過(guò)程中應(yīng)避免溶血，以免影響檢驗(yàn)結(jié)果。中和試驗(yàn)用的血清，數(shù)天內(nèi)檢驗(yàn)的可在4℃左右保存。較長(zhǎng)時(shí)間才能檢驗(yàn)的應(yīng)凍結(jié)保存，但不能反復(fù)凍融，否則抗體效價(jià)下降。供其他血清學(xué)檢驗(yàn)的血清，一般不必加入防腐劑或抗生素，若確有需要時(shí)也可加入抗生素(每毫升血清加青霉素、鏈霉素500-1000IU)，亦可加入0.01%硫柳汞、0.08%硫柳汞、0.08%疊氮鈉。加入防腐劑時(shí)不宜加入過(guò)量的液態(tài)量，以免血清被稀釋。加入防腐劑的血清可置4℃下保存，但存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)應(yīng)凍結(jié)保存。采集雙份血清檢測(cè)比較抗體效價(jià)變化的，第一份血清采于病的初期并作凍結(jié)保存，第二份血清采于第一份血清后3-4 周，雙份血清同時(shí)送實(shí)驗(yàn)室。

10.4 寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)樣品

因不同的血液寄生蟲(chóng)在血液中出現(xiàn)的時(shí)機(jī)及部位各不相同，因此需要根據(jù)各種血液寄生蟲(chóng)的特點(diǎn)，取相應(yīng)時(shí)機(jī)及部位的血制成血涂片，送實(shí)驗(yàn)室。

10.5 常規(guī)檢驗(yàn)樣品

血液需加抗凝劑，防止血液凝固，抗凝劑可用肝素或枸酸鈉、EDTA 鈉，血由靜脈采得并與抗凝劑充分混合，盡快送實(shí)驗(yàn)室。運(yùn)輸中血漿不可凍結(jié)，不可劇烈振動(dòng)，以免溶血。