劉興偉 邵夢(mèng)躍 李豐田 趙艷嬌 丁世偉

遼寧省遼寧絨山羊原種場(chǎng)有限公司 111000

1 材料和方法

1.1 電阻測(cè)定工具的選擇

選用遼寧省畜牧科學(xué)研究院研發(fā)的“牧豐牌羊發(fā)情排卵測(cè)定儀”。其工作原理是：母羊處于發(fā)情狀態(tài)特別是接近排卵時(shí)期，由于其生殖器官充血，血液中的鹽分、離子等通過毛細(xì)管滲透到陰道腔中，使陰道中黏液的導(dǎo)電性增強(qiáng)，從而使黏液的電阻值下降。當(dāng)排卵期過后，電阻值由最低值上升到最高值。當(dāng)連續(xù)定時(shí)測(cè)定母羊子宮頸口的電阻值后，就會(huì)監(jiān)測(cè)到母羊排卵的時(shí)間點(diǎn)，從而能有效提高配種受胎率，特別是凍精配種的受胎率。

1.2 牧豐牌羊發(fā)情排卵測(cè)定儀使用方法

將檢測(cè)儀的探頭插入到母羊陰道內(nèi)至子宮頸口，輕輕轉(zhuǎn)到手柄正負(fù)15°角，打開電源開關(guān)，當(dāng)電阻值穩(wěn)定在十位范圍時(shí)記錄數(shù)值后即可。延時(shí)測(cè)定方法是將檢測(cè)儀的探頭插入到母羊陰道內(nèi)至子宮頸口，輕輕轉(zhuǎn)到手柄正負(fù)15°角，打開電源開關(guān)，當(dāng)數(shù)顯表顯示數(shù)據(jù)后按下延時(shí)開關(guān)，在規(guī)定的延時(shí)時(shí)間內(nèi)顯示最后的測(cè)定數(shù)值。實(shí)驗(yàn)表明，延時(shí)顯示的數(shù)據(jù)與實(shí)時(shí)測(cè)定的數(shù)據(jù)呈強(qiáng)正相關(guān)，可以完全代替實(shí)時(shí)測(cè)定。

在測(cè)定前要將母羊的外陰進(jìn)行適當(dāng)清洗、消毒，防止將病源微生物帶入母羊生殖道內(nèi)，造成母羊流產(chǎn)、死胎和受胎率降低。將母羊體測(cè)儀的探頭用75%酒精擦洗消毒，待酒精風(fēng)干后再用生理鹽水擦洗，再后將探頭極環(huán)用鹽水擦凈。

1.3 試驗(yàn)?zāi)秆虻倪x擇

精心挑選有正常發(fā)情周期的繁殖母羊300只，其中3-6周歲母羊100只，為A組；1.5-2.5周歲母羊100只，為B組；8月齡-16月齡母羊100只，為C組。

1.4 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)

于2010年8月-12月，分別在遼寧絨山羊原種場(chǎng)科技示范場(chǎng)和遼寧省遼陽市下達(dá)河鄉(xiāng)智豐種羊場(chǎng)進(jìn)行母羊挑選，并在母羊正常發(fā)情狀態(tài)下進(jìn)行母羊頸宮電阻值的測(cè)定。

1.5 母羊排卵觀察方法

采用腹腔鏡法觀測(cè)母羊的排卵狀態(tài)，即將母羊仰臥、頭低尾高保定后，腹部后方常規(guī)剪毛消毒，在腹中線兩側(cè)乳房前2-3cm處的一側(cè)選血管稀少處作一1.0-1.5cm的切口，拉開皮膚，利用腹腔鏡探針外套刺破肌肉層和腹膜，抽出內(nèi)部探針，將探針留在腹腔內(nèi)；腹中線另一側(cè)對(duì)稱位置作同一切口，插入子宮鉗。然后利用子宮鉗和探針外套尋找子宮角末端，將卵巢暴露進(jìn)行排卵及卵泡發(fā)育情況觀測(cè)。用上述同樣方法進(jìn)行另一側(cè)卵巢發(fā)育及排卵觀測(cè)。觀測(cè)結(jié)束后及時(shí)做好相關(guān)記錄供分析之用。

1.6 測(cè)量時(shí)間的設(shè)計(jì)

在母羊未發(fā)情的狀態(tài)下，每隔2小時(shí)進(jìn)行一次電阻值測(cè)定，不做母羊排卵觀側(cè)，以保證母羊有足夠的體力使試驗(yàn)順利進(jìn)行。母羊發(fā)情后，每1小時(shí)進(jìn)行一次電阻值測(cè)定，并同時(shí)進(jìn)行排卵及卵泡發(fā)情情況的觀測(cè)，詳細(xì)做好各項(xiàng)記錄工作。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

（1）各時(shí)間區(qū)段進(jìn)行比較

通過試驗(yàn)測(cè)定出電阻值和排卵時(shí)間點(diǎn)以后，以排卵時(shí)間點(diǎn)為中心劃定時(shí)間范圍。具體劃分方法如下：

排卵時(shí)間點(diǎn)±2小時(shí)，排卵時(shí)間點(diǎn)前±2小時(shí)-±4小時(shí)，排卵時(shí)間點(diǎn)后±2小時(shí)-±4小時(shí)。

通過各時(shí)區(qū)測(cè)定數(shù)值的統(tǒng)計(jì)，計(jì)算出各時(shí)區(qū)電阻值的平均值和排卵發(fā)生的百分率，以生物統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行比較。

（2）繪制不同類別羊電阻值變化規(guī)律進(jìn)行直觀比較

以時(shí)間為橫坐標(biāo)，電阻值變化為縱坐標(biāo)，比較距離排卵時(shí)間點(diǎn)不同時(shí)間范圍的電阻值變化規(guī)律。

（3）輸精試驗(yàn)效果比較

在遼陽市下達(dá)河鄉(xiāng)雞鳴寺村和黑龍江省七臺(tái)河地區(qū)挑選2-7周歲的繁健康絨山羊母羊120只，分為2組，對(duì)照組42只，采用陰道檢查鑒定發(fā)情方法。試驗(yàn)組78只，采用電阻測(cè)定法確定輸精時(shí)間，各組均進(jìn)行細(xì)管凍精配種試驗(yàn)，子宮頸口輸精，一個(gè)情期輸精2次。配種后60天根據(jù)不返情率統(tǒng)計(jì)兩組的凍精配種受胎率，進(jìn)行樣本百分?jǐn)?shù)差異顯著性檢驗(yàn)。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 不同時(shí)間區(qū)段內(nèi)電阻值變化情況，如表1所示。

表1：不同時(shí)間區(qū)段時(shí)宮頸電阻值變化規(guī)律明細(xì)表 單位：歐姆、個(gè)、%

對(duì)表中各組排卵母羊比率、卵泡成熟率進(jìn)行樣本百分?jǐn)?shù)差異顯著性檢驗(yàn)，P、Q、M、N與O組比較，P＜0.01，差異極顯著；P、M 之間，P、N 之間，Q、N之間，P、Q之間兩組數(shù)值＜0.05，差異顯著。通過分析說明，當(dāng)母羊子宮頸口黏液電阻值下降至最低值時(shí)即排卵點(diǎn)±2小時(shí)的時(shí)區(qū)內(nèi)，絕大多數(shù)母羊發(fā)生了排卵現(xiàn)象，并且此區(qū)間內(nèi)卵泡的成熟比率極顯著高于其他時(shí)間區(qū)間的比率。

2.2 不同年齡母羊在整個(gè)發(fā)情周期內(nèi)宮頸電阻值的變化規(guī)律

將1.5-2.5周歲母羊與3-7周歲母羊測(cè)得的宮頸電阻值的平均值繪制成曲線，如圖1所示。

圖1：不同年齡的母羊發(fā)情周期宮頸黏液電阻值的變化曲線

通過圖1可以看出，盡管兩個(gè)曲線的下降和上升速率不同，但到達(dá)電阻最低點(diǎn)的數(shù)值是接近的，大約在100歐姆上下范圍內(nèi).1.5-2.5周歲母羊組發(fā)情持續(xù)時(shí)間較短，電阻值上升和下降的數(shù)率較快，表現(xiàn)為曲線較為陡直。而3-7周歲母羊組母羊的發(fā)情持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，表現(xiàn)為曲線較為舒緩，這與實(shí)際生產(chǎn)中成壯年母羊的發(fā)情時(shí)間較長(zhǎng)，未成年母羊的發(fā)情持間較短的變化規(guī)律是一致的。

2.3 細(xì)管凍精配種受胎效果

采用遼寧絨山羊0.25mL細(xì)管冷凍精液進(jìn)行配種，經(jīng)檢測(cè)，所用凍精解凍后的活力為0.35±0.05，38-40℃解凍后在 38℃的存活時(shí)間平均為6.5±0.5小時(shí)，其配種效果如表2所示。

表2：不同發(fā)情鑒定方法凍配效果明細(xì)表單位：只、%

通過樣本差數(shù)顯著性檢驗(yàn)，兩組之間P＜0.01，差異極顯著，說明通過測(cè)定宮頸黏液電阻法判斷母羊發(fā)情排卵狀態(tài)進(jìn)行輸精可以取得更好的凍精配種效果。

3 討論與分析

（1）不同年齡的母羊，其子宮頸口電阻值的變化速率是不同的，但兩者又有其共同點(diǎn)，即變化規(guī)律是相同的。如都是未發(fā)情和發(fā)情結(jié)束后電阻值數(shù)值最高并且比較恒定，發(fā)情開始后逐漸降低，至排卵前后降至最低點(diǎn)，排卵后又上升到最高數(shù)值。

（2）母羊在一個(gè)發(fā)情周期中，其體內(nèi)的激素會(huì)出現(xiàn)一系列的變化。在發(fā)情開始時(shí)，雌激素水平上升，會(huì)引起母羊生理上的許多變化，生殖器官毛細(xì)血管充血，血管和黏膜的通透性增加，血壓可能也會(huì)有所上升。在這些因素的作用下，血液中的液體成份及溶于液體成份的鹽類等物質(zhì)就會(huì)滲透到生殖道中，越接近排卵，滲出的液體成份越多，鹽類等電解質(zhì)成份濃度越高，其導(dǎo)電性越強(qiáng)，電阻值越低。母羊排卵結(jié)束后，雌激素水平下降，孕酮水平上升，母羊的生理又回復(fù)到未發(fā)情時(shí)的狀態(tài)，自然其電阻值又恢復(fù)到原來的高數(shù)值狀態(tài)。

（3）本研究之所以選擇母羊子宮頸外口的電阻值進(jìn)行試驗(yàn)測(cè)定，是因?yàn)閷m頸外口位置比較固定，在測(cè)定時(shí)只要把羊發(fā)情排卵檢測(cè)儀插入母羊陰道底部即可測(cè)定相同部位的電阻，便于進(jìn)行比較和分析。另外，宮頸外口的黏液由于位置較深，揮發(fā)較慢，又是分泌數(shù)量較多的部位，能夠準(zhǔn)確地反映出母羊生殖道管腔內(nèi)黏液的主要特點(diǎn)。而陰道腔中黏液的主要來源是宮頸外口的黏液和陰道外壁黏液的混合體，蒸發(fā)較快并且?；煊心蛞?，影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，故沒有采用。

（4）本試驗(yàn)所采用的測(cè)定儀器是遼寧省畜牧科學(xué)研究院設(shè)計(jì)并制作的“牧豐牌羊用發(fā)情排卵檢測(cè)儀”，主要是依靠?jī)x器探頭的兩個(gè)電極環(huán)插入母羊?qū)m頸外口，通過濕潤(rùn)的黏膜和黏液構(gòu)成導(dǎo)電回路進(jìn)行測(cè)定的。其中電極環(huán)之間的黏液覆蓋面積對(duì)測(cè)定結(jié)果是有所影響的，因此在儀器的設(shè)計(jì)時(shí)，將兩電極環(huán)的距離和直徑縮小，同時(shí)將電極環(huán)設(shè)計(jì)成與探頭探稈水平狀態(tài)，都是為了不浪費(fèi)粘液，保證多次測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確并具有可比較性。如果采用其他儀器測(cè)定，由于設(shè)計(jì)參數(shù)不同，內(nèi)阻不同，其測(cè)定數(shù)值和測(cè)定的準(zhǔn)確性也必然存在差異。

（5）由于所測(cè)定的儀器已經(jīng)申請(qǐng)國家專利，故不能對(duì)儀器的具體結(jié)構(gòu)和參數(shù)作具體介紹，望見諒。

（6）本研究在試驗(yàn)的過程中，只采用遼寧絨山羊做為測(cè)定樣本，沒有對(duì)其他品種的山羊進(jìn)行測(cè)定。另外，在凍配時(shí)由于條件限制，凍配母羊樣本較少，沒有對(duì)其他生理狀態(tài)的母羊如藥物處理母羊、春季配種母羊進(jìn)行測(cè)定，需要在以后的研究中進(jìn)一步完善。