陸海鵬陸翠林付遠(yuǎn)清

（1廣西民族醫(yī)院藥學(xué)部，廣西南寧530001；2廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，530011；3北海市衛(wèi)生學(xué)校附屬醫(yī)院藥劑科，廣西北海536100）

星宿菜提取物對(duì)小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用

陸海鵬1陸翠林2付遠(yuǎn)清3

（1廣西民族醫(yī)院藥學(xué)部，廣西南寧530001；2廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，530011；3北海市衛(wèi)生學(xué)校附屬醫(yī)院藥劑科，廣西北海536100）

目的：觀察星宿菜水提取物及醇提取物對(duì)小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用。方法：105只小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、聯(lián)苯雙酯組、星宿菜水提取物高劑量組、星宿菜水提取物低劑量組、星宿菜醇提取物高劑量組、星宿菜醇提取物低劑量組，每組15只。小鼠尾靜脈注射卡介苗（BCG）聯(lián)合脂多糖（LPS）建立免疫性肝損傷模型。連續(xù)給藥12 d后，測(cè)定小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活性及肝組織勻漿超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽-過氧化物酶（GSH-Px）水平。結(jié)果：與模型組相比，星宿菜提取物可顯著降低免疫性肝損傷模型小鼠血清中ALT、AST活性、肝組織MDA含量，升高肝組織SOD、GSH-Px活性（P＜0.05）；高劑量組效果優(yōu)于低劑量組（P＜0.05）；星宿菜醇提取物效果最佳。結(jié)論：星宿菜提取物對(duì)小鼠免疫性肝損傷具有保護(hù)作用，其機(jī)制與抗脂質(zhì)過氧化有關(guān)。

星宿菜；水提取物；乙醇提取物；免疫性肝損傷

星宿菜（Lysimachia fortuner Maxim.）為報(bào)春花科珍珠菜屬植物，又名紅根草、紅絲毛根，假辣蓼等，以全株入藥，可清熱利濕、涼血活血、解毒消腫，富含黃酮類化合物[1-2]。作為廣西民間常用藥材，雖然相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道較少，其抗炎作用在臨床用藥治療的實(shí)踐中已經(jīng)得到證實(shí)，本研究采用給小鼠尾靜脈注射卡介苗（BCG）聯(lián)合脂多糖（LPS）建立小鼠免疫性肝損傷模型，觀察星宿菜提取物對(duì)小鼠免疫性肝損傷相關(guān)性指標(biāo)的干預(yù)調(diào)節(jié)作用。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)昆明種小鼠，體質(zhì)量（20±2）g，雌雄兼用，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：2010A036。

1.2 藥品與試劑

星宿菜植物采自廣西防城、桂林、百色、欽州、柳州、河池、南寧等地，經(jīng)鑒定為報(bào)春花科珍珠菜屬植物星宿菜，星宿菜水提取物和乙醇提取物的樣品由我院實(shí)驗(yàn)室自行制備，水提取物稠膏濃度為2.16（g生藥 /mL），醇提取物稠膏濃度為 3.32（g生藥/mL），使用時(shí)用蒸餾水稀釋成相應(yīng)的濃度。BCG（中國(guó)生物技術(shù)集團(tuán)公司上海生物制品研究所，批號(hào)：2010100101）；大腸桿菌 LPS（Sigma公司，批號(hào)：20110210）；聯(lián)苯雙酯（廣州星群藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：20101201）；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。

1.3 儀器

紫外-可見分光光度計(jì)UV-2550（日本島津）；HD-F2600 plus全自動(dòng)生化分析儀（泰諾科貿(mào)公司），JY92-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝科器研究院），TE214S型萬分之一電子天平（德國(guó)Sartorius公司）。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組

清潔級(jí)昆明種小鼠105只，雌雄兼用，隨機(jī)分為正常組、模型組、聯(lián)苯雙酯組（0.6 g/kg）、星宿菜水提取物高劑量組（20 g/kg）、星宿菜水提取物低劑量組（10 g/kg）、星宿菜醇提取物高劑量組（20 g/kg）、星宿菜醇提取物低劑量組（10 g/kg），共7組，每組動(dòng)物15只。

2.2 免疫性肝損傷動(dòng)物模型的建立及處理[3-4]

造模第1天除正常組外，其余各組小鼠在給藥前均由尾靜脈注射BCG溶液0.2 mL（用生理鹽水配制BCG溶液，使每毫升約含108個(gè)活菌），各治療組按0.2 mL/10 g的給藥體積灌胃小鼠，正常組和模型組給予等體積蒸餾水，每天給藥1次，連續(xù)給藥12 d，給藥期間動(dòng)物正常飲食及飲水。12 d后除正常組給予等體積溶媒外，各組小鼠尾靜脈注射LPS 7 μg/只（0.2 mL）。禁食不禁水12 h后，摘除眼球后經(jīng)眼球后靜脈叢取血，處死小鼠，取肝臟做相關(guān)檢測(cè)。

2.4 檢測(cè)指標(biāo)及方法

離心分離小鼠血清，按試劑盒說明用HD-F2600 plus全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定ALT、AST。小鼠肝臟生理鹽水漂洗后，稱取0.4 g，用超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)勻漿，低溫離心，制成10%的肝組織勻漿，按試劑盒說明測(cè)定肝勻漿中SOD、MDA、GSH-Px活性。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以x±s表示，組間的比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 星宿菜提取物對(duì)免疫性肝損傷小鼠血清ALT、AST的影響

與模型組相比，星宿菜水提取物高、低劑量組，醇提取物高、低劑量組均能降低免疫性肝損傷小鼠血清ALT、AST活性（P＜0.05）；在降低ALT水平方面，星宿菜醇提取物高劑量組的效果優(yōu)于星宿菜水提取物高、低劑量組、星宿菜醇提取物低劑量組（P＜0.05），效果與聯(lián)苯雙酯組相當(dāng)（P＞0.05），星宿菜水提取物高劑量組優(yōu)于低劑量組（P＜0.05）。在降低AST水平方面，星宿菜醇提取物高劑量組的效果和星宿菜水提取物高劑量組、聯(lián)苯雙酯組相當(dāng)（P＞0.05），均優(yōu)于星宿菜水提取物低劑量組、星宿菜醇提取物低劑量組（P＜0.05）。結(jié)果見表1。

表1 星宿菜提取物對(duì)小鼠血清ALT、AST的影響（±s，n=15）

表1 星宿菜提取物對(duì)小鼠血清ALT、AST的影響（±s，n=15）

注：*與正常組比較，P＜0.05；#與模型組比較，P＜0.05；△與聯(lián)苯雙脂組比較，P＜0.05；◇與星宿菜水提取物高劑量組比較，P＜0.05；□與星宿菜醇提取物高劑量組比較，P＜0.05

組別 劑量（g/Kg） ALT（U/L） AST（U/L）正常組 - 23.55±7.42 32.94±7.19模型組 - 56.12±10.31*65.51±13.78*聯(lián)苯雙酯組 0.6 33.26±10.90*#42.29±9.18*#星宿菜水提取物高劑量組 20 40.08±6.53*#△□46.49±9.62*#低劑量組 10 46.01±11.57*#△◇□55.15±9.08*#△◇□星宿菜醇提取物高劑量組 20 32.93±11.55*#44.33±11.24*#低劑量組 10 42.16±13.03*#△□49.84±12.15*#△

3.2 星宿菜對(duì)小鼠肝組織勻漿SOD、MDA、GSH-Px的影響

模型組小鼠組肝組織勻漿MDA水平升高，同時(shí)SOD、GSH-Px水平降低，星宿菜提取物可以顯著降低小鼠肝組織勻漿MDA的水平并提升SOD、GSH-Px水平（P＜0.05）。在提升SOD水平方面，星宿菜水提取物及醇提取物高劑量組均優(yōu)于低劑量組（P＜0.05），兩者效果相當(dāng)（P＞0.05），與聯(lián)苯雙脂組效果相當(dāng)（P＞0.05）。在降低MDA水平方面，星宿菜醇提取物高劑量組效果與聯(lián)苯雙脂組效果相當(dāng)（P＞0.05），優(yōu)于星宿菜水提取物高、低劑量組、星宿菜醇提取物低劑量組（P＜0.05），而星宿菜水提取物高劑量組效果優(yōu)于星宿菜水提取物低劑量組及星宿菜醇提取物的低劑量組（P＜0.05）。在提升GSH-Px水平方面，星宿菜醇提取物高劑量組效果與聯(lián)苯雙脂組相當(dāng)（P＞0.05），優(yōu)于星宿菜水提取物低劑量組及星宿菜醇提取物低劑量組（P＜0.05），星宿菜水提取物高劑量組效果與聯(lián)苯雙脂組比較，差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但效果優(yōu)于星宿菜水提取物低劑量組及星宿菜醇提取物低劑量組（P＜0.05）。結(jié)果見表2。

表2 星宿菜提取物對(duì)小鼠肝組織勻漿SOD、MDA、GSH-Px的影響（±s，n=15）

表2 星宿菜提取物對(duì)小鼠肝組織勻漿SOD、MDA、GSH-Px的影響（±s，n=15）

注：*與正常組比較，P＜0.05；#與模型組比較，P＜0.05；△與聯(lián)苯雙脂組比較，P＜0.05；◇與星宿菜水提取物高劑量組比較，P＜0.05；□與星宿菜醇提取物高劑量組比較，P＜0.05

組別 劑量（g/Kg） SOD（U/mg） MDA（nmol/mg） GSH-Px（U/mg）正常組 - 166.73±19.20 9.22±2.20 234.23±24.91模型組 - 71.46±13.27*22.38±4.16*158.55±21.27*聯(lián)苯雙酯組 0.6 131.59±22.58*#12.80±2.71*#204.26±34.22*#星宿菜水提取物 高劑量組 20 126.36±21.96*#15.77±3.81*#△188.03±21.36*#低劑量組 10 91.82±21.24*#△◇□17.94±4.44*#△◇□178.49±35.51*#△◇□星宿菜醇提取物 高劑量組 20 129.44±25.25*#13.71±2.99*#◇196.37±24.13*#低劑量組 10 99.12±25.24*#△◇□16.25±3.15*#△◇□186.39±28.74*#◇△

4 討論

星宿菜作為廣西民間常用藥材，其抗炎作用在臨床實(shí)踐中已經(jīng)得到證實(shí)，亦常配伍用于各種肝炎的治療，提示星宿菜具有抗肝損傷作用。本研究通過建立小鼠免疫性肝損傷模型，同時(shí)給予不同劑量星宿菜提取物預(yù)防治療，分析星宿菜提取物對(duì)小鼠血清ALT、AST活性及肝組織勻漿SOD、MDA、GSH-Px水平的影響，旨在通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)星宿菜抗免疫性肝損傷及抗過氧化脂質(zhì)作用，為綜合開發(fā)利用星宿菜資源提供數(shù)據(jù)支持。

本研究顯示星宿菜水提取物及醇提取物高、低劑量均能降低免疫性肝損傷小鼠血清ALT、AST含量，降低肝臟MDA含量，提高SOD及GSH-Px含量，高劑量組效果總體優(yōu)于低劑量組，星宿菜醇提取物效果最優(yōu)，證實(shí)星宿菜提取物對(duì)小鼠免疫性肝損傷具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抗脂質(zhì)過氧化及清除自由基有關(guān)[5-6]。

山柰酚及槲皮素都是星宿菜的有效成分，具有抗菌、抗炎、抗病毒及鎮(zhèn)痛等作用[7-9]，付遠(yuǎn)清等[10]建立了星宿菜中山柰酚及槲皮素含量的HPLC測(cè)定方法，本研究初步證實(shí)星宿菜提取物對(duì)免疫性肝損傷具有保護(hù)作用，在相關(guān)研究[11-14]基礎(chǔ)上，可進(jìn)一步研究星宿菜的急性毒性以及對(duì)四氯化碳、硫代乙酰胺等化學(xué)因素所致肝損傷動(dòng)物模型的保護(hù)作用，深入揭示其保肝護(hù)肝、抗脂質(zhì)過氧化、自由基清除模式、抗炎及免疫調(diào)節(jié)的機(jī)制。此外，由于星宿菜全株入藥，有必要分部位篩選其治療肝損傷效果最好的藥用部位及最佳劑量。

[1] 方乍浦，張亞均，孫小芳.星宿菜脂溶性部分的化學(xué)成分研究[J].中國(guó)中藥雜志，1989，14（12）：35-37.

[2] 黃新安，蔡佳仲，胡英杰，等.星宿菜化學(xué)成分的研究[J].中國(guó)中藥雜志，2007，32（7）：596-599.

[3] 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1348.

[4] 汪永忠，姜輝，張家富，等.三七總皂苷對(duì)免疫性肝損傷小鼠的保護(hù)作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)，2011，17（7）：159-162.

[5] 李小翚，肖梅紅，李常青，等.苦參堿脂質(zhì)體毫微粒對(duì)小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用[J].新中醫(yī)，2011，43（4）：118-119.

[6] 譚冰，嚴(yán)煥寧，黃鎖義，等.艾葉多糖的提取、含量測(cè)定及對(duì)羥自由基清除作用的研究[J].中國(guó)執(zhí)業(yè)藥師，2012，9（3）：10-13.

[7] Li J，Huang H，Zhou W，et al.Anti-hepatitis B virus activities of Geranium carolinianum L.extracts and identification of the active components[J].Biol Pharm Bull，2008，31（4）：743-747.

[8] De Melo GO，Malvar Ddo C，Vanderlinde FA，et al.Antinociceptive and anti-inflammatory kaempferol glycosides from Sedum dendroideum[J].J Ethnopharmacol，2009，124（2）：228-232.

[9] Kwon SH，Nam JI，Kim SH，et al.Kaempferol and quercetin，essential ingredients in Ginkgo biloba extract，inhibit interleukin-1beta-induced MUC5AC gene expression in human airway epithelial cells[J].Phytother Res，2009，23（12）：1708-1712.

[10] 付遠(yuǎn)清，莫逢偉，廖厚知.HPLC法測(cè)定星宿菜中山柰酚的含量[J].中國(guó)藥房，2012，23（15）：1409-1410.

[11] 陸海鵬，李彬，馬維.廣西莪術(shù)水提取物對(duì)小鼠的急性毒性反應(yīng)研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2010，19（12）：193-194.

[12] 丁云錄，柳懷玉，李慶杰，等.老鸛草提取物對(duì)小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)新藥雜志，2011，20（16）：1554-1557.

[13] 陸海鵬.肝康寧抗炎免疫作用研究[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2009，25（3）：370-371.

[14] 陸海鵬，李彬.復(fù)方黑芝麻膠囊調(diào)節(jié)免疫功能作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2010，31（4）：50-53.

Protective Effects of Lysimachia Fortuner Maxim.Extract on Immunological Hepatic Injury in Mice

Lu Haipeng1，Lu Cuilin2，F(xiàn)u Yuanqing3（1 Pharmacy Department of Guangxi National Hospital，Guangxi Nanning 530001，China；2 Pharmacy Department of the Affiliated Ruikang Hospital of Guangxi Traditional Chinese Medical University，530011；3 Pharmacy Department of the Affiliated Hospital of Beihai Health School，Guangxi Beihai 536100）

Objective：To study the protective effects of both aqueous and ethanol extracts of Lysimachia fortuner Maxim.on immunological hepatic injury in mice.Methods：About 105 mice were randomly divided into normal group，model group，bifendate group，high dose and low dose groups of Lysimachia fortuner Maxim.aqueous extracts，and high dose and low dose groups of Lysimachia fortuner Maxim.ethanol extracts.An immune liver injury model was established via mouse tail vein injection with BCG combined with LPS.The ALT and AST levels in mouse serum and MDA，SOD and GSH-Px activites in hepatic homogenate were determined.Results：Lysimachia fortuner Maxim.extracts significantly decreased the serum transaminase activities and the MDA content，and prevented the SOD and GSH-Px activities in hepatic homogenate. The effects of high dose groups were better than those of low dose groups and the ethanol extracts showed the best effects.Conclusion：Lysimachia fortuner Maxim.extracts showed significant protective effects on immunological hepatic injury in mice.

Lysimachia fortuner Maxim.；Aqueous Extract；Ethanol Extracts；Immunological Liver Injury

10.3969/j.issn.1672-5433.2013.02.007

2012-04-13）

陸海鵬，男，主管藥師。研究方向：藥事管理、藥物制劑。通訊作者E-mail：luhaipeng.nanning@gmail.com