曹 陽(yáng),叢玉艷,李文婷,李豐田

(1.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110866； 2.遼寧省畜牧科學(xué)研究院，遼寧 遼陽(yáng) 111000)

錳參與三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝，并參與各種酶的合成[1-3]，可提高畜禽的生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖性能，因此，飼料中添加錳引起研究者的廣泛關(guān)注。雄性動(dòng)物錳過(guò)量會(huì)造成生精功能障礙[4-6]。雌性動(dòng)物錳缺乏或過(guò)多會(huì)出現(xiàn)受胎率降低、排卵障礙、卵巢變性、生殖機(jī)能紊亂及不孕等現(xiàn)象[7-8]。錳還與機(jī)體免疫密切相關(guān)，如錳對(duì)獺兔血清免疫球蛋白含量有顯著影響[9]，但有關(guān)日糧錳水平對(duì)母山羊繁殖性能和免疫性能的影響目前尚未見(jiàn)報(bào)道。有資料介紹，妊娠前期及去勢(shì)綿羊?qū)﹀i的需要量為40～50 mg·kg-1DM，妊娠后期為50～60 mg·kg-1DM[10]。但目前生產(chǎn)中絨山羊飼糧中錳含量為30～40 mg·kg-1DM，可能不能滿足妊娠母羊?qū)﹀i的需求。本研究在基礎(chǔ)飼糧中添加不同水平錳，以分析錳水平對(duì)遼寧絨山羊母羊血液免疫指標(biāo)的影響，以期為進(jìn)一步分析錳對(duì)絨山羊母羊繁殖性能的影響奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選用體況良好、體質(zhì)量相近(34.16±0.90 kg)的2.5歲遼寧絨山羊母羊60只，隨機(jī)平均分為4組，即基礎(chǔ)飼糧組和3個(gè)試驗(yàn)組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5只。基礎(chǔ)日糧參照NRC(2007)山羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合當(dāng)?shù)仫暳铣煞值纫蛩嘏渲?。在基礎(chǔ)飼糧(表1)的基礎(chǔ)上，各組羊的錳補(bǔ)飼量分別為0(基礎(chǔ)飼糧組)、20、40、60 mg·kg-1DM(錳源為MnSO4·H2O)。預(yù)飼期7 d，每天于08:00和16:00兩次飼喂，每次飼喂精粗混合飼糧2 kg·只-1，自由飲水。各組羊只的飼養(yǎng)管理方法和環(huán)境條件完全一致。

1.2試驗(yàn)材料 全自動(dòng)生化分析儀(邁瑞B(yǎng)S200型，深圳邁瑞)、試劑盒(購(gòu)自南京建成生物工程研究所)、凱氏定氮儀(凱氏定氮法測(cè)定CP)和電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(去水分法測(cè)定DM)。

1.3指標(biāo)檢測(cè) 于預(yù)飼期前、空懷期(發(fā)情配種前)、妊娠1個(gè)月(30 d)和妊娠4個(gè)月(120 d)09:00對(duì)母羊空腹稱(chēng)重，并用真空采血管(促凝管)頸靜脈采血10 mL。采集的血液用高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)(5804R，德國(guó)Eppendorf)以3 500 r·min-1的轉(zhuǎn)速離心15 min，取上層血清分裝，于-70 ℃保存。用試劑盒測(cè)定血清白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)和免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性。每次稱(chēng)量投喂飼料質(zhì)量及余料質(zhì)量以測(cè)定采食量。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(DM基礎(chǔ)) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis)

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 利用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，多重比較采用Duncan法。試驗(yàn)結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊母羊血清ALB含量的影響 空懷期補(bǔ)飼20 mg·kg-1DM錳組血清ALB含量顯著高于基礎(chǔ)飼糧組(P<0.05)，與補(bǔ)飼40、60 mg·kg-1DM錳組間差異不顯著(P>0.05)；妊娠1個(gè)月和4個(gè)月各組間差異不顯著(P>0.05)(表2)。

2.2補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊血清TP含量的影響 空懷期補(bǔ)飼20 mg·kg-1DM錳組血清TP含量顯著低于基礎(chǔ)飼糧組和補(bǔ)飼40、60 mg·kg-1DM錳組(P<0.05)；妊娠4個(gè)月補(bǔ)飼20、40 mg·kg-1DM錳組TP含量顯著高于基礎(chǔ)飼糧組和補(bǔ)飼60 mg·kg-1DM 錳組(P<0.05)，且補(bǔ)飼20 mg·kg-1DM錳組TP含量高于其它3組；妊娠1個(gè)月各組間差異不顯著(P>0.05)(表3)。

2.3補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊血清母羊免疫球蛋白含量的影響 空懷期和妊娠1個(gè)月血清IgA含量各組間差異不顯著(P>0.05)，妊娠4個(gè)月補(bǔ)飼40 mg·kg-1DM錳組血清IgA的含量顯著高于基礎(chǔ)飼糧組(P<0.05)，與補(bǔ)飼20、60 mg·kg-1DM錳組間差異不顯著(P>0.05)(表4)。

表2 補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊母羊血清ALB含量的影響Table 2 Effects of supplementation with manganese on serum ALB content in Liaoning cashmere g·L-1

表3 補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊母羊血清TP含量的影響Table 3 Effects of supplementation with manganese on serum TP content in Liaoning cashmere g·L-1

表4 補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊母羊血清免疫球蛋白含量的影響Table 4 Effects of supplementation with manganese on serum Immunoglobulin content in Liaoning cashmere mg·L-1

空懷期和妊娠1個(gè)月母羊血清IgG含量各組間差異不顯著(P>0.05),妊娠4個(gè)月補(bǔ)飼40、60 mg·kg-1DM 錳組血清IgG含量顯著高于基礎(chǔ)飼糧組和補(bǔ)飼20 mg·kg-1DM錳組(P<0.05)(表4)。

空懷期補(bǔ)飼40、60 mg·kg-1DM錳組血清IgM的含量顯著高于基礎(chǔ)飼糧組(P<0.05),妊娠期各組間差異不顯著(P>0.05)(表4)。

2.4補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊母羊血清ALT、AST活性的影響 空懷期和妊娠期各組間ALT、AST活性差異不顯著(P>0.05)(表5)。

2.5補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊母羊體質(zhì)量的影響 補(bǔ)飼錳組體質(zhì)量高于基礎(chǔ)飼糧組，妊娠4個(gè)月補(bǔ)飼20、60 mg·kg-1DM錳組體質(zhì)量顯著高于基礎(chǔ)飼糧組和補(bǔ)飼40 mg·kg-1DM錳組(P<0.05)?？諔哑诤腿焉锲谘a(bǔ)飼錳組母羊的日增重高于基礎(chǔ)飼糧組，但補(bǔ)飼錳水平組間差異不顯著(P>0.05)，說(shuō)明補(bǔ)飼錳能夠提高母羊的體質(zhì)量和日增重(表6)。

表5 補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊母羊血清ALT、AST活性的影響Table 5 Effects of supplementation with manganese on serum ALT and AST activity in Liaoning cashmere U·L-1

表6 補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊母羊體重和日增重的影響Table 6 Effects of supplementation with manganese on body weight and daily gain of Liaoning cashmere

表7 補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊母羊采食量的影響Table 7 Effects of supplementation with manganese on feed intake in Liaoning cashmere kg·d-1

3 討論

3.1補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊母羊血清ALB、TP含量的影響 機(jī)體受到外來(lái)抗原刺激后，體內(nèi)的免疫細(xì)胞增殖、分化，此過(guò)程需要大量的蛋白質(zhì)，如果蛋白質(zhì)含量過(guò)低，必然會(huì)使免疫力下降[11]。已有研究表明，山羊血清總蛋白水平為6.40～7.90 g·100 mL-1，妊娠母羊的為4.89 g·100 mL-1[12]，本研究測(cè)得的蛋白水平高于這個(gè)范圍，說(shuō)明錳使蛋白質(zhì)的合成增加。空懷期補(bǔ)飼20 mg·kg-1DM錳組ALB含量顯著提高，妊娠期補(bǔ)飼40 mg·kg-1DM錳組TP含量顯著提高，說(shuō)明高劑量錳能夠降低蛋白質(zhì)的利用率，這與對(duì)蛋雛雞[13]、肉仔雞[14]的研究結(jié)果相似。妊娠1個(gè)月時(shí)ALB、TP含量略有下降，母羊血清TP水平空懷期高于妊娠期，且妊娠期血清TP下降，主要原因是胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育需要供給大量的蛋白質(zhì)，以防止胚胎被吸收或出現(xiàn)流產(chǎn)等現(xiàn)象，這與瑪納斯德萊娃[15]提出的觀點(diǎn)相似。在妊娠4個(gè)月時(shí)血清中ALB、TP含量有所上升，可能是母羊需要蛋白質(zhì)為分娩和泌乳作準(zhǔn)備而產(chǎn)生的一種自我調(diào)節(jié)作用，在保證胚胎正常營(yíng)養(yǎng)后，增加體質(zhì)量為泌乳做準(zhǔn)備[16]。血液中ALB、TP含量升高，說(shuō)明母體的免疫力有增強(qiáng)的趨勢(shì)。

3.2補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊母羊血清IgA、IgG和IgM含量的影響 蛋白質(zhì)對(duì)提高反芻動(dòng)物的免疫能力具有積極作用，其分解產(chǎn)物氨基酸可通過(guò)影響免疫球蛋白的合成與活性來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫能力及感染情況[17]。目前的初步研究認(rèn)為，充足的錳營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)是正?？贵w產(chǎn)生的先決條件，且鈣與錳激活淋巴細(xì)胞的協(xié)同作用可增強(qiáng)機(jī)體免疫力[18-19]。本研究中，空懷期補(bǔ)飼錳組血清IgM的含量顯著高于基礎(chǔ)飼糧組，妊娠4個(gè)月補(bǔ)飼40 mg·kg-1DM錳組血清IgA的含量顯著高于基礎(chǔ)飼糧組，補(bǔ)飼40、60 mg·kg-1DM錳組血清IgG的含量顯著高于其余兩組。這與王艷立等[20]對(duì)肉仔雞、陳小敏等[21]對(duì)觸錳工人的研究結(jié)果相似，錳能顯著提高血清球蛋白的含量，但錳量過(guò)高或過(guò)低均不利于蛋白質(zhì)的合成?？娖浜闧22]結(jié)合動(dòng)物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，錳鹽進(jìn)入體內(nèi)可提高免疫球蛋白的含量。錳能提高免疫系統(tǒng)功能，可能是由于其參與了核酸和蛋白質(zhì)的代謝[23]，同時(shí)球蛋白是體液免疫的重要指標(biāo)。在妊娠期免疫球蛋白含量升高，有助于體內(nèi)抗體的合成，進(jìn)而提高母體免疫力。IgG是主要抗體，IgM參與動(dòng)物機(jī)體初次體液免疫反應(yīng)，血清型IgA具有IgG和IgM抵抗感染疾病的某些功能，對(duì)免疫功能作用不大[24-25]。因此，試驗(yàn)中IgG、IgM、IgA含量的升高說(shuō)明母體的免疫力有所增強(qiáng)，避免或降低了死胎、流產(chǎn)等現(xiàn)象的發(fā)生。

3.3補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊母羊血清ALT、AST活性的影響 ALT和AST是肝臟內(nèi)的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，能反映肝的功能狀況。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶可催化絨山羊體內(nèi)氨基在丙氨酸和谷氨酸間的轉(zhuǎn)移，是絨山羊蛋白質(zhì)代謝的重要指標(biāo)[26-27]。侯翔等[28]報(bào)道，正常情況下血液中的AST和ALT活性很低，胞內(nèi)酶受細(xì)胞屏障作用不易逸出，只有組織細(xì)胞受損傷時(shí)，AST和ALT由于細(xì)胞膜通透性增大使其活性顯著升高[29]。本研究中，空懷期和妊娠期組間ALT和AST活性差異均不顯著，在對(duì)蛋雛鴨[30]、肉仔雞[31]、大鼠[32]和育成蛋鴨[33]的研究也得到類(lèi)似結(jié)果。Attia等[34]對(duì)母雞和公雞的研究表明，補(bǔ)飼20 mg·kg-1DM錳后AST和ALT活力顯著下降，且對(duì)產(chǎn)蛋率、孵化率和蛋質(zhì)量等均有增加，與本研究結(jié)果不同，可能是由于試驗(yàn)動(dòng)物不同造成的。本研究AST和ALT活力在小范圍內(nèi)波動(dòng)，且有下降的趨勢(shì)，說(shuō)明補(bǔ)飼錳可穩(wěn)定動(dòng)物的生理狀態(tài)，使母羊處于正常的生理狀態(tài)或未受到應(yīng)激。

3.4補(bǔ)飼錳對(duì)遼寧絨山羊母羊生產(chǎn)性能的影響 體質(zhì)量較重的母雞比體質(zhì)量輕的母雞需錳量大[35-36]。Creek等[37]通過(guò)研究雞飼糧中錳水平的高低對(duì)肌肉、脛骨的變化發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)飼錳可增加雞的肌肉和脛骨的均勻度，間接地增加了體質(zhì)量。本研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中補(bǔ)飼錳有助于提高遼寧絨山羊母羊的生產(chǎn)性能，可使空懷期和妊娠期母羊的體質(zhì)量增加。且補(bǔ)飼20 mg·kg-1DM錳組效果較好，這說(shuō)明補(bǔ)飼錳可增加母羊的體脂變化，通過(guò)增加蛋白質(zhì)和脂肪的沉積，使母羊增重，為妊娠時(shí)母體需要合成大量蛋白質(zhì)、脂肪等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的儲(chǔ)備奠定基礎(chǔ)，并且提供胚胎正常的生長(zhǎng)發(fā)育所需的必要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)合成和胚胎的著床，這與李文斌和王星鎖[38]對(duì)母山羊的試驗(yàn)結(jié)果相似?？諔哑隗w質(zhì)量的增加有助于胚胎的穩(wěn)定，防止母羊流產(chǎn)，妊娠期體質(zhì)量的增加有助于提供胚胎營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，尤其是妊娠后期，體脂的儲(chǔ)備為母體分娩做準(zhǔn)備以及防止出現(xiàn)死胎或者難產(chǎn)的現(xiàn)象。

本研究各時(shí)期母羊的采食量均無(wú)顯著變化，對(duì)豬[39]、肉仔鴨[40]、肉仔雞[41]、雛雞[42]的研究也得到相似的結(jié)果，說(shuō)明飼糧中補(bǔ)飼錳不會(huì)影響母羊的采食量，且可以保持體內(nèi)正常的新陳代謝。

4 結(jié)論

綜合分析發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)飼錳可提高遼寧絨山羊母羊機(jī)體的免疫機(jī)能?？諔哑谘a(bǔ)飼錳20 mg·kg-1DM(日糧錳水平為60 mg·kg-1DM)、妊娠期補(bǔ)飼錳40 mg·kg-1DM(日糧錳水平為80 mg·kg-1DM)對(duì)提高遼寧絨山羊母羊免疫機(jī)能的效果較好。

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