陽 勇，張薇薇

（1.重慶市城口縣農業(yè)委員會，重慶 城口 405900；2.重慶市城口縣動物衛(wèi)生檢疫檢驗監(jiān)督所，重慶 城口 405900）

雞新城疫抗體水平是揭示雞體免疫狀況和感染能力的一項重要指標，尤其在非典型新城疫疾病診斷中具有重要價值。為了有效控制其發(fā)生流行，各大進出口雞場均定期對雞群血清進行新城疫免疫抗體水平監(jiān)測。定期隨機地抽取雞群中0.5%～1%的雞進行抗體水平檢測，根據檢測結果來確定免疫程序和免疫時間，可以很好地控制雞非典型新城疫的發(fā)生。近年來，重慶市城口縣大力發(fā)展城口山地雞，為了了解城口縣城口山地雞種雞的新城疫抗體水平，本文于2012年7月采用血凝試驗（HA）和血凝抑制試驗（HI）對城口縣5個城口山地雞種雞場的新城疫抗體水平進行了檢測，現將試驗結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 200份被檢血清 分別來源于城口縣良鮮養(yǎng)雞場（A）、高觀鎮(zhèn)施禮養(yǎng)雞場（B）、修齊鎮(zhèn)旭輝養(yǎng)雞場（C）、新聯(lián)盟養(yǎng)雞專業(yè)合作社（D）和金安養(yǎng)雞專業(yè)合作社（E）5個城口山地雞種雞場。隨機取樣，按常規(guī)方法進行翅靜脈采血，每只1～2mL，分離血清置4℃條件下備用。1.1.2 已知血清 雞新城疫陽性血清、陰性血清均由西南大學榮昌校區(qū)預防獸醫(yī)學教研室提供，陽性血清抑制效價為1∶128。

1.1.3 標準抗原 雞新城疫活疫苗（La Sota），齊魯動物保健品有限公司生產，批號是1112014-1。

1.1.4 0.5%雞紅細胞懸浮液 按文獻資料的方法配制。

1.1.5 稀釋液 0.85%滅菌生理鹽水，臨用時配制。

1.1.6 常規(guī)儀器 96孔微量U型反應板、100 μL微量加樣器、MM-1微型混合器，由西南大學榮昌校區(qū)預防獸醫(yī)學教研室提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 La Soto系疫苗接種雞胚制備抗原 將疫苗用滅菌生理鹽水作10倍稀釋，在10日齡易感雞胚尿囊內接種0.1mL，凡接種后72～120h內死亡且病變顯著的雞胚，分別收集其尿囊液于消毒試管內，保存于冰箱中備用。

1.2.2 雞新城疫病毒紅細胞凝集（HA）試驗 首先用100mL微量加樣器向96孔微量U型反應板第1～10孔各加入稀釋液25μL；接著向第l孔內加入雞新城疫病毒液25μL，并作倍比稀釋至第9孔，從第9孔中棄去25 μL，第10孔不加病毒液作對照；再用微量加樣器向每孔內加入稀釋液25 μL，然后每孔分別加入0.5%雞紅細胞懸液25 μL。加樣完畢后于微型混合器上振蕩1 min，室溫下放置30～60min后觀察結果。操作術式見表1。

表1 雞新城疫病毒紅細胞凝集試驗（HA） μL

從表1得出：HA試驗的凝集價為1∶640。

1.2.3 雞新城疫病毒紅細胞凝集抑制（HI）試驗 分別對每份被檢血清進行試驗，首先用100μL微量加樣器向96孔微量U型反應板第1～8孔各加稀釋液25 μL，第9孔加稀釋液50 μL，第10孔加稀釋液25 μL，第9、10孔分別作紅細胞對照；然后在第1孔內加被檢血清25 μL，并作倍比稀釋至第8孔，再從第8孔中棄去25 μL；接著用100μL微量加樣器從1～8孔和第10孔中加入4個血凝單位的抗原液25μL；再將96孔微量U型反應板在微型混合器上振蕩1min，置室溫下30min；然后再在每孔中分別加入0.5%雞紅細胞懸液25 μL。加樣完畢后，又在微型混合器上振蕩1 min，置室溫下30～60 min后觀察結果。試驗同時作陰性血清、陽性血清對照。操作術式見表2。

表2 雞新城疫病毒紅細胞凝集抑制試驗（HI） μL

從表2得出：該被檢血清紅細胞的凝集抑制效價為1∶80。

2 試驗結果

本試驗檢測了城口縣5個城口山地雞種雞場共200份產蛋雞的血清樣品，其新城疫抗體檢測結果列于表3。從表3得知：在5個城口山地雞種雞場的6000只產蛋雞中隨機檢測了200只雞的新城疫抗體水平，其抽檢率為3.3%；各個種雞場的新城疫抗體水平各不相同。

表3 城口縣200份產蛋種雞血清新城疫抗體檢測結果

3 討論與分析

3.1 首免日齡對新城疫抗體水平產生有影響 C和E雞場的首免日齡分別是第7日和第8日，A、B、D雞場的首免日齡分別為第6日、第5日、第4日，從檢測結果可以看出，首免日齡在第7～8日的雞場的抗體水平較高。據有關報道，按常規(guī)免疫程序于7～10日齡進行初次免疫，母源抗體滴度較高的雛雞，首次免疫時間必須推遲，否則會導致免疫不全或免疫失敗，本試驗與之相符。

3.2 采血時間與最后一次新城疫免疫的時間間隔不同，抗體水平也不一樣，并且不同的疫苗達到峰值的時間以及維持時間也不一樣 據報道，接種Ⅳ系疫苗，HI抗體在接種后第5d開始上升，接種后第11 d達到峰值，持續(xù)6d保持高滴度抗體水平；接種Ⅰ系疫苗，HI抗體在接種后第4d開始上升，接種后第9d達到峰值；接種油乳劑滅活苗，HI抗體在接種后第5d開始上升，接種后第11d達到峰值，持續(xù)16d保持高滴度抗體水平。試驗中C、E雞場的采血時間與最后一次新城疫免疫的時間間隔是18 d、25 d；A、D、B雞場的采血時間與最后一次新城疫免疫的時間間隔是30d、35d、40d，與報道相符。

本試驗通過對5個種雞場產蛋雞的抗體水平進行檢測，得出C和E雞場的抗體水平較高，其余3個雞場的抗體水平較低。據報道，HI效價低于3log2時，必須加強免疫，才能起到良好的保護作用；HI效價在4log2～5log2時，只對部分雞只產生保護作用；在5log2～7log2時，不能抵抗強毒入侵，所以種雞的HI抗體水平應在7log2以上。

4 結論

抽樣檢測了城口縣5個種雞場的200只雞的新城疫抗體水平，結果顯示各雞場的抗體水平不盡相同。

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