周 萍，李英華，胡福良*，趙 煥，吳 捷，梁世君

(1.杭州蜂之語(yǔ)蜂業(yè)股份有限公司，浙江 桐廬 311500；2.浙江經(jīng)貿(mào)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江 杭州 310018；3.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310029；4.桐廬縣質(zhì)量計(jì)量監(jiān)測(cè)中心，浙江 杭州 311500)

高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定蜂王漿中氟胺氰菊酯、三唑醇和蠅毒磷殘留

周 萍1，李英華2，胡福良3,*，趙 煥1，吳 捷4，梁世君4

(1.杭州蜂之語(yǔ)蜂業(yè)股份有限公司，浙江 桐廬 311500；2.浙江經(jīng)貿(mào)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江 杭州 310018；3.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310029；4.桐廬縣質(zhì)量計(jì)量監(jiān)測(cè)中心，浙江 杭州 311500)

建立一種使用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS-MS)儀同時(shí)測(cè)定蜂王漿中的氟胺氰菊酯、三唑醇和蠅毒磷等藥物殘留量的方法。采用堿性條件下的乙腈萃取，并用HLB小柱凈化，經(jīng)HPLC-MS-MS電噴霧電離源，正離子多反應(yīng)檢測(cè)模式檢測(cè)，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：蠅毒磷的檢出限為2μg/kg，三唑醇和氟胺氰菊酯的檢出限為1μg/kg，在5～100μg/kg之間線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.9940，對(duì)于5、10、50μg/kg水平添加回收率范圍在78.9%～102.1%之間，變異系數(shù)范圍在2.1%～13.6%之間。該分析方法適合蜂王漿中氟胺氰菊酯、三唑醇和蠅毒磷的同時(shí)測(cè)定，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和回收率測(cè)定結(jié)果符合對(duì)食品和農(nóng)產(chǎn)品中痕量藥物的測(cè)定要求。

蜂王漿；氟胺氰菊酯；蠅毒磷；三唑醇

農(nóng)藥的廣泛應(yīng)用，在給人類帶來(lái)增產(chǎn)增收利益的同時(shí)也給環(huán)境造成了嚴(yán)重污染，大量食用含有三唑醇等農(nóng)藥殘留的食物會(huì)導(dǎo)致機(jī)體正常生理功能的失調(diào)，引起病理改變和毒性危害。因此，農(nóng)藥殘留的問(wèn)題日益受到人們的關(guān)注，動(dòng)物源性食品中的農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)研究已經(jīng)成為解決貿(mào)易技術(shù)壁壘的關(guān)鍵所在。

氟胺氰菊酯、三唑醇和蠅毒磷等農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用，是蜂王漿出口日本時(shí)有明確限量要求的3種農(nóng)藥殘留。關(guān)于農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法已有許多報(bào)道，如氣相色譜法測(cè)定蠅毒磷和氟氰胺菊酯[1-2]，氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定食品中的三唑醇、氟氰胺菊酯[3-4]，高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定蜂王漿中的氟氰胺菊酯[5-6]以及氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)蠅毒磷[7]等。多種農(nóng)藥殘留量同時(shí)測(cè)定方法可以提高檢測(cè)效率，降低檢測(cè)成本，是眾多檢測(cè)工作者的研究熱點(diǎn)[8-10]。蜂王漿基質(zhì)復(fù)雜，樣品凈化困難，目前對(duì)蜂王漿中多農(nóng)藥殘留同時(shí)測(cè)定的檢測(cè)技術(shù)研究較少[10-12]，迄今為止，同時(shí)測(cè)定蜂王漿中氟胺氰菊酯、三唑醇和蠅毒磷尚未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)蜂王漿樣品中的氟胺氰菊酯、三唑醇、蠅毒磷3種農(nóng)藥殘留量，研究樣品的提取、凈化以及分析方法并用于實(shí)際樣品的檢測(cè)，以期建立準(zhǔn)確、高效的蜂王漿中氟胺氰菊酯、三唑醇、蠅毒磷3種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

氟胺氰菊酯、三唑醇、蠅毒磷標(biāo)準(zhǔn)品(純度＞99%)德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司；無(wú)水硫酸鈉、氨水、正丙醇均為分析純；甲酸為優(yōu)級(jí)純；乙腈、甲醇、乙酸銨為色譜純；雙重蒸餾水。

API3200串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀 美國(guó)ABI公司； 1200高效液相色譜儀(配有二元泵、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、Analyst數(shù)據(jù)處理軟件) 美國(guó)安捷倫科技公司；BS224S萬(wàn)分之一分析天平 德國(guó)Sartorius公司；RJTDL-40B低速臺(tái)式大容量離心機(jī) 江蘇太倉(cāng)儀器設(shè)備廠；RE-52CS-1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠；HLB固相萃取小柱(200mg/6mL) 美國(guó)Waters Oasis公司。

1.2 方法

1.2.1 氟胺氰菊酯、三唑醇、蠅毒磷標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

按標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)標(biāo)示含量進(jìn)行計(jì)算，分別稱取標(biāo)準(zhǔn)品10mg，精確至0.0001g，于10mL容量瓶中用乙腈溶解分別定容至刻度，搖勻，則各標(biāo)準(zhǔn)品的儲(chǔ)備液質(zhì)量濃度為1000mg/L。

分別吸取氟胺氰菊酯、三唑醇、蠅毒磷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙腈稀釋成質(zhì)量濃度為10mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，0.2mL分裝，-18℃保存。

取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，用乙腈分別配制100μg/L和1000μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.2.2 陰性樣品基質(zhì)混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別稱取5份2.0g陰性蜂王漿樣品，用以制作陰性樣品基質(zhì)混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別加100μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液100、200、500，1000μg/L，旋渦混合3min，靜置15min，標(biāo)準(zhǔn)系列含量分別為5、10、25、50μg/kg和100μg/kg。

1.2.3 質(zhì)量控制

每天檢測(cè)陰性樣品回收率：2g王漿樣品中添加質(zhì)量濃度100μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)液200μL，以滿足添加質(zhì)量濃度為10μg/L的要求，回收率要求在70%～120%之間，添加標(biāo)準(zhǔn)液后應(yīng)充分混合，然后靜置15min，再進(jìn)行樣品處理。當(dāng)試劑變動(dòng)時(shí)對(duì)試劑進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 樣品前處理

稱取(2±0.02)g試樣，精確至0.001g。置于50mL塑料離心管中，加入5mL水，分散均勻(干粉樣品需分散至成均勻的漿狀)，加入300μL氨水，分散均勻，加入10mL乙腈，充分振搖提取3～5min，加入8g無(wú)水硫酸鈉，充分振搖提取3～5min，6000r/min離心5min，吸取上清液于另一50mL離心管中，殘?jiān)屑尤?mL乙腈，用力振搖提取1～3min，6000r/min離心5min，合并上清液，加入5mL正丙醇，40℃減壓濃縮至干。加入10mL 50%乙腈超聲波溶解殘?jiān)?.22μm膜過(guò)濾至10mL注射器，注射器與HLB固相萃取小柱連接。HLB固相萃取小柱先用5mL甲醇、5mL水活化，樣液以自然速度過(guò)柱，再用3mL水洗柱，真空抽干柱子15min。用10mL乙腈洗脫，收集洗脫液，40℃減壓濃縮至干，按體積比80:20加入1mL乙腈溶液溶解，溶解液用0.22μm膜過(guò)濾，待測(cè)。

1.2.5 色譜條件

經(jīng)過(guò)優(yōu)化的液相色譜條件：IntersiL ODS C8-3色譜柱(2.1mm×150mm，3μm)；進(jìn)樣量20μL；流速：0.4mL/L；柱溫30℃；分析時(shí)間20min；梯度洗脫，洗脫液A為含0.1%甲酸的甲醇溶液，洗脫液B為含0.1%甲酸和0.5mmol/L乙酸銨的甲醇溶液，洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 液相梯度洗脫程序表Table1 Gradient elution program for HPLC

1.2.6 質(zhì)譜條件

表2 3種藥物殘留的質(zhì)譜參考條件Table2 Mass spectral reference conditions for tau-fluvalinate, coumaphos and triadimenol residues

離子源：電噴霧電離(electrospray ionization，ESI)源，正離子；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(multiple reactionmonitoring，MRM)；霧化氣、卷簾氣、輔助加熱氣、碰撞氣均為高純氮?dú)猓x子源霧化溫度200℃；輔助加熱氣壓強(qiáng)60psi；干燥氣壓強(qiáng)50psi；氣簾氣壓強(qiáng)10psi；碰撞氣壓強(qiáng)5psi；電噴霧電壓4500.00V。其他電壓值、監(jiān)測(cè)離子對(duì)、定量離子對(duì)等具體條件見(jiàn)表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理?xiàng)l件的確定

2.1.1 樣品提取條件的選擇

根據(jù)文獻(xiàn)[13-15]報(bào)道，選擇正己烷、丙酮、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、環(huán)己烷等有機(jī)溶劑在酸性條件下對(duì)農(nóng)藥進(jìn)行提取，并使用固相萃取小柱進(jìn)行凈化。發(fā)現(xiàn)樣品均有肉眼可見(jiàn)的淺黃色色素干擾，雜質(zhì)較多，基質(zhì)干擾大，并污染儀器和色譜柱。分析產(chǎn)生雜質(zhì)污染儀器和色譜柱的原因是酸性條件下用有機(jī)溶劑提取易引起色素、脂肪類等雜質(zhì)被大量提出，而在堿性條件下用正己烷、二氯甲烷、丙酮等溶劑進(jìn)行提取，也容易有較多的色素被提出，因此后續(xù)凈化效果不佳。

乙腈作為AOAC法在有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯、氨基甲酸酯類等農(nóng)藥的分析中所采用的一種溶劑，對(duì)油脂和色素提取較少，是目前常用的一種提取溶劑。綜合蜂王漿的理化特性與文獻(xiàn)[16-20]報(bào)道情況，選擇堿性條件下乙腈提取農(nóng)藥殘留，使蜂王漿中的酸性物質(zhì)與堿反應(yīng)成鹽，提高其極性而不被乙腈所提取，從而提高凈化效果。并且在乙腈中加入少量的正丙醇，調(diào)節(jié)乙腈的極性，增強(qiáng)凈化效果。通過(guò)比較氨水、氫氧化鈉兩種堿性溶劑的反應(yīng)效果，發(fā)現(xiàn)用氨水的效果比較理想，濃縮時(shí)更容易干燥。提取后濃縮至干，用50%乙腈溶解時(shí)樣液呈無(wú)色，樣品的凈化程度大為改善。因此本實(shí)驗(yàn)采用加入氨水的乙腈和正丙醇作為提取溶劑進(jìn)行提取。

2.1.2 固相萃取小柱的選擇

為了提高檢測(cè)限，根據(jù)文獻(xiàn)方法及目標(biāo)物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)，選擇了HLB固相萃取小柱和SupeLco C18固相萃取小柱，進(jìn)行固相萃取凈化。結(jié)果3種農(nóng)藥殘留均在HLB固相萃取小柱被有效提取，在儀器上產(chǎn)生較大的響應(yīng)，達(dá)到需要的檢測(cè)靈敏度。并且在凈化過(guò)程中，HLB固相萃取小柱不受樣液pH值的影響，具有更好穩(wěn)定性，因而選擇了HLB小柱作為凈化柱。

2.2 液相色譜條件優(yōu)化

2.2.1 色譜柱的選擇

為保證不同性質(zhì)的多藥物殘留在色譜柱上的分離效率，選用HypersiL、AkasiL、VenusiL MP、Shim-pack VP、IntersiL等型號(hào)的色譜柱，以尋找分離度好、靈敏度高、峰形窄而對(duì)稱、定量離子無(wú)干擾的色譜柱。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HypersiL柱的氟胺氰菊酯色譜峰分叉，對(duì)稱性不好；AkasiL柱的氟胺氰菊酯和三唑醇的色譜峰對(duì)稱性均不好；VenusiL MP柱的3個(gè)峰分離度不夠；Shim-pack VP柱的對(duì)稱性和分離度雖然也可以達(dá)到要求，但和IntersiL C8-3相比，峰形不夠尖銳，分離度稍差。在所有色譜柱中，IntersiL C8-3色譜柱的靈敏度最好，峰形尖銳，分離度好，因此本實(shí)驗(yàn)選擇IntersiL C8-3柱作為分析柱。

2.2.2 流動(dòng)相及洗脫條件的選擇

為確保所測(cè)農(nóng)藥和雜質(zhì)能夠最大程度的分離，且分析周期短，不干擾農(nóng)藥和雜質(zhì)分離的檢測(cè)，分別對(duì)甲醇、乙腈作流動(dòng)相的分離效果進(jìn)行比較，并研究流動(dòng)相中不同濃度的甲酸或乙酸對(duì)分離效果的影響，選擇合適的揮發(fā)性鹽類，提高離子化效率，以期獲得分離良好、峰形對(duì)稱、信號(hào)強(qiáng)度大、靈敏度高的色譜圖。結(jié)果表明，采用甲醇作為流動(dòng)相中的有機(jī)相，加入0.1%甲酸和0.5mmol/L的乙酸銨作為流動(dòng)相的信號(hào)最強(qiáng)，提高了靈敏度。本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出的最佳色譜條件見(jiàn)表1。

2.3 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

配制1μg/mL各種殘留標(biāo)準(zhǔn)溶液，用針泵以5μg/mL的流速進(jìn)入質(zhì)譜儀，以正離子模式進(jìn)行Q1 MS(Q1)全掃描，確定分子離子峰，調(diào)節(jié)離子源電壓、DP、EP參數(shù)，再以分子離子峰作為母離子，進(jìn)行子離子掃描，調(diào)節(jié)CE參數(shù)，使母離子的強(qiáng)度占子離子強(qiáng)度的1/3～1/4為最佳，從質(zhì)譜圖中選擇2～4個(gè)信號(hào)較強(qiáng)的子離子作為定性離子，離子豐度最強(qiáng)的子離子為定量離子，采用針泵流動(dòng)注射標(biāo)準(zhǔn)溶液，手動(dòng)運(yùn)行RAMP進(jìn)行參數(shù)優(yōu)化。質(zhì)譜參數(shù)確定后，連接液相色譜進(jìn)樣，由于各殘留的離子源溫度、輔助加熱氣、干燥氣、氣簾氣、電噴霧電壓等參數(shù)與在單純質(zhì)譜條件下發(fā)生變化，因此選擇適中的一組參數(shù)在液相條件下進(jìn)行再優(yōu)化，進(jìn)樣5μg/kg的混標(biāo)在以50%乙腈溶液為流動(dòng)相，在2.2.2節(jié)中的液相條件下，再進(jìn)行優(yōu)化與微調(diào)，使各種物質(zhì)的靈敏度、峰形達(dá)到最佳。經(jīng)過(guò)多次調(diào)整得最佳質(zhì)譜條件見(jiàn)表2。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)與最低檢出限

配制3種農(nóng)藥殘留的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照本方法優(yōu)化的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以y表示峰面積，x表示農(nóng)殘含量，得回歸方程和線性相關(guān)系數(shù)(表3)。以信噪比(RSN)為3對(duì)應(yīng)的農(nóng)殘含量確定3種農(nóng)藥殘留的最低檢出限，蠅毒磷為2μg/kg，三唑醇和氟胺氰菊酯均為1μg/kg。蜂王漿中3種農(nóng)藥殘留測(cè)定的總離子流圖及提取離子流圖見(jiàn)圖1～4。

表3 3種藥物殘留的線性范圍和回歸方程Table3 Linear ranges and regression equations for tau-fluvalinate, coumaphos and triadimenol residues

圖1 陰性蜂王漿中添加氟胺氰菊酯、三唑醇和蠅毒磷的總離子圖Fig.1 Total ion chromatograms of blank royal jelly sample spiked with mixed standard solution of tau-fluvalinate, coumaphos and triadimenol

圖2 陰性蜂王漿中添加三唑醇的提取離子流圖Fig.2 Ion chromatogram of a single component in blank royal jelly sample spiked with triadimenol standard solution

圖3 陰性蜂王漿中添加氟胺氰菊酯提取離子流圖Fig.3 Ion chromatogram of a single component in blank royal jelly sample spiked with tau-fluvalinate standard solution

圖4 陰性蜂王漿中添加蠅毒磷的提取離子流圖Fig.4 Ion chromatogram of a single component in blank royal jelly sample spiked with coumaphos standard solution

2.5 方法的添加回收率與精密度

在蜂王漿陰性樣品中，分別對(duì)3個(gè)添加量的殘留標(biāo)準(zhǔn)品做6次平行，按本方法進(jìn)行樣品的處理與測(cè)定，確定本方法的添加回收率和精密度。添加回收率和精密度結(jié)果見(jiàn)表4。添加回收率在78.9%～102.1%之間，變異系數(shù)小于15%，完全滿足國(guó)家規(guī)定的對(duì)痕量蠅毒磷、氟胺氰菊酯和三唑醇藥物殘留的同時(shí)測(cè)定需要。

表4 3種藥物殘留的添加回收率和變異系數(shù)Table4 Recovery rates and RSDs of tau-fluvalinate, coumaphos and triadimenol residues in fortified royal jelly

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)將高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法用于蜂王漿中蠅毒磷、氟胺氰菊酯和三唑醇藥物殘留的同時(shí)測(cè)定。利用一種樣品凈化方法，同時(shí)檢測(cè)3種農(nóng)藥殘留，提高了檢測(cè)效率，降低了檢測(cè)成本，并且該樣品凈化方法譜圖比較干凈，在分析復(fù)雜樣品且農(nóng)藥含量較低時(shí)有一定的優(yōu)勢(shì)。該方法的檢出限、回收率及精密度完全滿足對(duì)進(jìn)出口貿(mào)易中蜂王漿殘留限量測(cè)定的需要。

[1] MIGUEL A. FERNáNDEZ M, JESúS S L. Gas chromatographicmass spectrometric method for the simultaneous determination of amitraz, bromopropylate, coumaphos, cymiazole and fluvalinate residues in honey[J]. Analyst, 1993, 118(12): 1519-1522.

[2] MENKISSOGLU-SPIROUDI U, DIAMANTIDIS G, GEORGIOU V E, et al. Determination of malathion, coumaphos and fl uvalinate residues in honey by gas chromatography with nitrogen phosphorus or electron capture detectors[J]. Journal of AOAC International, 2000, 83(1): 178-182.

[3] 沈偉建, 毛應(yīng)民, 吳斌, 等. 氣相色譜-正化學(xué)源-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定葡萄和葡萄酒中多種唑類殺菌劑的殘留量[J]. 分析化學(xué), 2010, 38(7): 941-947.

[4] 李鋒格, 全曉盾. 氣相色譜質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定番茄制品中擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留[J]. 分析化學(xué)研究簡(jiǎn)報(bào), 2005, 33(6): 838-842.

[5] 王松, 孫鐵珩, 孫麗娜, 等. 畜牧業(yè)污水中大環(huán)內(nèi)酯和擬除蟲(chóng)菊酯類驅(qū)蟲(chóng)劑物質(zhì)的LC/MS/MS檢測(cè)[J]. 安全與環(huán)境學(xué)報(bào), 2009, 9(6): 94-100.

[6] 王明泰, 牟峻, 吳劍, 等. GC-MS法測(cè)定糧谷及油料中55種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量[J]. 分析實(shí)驗(yàn)室, 2006, 25(11): 110-117.

[7] SANDRA R R, MáRIO S G, MARCOS V A, et al. Multiresidue determination of pesticides in honey samples by gas chromatographymass spectrometry and application in environmental contamination[J]. Food Chemistry, 2007, 101(4): 1719-1726.

[8] 李俊, 王震, 龐宏宇, 等. 薏苡仁中多種農(nóng)藥殘留的測(cè)定[J]. 食品科學(xué), 2012, 33(4): 148-152.

[9] 尚德軍, 魏帥, 李世雨. 氣相色譜法/三重四極桿質(zhì)譜測(cè)定番茄醬中72種農(nóng)藥殘留量[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(12): 237-242.

[10] 曹殿潔, 黃信龍. 分散固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法快速檢測(cè)蔬菜中18種農(nóng)藥殘留[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(10): 219-222.

[11] ISIDOROVA V A, CZYZ U, EWSKAA A G, et al. Gas chromatographic and mass spectrometric characterization of the organic acids extracted from some preparations containing lyophilized royal jelly[J]. Journal of Chromatography B, 2009, 877(29): 3776-3780.

[12] XU Jinzhong, TAO Ding, BIN Wu, et al. Analysis of tetracycline residues in royal jelly by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography B, 2008, 868(1/2): 42-48.

[13] KIM J Y, LEE J S. Observation and quantif i cation of self-associated adenosine extracted from royal jelly products purchased in USA by HPLC[J]. Food Chemistry, 2011, 126(1): 347-352.

[14] 沈偉健, 林宏, 趙增運(yùn), 等. 固相分散萃取與氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定食品中三唑醇的殘留量[J]. 色譜, 2008, 26(4): 515-518.

[15] 董盛月. 蜂王漿中氟胺氰菊酯與氟氯苯氰菊酯殘留的提取凈化及超高效液相色譜測(cè)定方法研究[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(8): 272-274.

[16] ISIDOROVA V A, BAKIERB S, GRZECHA I. Gas chromatographicmass spectrometric investigation of volatile and extractable compounds of crude royal jelly[J]. Journal of Chromatography B, 2012, 885-886: 109-116.

[17] MARTíNEZ G M, GIL-GARCíA M D, SANTIAGO V R. Determination of nine pyrethroid insecticides by high-performance liquid chromatography with post-column photoderivatization and detection based on acetonitrile chemiluminescence[J]. Journal of Chromatography A, 2006, 1113(1/2): 191-197.

[18] KORTA E, BAKKALI A, BERRUETA L A, et al. Study of semiautomated solid-phase extraction for the determination of acaricide residues in honey by liquid chromatography[J]. Journal of Chromatography A, 2001, 930(1/2): 21-29.

[19] PARRILLA V P, AHMED M R, MARTíNEZ G M. Solid-phase microextraction (SPME) for the determination of pyrethroids in cucumber and watermelon using liquid chromatography combined with post-column photochemically induced fluorimetry derivatization and fl uorescence detection[J]. Analytica Chimica Acta, 2008, 607(1): 74-82.

[20] EMMANOUEL K, URANIA M S, ANDREAS T. New multiresidue method using solid-phase extraction and gas chromatography-microelectron-capture detection for pesticide residues analysis in royal jelly[J]. Journal of Chromatography A, 2008, 1209(1/2): 17-21.

Simultaneous Determination of Tau-Fluvalinate, Triadimenol and Coumaphos Residues in Royal Jelly Using High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry

ZHOU Ping1，LI Ying-hua2，HU Fu-liang3,*，ZHAO Huan1，WU Jie4，LIANG Shi-jun4
(1. Hangzhou Beewords Apiculture Group Co. Ltd., Tonglu 311500, China；2. Zhejiang Economic and Trade Polytechnic, Hangzhou 310018, China；3. College of Animal Science, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China；4. Measurement Center of Tonglu County, Hangzhou 311500, China)

A method for the determination and quantification of tau-fluvalinate, triadimenol and coumaphos in royal jelly was established by HPLC-MS-MS. Tau-fluvalinate, triadimenol and coumaphos residues were extracted by acetonitrile under alkaline condition, and clean-up of the extracts was carried out using HLB solid phase extraction (SPE) column. Quantif i cation was conducted by HPLC-MS-MS coupled with multiple reaction-monitoring (MRM) system using electron spray ionization source in an external standard mode. The detection limits for coumaphos, triadimenol and tau-fluvalinate residues were 2, 1 μg/kg and 1 μg/kg, respectively. The recovery rates of tau-f l uvalinate, triadimenol and coumaphos residues at three spiked levels (5, 10 μg/kg and 50 μg/kg) in different samples were in the range of 78.9%–102.1% with relative standard deviation of 2.1%–13.6%. The linear range of detection was 5–100 μg/kg (r ＞0.9940). This method can be successfully applied to the qualitative and quantitative analysis of royal jelly samples.

royal jelly；tau-f l uvalinate；triadimenol；coumaphos

O657.63；S896.8

A

1002-6630(2013)18-0180-05

10.7506/spkx1002-6630-201318036

2012-08-26

國(guó)家蜂產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-45)；國(guó)家星火計(jì)劃項(xiàng)目(2010GA701004)

周萍(1968—)，男，工程師，本科，研究方向?yàn)榉洚a(chǎn)品檢測(cè)。E-mail：tdbjhn@126.com

*通信作者：胡福良(1964—)，男，教授，博士，研究方向?yàn)槊鄯淇茖W(xué)。E-mail：flhu@zju.edu.cn