呂立麗，肖建波

（河北省唐山市人民醫(yī)院腫瘤科，河北唐山 063000）

·論 著·

VEGF在SCLC患者血清和病變組織中的表達(dá)及意義

呂立麗，肖建波

（河北省唐山市人民醫(yī)院腫瘤科，河北唐山 063000）

目的研究小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）患者癌組織及血清中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達(dá)及其與SCLC生物學(xué)特性之間的關(guān)系。方法采用放射免疫法及免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)SCLC患者血清及癌組織中VEGF的表達(dá)。結(jié)果SCLC患者血清VEGF的表達(dá)與癌組織VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)；局限期有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者癌組織VEGF表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05），而二者血清VEGF表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；局限期患者血清及癌組織VEGF的表達(dá)均低于廣泛期患者（P＜0.05）。結(jié)論在SCLC患者中，血清VEGF水平與癌組織VEGF表達(dá)相關(guān)，并與分期有關(guān)，VEGF表達(dá)變化可能成為SCLC新的腫瘤標(biāo)志物。

癌，小細(xì)胞；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子類；血清

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是目前已知的作用最強(qiáng)的促血管生成因子之一，對(duì)腫瘤血管生成及血管通透性增加有重要的調(diào)節(jié)作用，能特異性地促進(jìn)細(xì)胞分裂、增殖及遷移，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲過程中起著至關(guān)重要的作用。以往研究［1］表明，VEGF在組織和血清的高表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)密切相關(guān)，且血清VEGF水平及陽性率與腫瘤分期、腫瘤組織微血管密度（mircovessel density，MVD）、腫瘤組織VEGF表達(dá)水平相關(guān)［2-4］。但關(guān)于VEGF表達(dá)與小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）的研究報(bào)道較少。我們通過放射免疫法及免疫組織化學(xué)法分別檢測(cè)SCLC患者血清及病變組織中VEGF的表達(dá)，探討SCLC患者血清及病變組織VEGF的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分期的關(guān)系，旨在揭示其與SCLC發(fā)展的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集2009年3月—2011年3月唐山市腫瘤醫(yī)院未經(jīng)任何治療的SCLC患者40例，其中男31例，女9例，年齡40～72歲，平均58歲。以上患者均由纖維支氣管鏡直視下采取病理組織樣本進(jìn)行病理確診，SCLC分期依據(jù)美國聯(lián)合癌癥分類委員會(huì)建議的分期標(biāo)準(zhǔn)，即局限期和廣泛期。局限期指SCLC局限于同側(cè)胸腔、縱隔和鎖骨上，但不能有明顯上腔靜脈壓迫、聲帶麻痹和胸腔積液；廣泛期是指病變超越了上述范圍。為了明確疾病的分期，40例SCLC患者都進(jìn)行了如下的檢查，體格檢查、頭胸腹部腎上腺CT、腦MRI、纖維支氣管鏡檢查和骨掃描、PET-CT掃描、胸腔心包積液細(xì)胞學(xué)檢查、縱隔鏡、骨髓活組織檢查和（或）骨髓穿刺。所有患者術(shù)前均未接受過化療或放療治療。VEGF試劑盒由北京華英生物技術(shù)研究所提供，VEGF免疫組織化學(xué)抗體為兔抗人抗體，由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集：所有患者均于清晨空腹抽取靜脈血3mL置于普通促凝管中，室溫靜置30min，3 500r/min離心10min，取上層血清用于VEGF的檢測(cè)。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色：將待檢測(cè)標(biāo)本統(tǒng)一切成4μm厚石蠟切片，提取組織細(xì)胞，按試劑盒說明進(jìn)行免疫組織化學(xué)（SP法）染色。石蠟切片脫蠟至水，蒸餾水沖洗，PBS浸泡5min，抗原熱修復(fù)。3％ H2O2室溫孵育5～10min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗，2min×3次。滴加一抗工作液VEGF，4℃過夜。PBS沖洗，2min×3次。滴加試劑1（polymer helper），室溫孵育20min，PBS沖洗，2min×3次。滴加試劑2（poly peroxidase-anti-mouse/ rabbit IgG），室溫孵育20～30min，PBS沖洗，2min× 3次。顯色劑DAB顯色。自來水充分沖洗，HE復(fù)染，脫水透明，封片。結(jié)果判定，VEGF表達(dá)于癌細(xì)胞胞漿，呈棕黃色顆粒；計(jì)數(shù)5個(gè)不同高倍視野下200個(gè)癌細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)＞10％為該抗原表達(dá)陽性（圖1），≤10％為陰性（圖2）。

圖1 癌組織VEGF的陽性表達(dá)（免疫組織化學(xué)×100）Figure 1 The positive expression of VEGF in tumor tissue（immunohistochemistry×100）

圖2 癌組織VEGF的陰性表達(dá)（免疫組織化學(xué)×100）Figure 2 The negative expression of VEGF in tumor tissue（immunohistochemistry×100）

1.2.3 放射免疫法檢測(cè)：分別取緩沖液200μL，零標(biāo)準(zhǔn)液100μL，標(biāo)準(zhǔn)液100μL，標(biāo)本100μL，將125IVEGF 100μL除留取對(duì)照外，分別加入上述4種標(biāo)本中，再將VEGF抗體100μL分別加入零標(biāo)準(zhǔn)液、標(biāo)準(zhǔn)液及標(biāo)本中，混勻，4℃放置24h。分別將分離劑500μL加入125I-VEGF空白組、緩沖液、零標(biāo)準(zhǔn)液、標(biāo)準(zhǔn)液及標(biāo)本中，混勻，室溫放置15min，3 500r/min離心15min。棄上清，測(cè)沉淀計(jì)數(shù)。由全自動(dòng)放射免疫γ計(jì)數(shù)儀直接讀出結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS13.0版本統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 癌組織VEGF表達(dá)與血清VEGF濃度的相關(guān)性：SCLC患者癌組織VEGF表達(dá)水平與血清VEGF濃度呈正相關(guān)（r=0.63，P＜0.05），癌組織VEGF表達(dá)水平越高，血清VEGF濃度也越高。

2.2 局限期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與血清VEGF濃度的關(guān)系：血清VEGF濃度在局限期SCLC患者有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示淋巴結(jié)是否有轉(zhuǎn)移可能對(duì)血清VEGF濃度無影響。見表1。

表1 有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移SCLC患者血清VEGF濃度比較Table 1 Com parison of serum VEGF levels in patients of SCLC w ith lym ph nodemetastasis and those w ithout lym ph nodemetastasis

2.3 臨床分期與血清VEGF濃度的關(guān)系：SCLC局限期與廣泛期血清VEGF水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示血清VEGF水平可能與SCLC的分期有關(guān)。見表2。

表2 局限期與廣泛期SCLC患者血清VEGF濃度比較Table 2 Com parison of serum VEGF levels in patientsw ith ED-SCLC and those w ith LD-SCLC

2.4 局限期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與癌組織VEGF表達(dá)的關(guān)系：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移局限期SCLC患者癌組織VEGF表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05），提示癌組織VEGF表達(dá)與局限期SCLC患者是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。見表3。

表3 有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移SCLC患者癌組織VEGF表達(dá)比較Table 3 The tissue expression of VEGF in patients of SCLC w ith lymph nodemetastasis and those w ithout lymph nodemetastasis

2.5 臨床分期與癌組織VEGF表達(dá)的關(guān)系：臨床分期與癌組織VEGF表達(dá)有關(guān)，廣泛期VEGF表達(dá)高于局限期（P＜0.05）。見表4。

表4 局限期與廣泛期SCLC患者癌組織VEGF表達(dá)比較Table 4 The expression of VEGF in carcinoma tissue of patientsw ith ED-SCLC and those w ith LD-SCLC

3 討 論

本研究證實(shí)肺癌組織中有VEGF的表達(dá)，這與文獻(xiàn)報(bào)道［1，5］VEGF促腫瘤生長(zhǎng)，對(duì)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移等發(fā)揮著重要作用相一致，肺癌組織和血液中均有VEGF水平的升高［6］。本研究檢測(cè)的40例SCLC患者病理組織VEGF的表達(dá)水平與血清VEGF濃度呈正相關(guān)，提示血清VEGF可反映癌組織VEGF的表達(dá)情況，與以往的研究報(bào)道相符［7-9］。

本研究結(jié)果證明癌組織VEGF表達(dá)與SCLC分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，局限期VEGF表達(dá)低于廣泛期，局限期無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同時(shí)血清VEGF濃度局限期也低于廣泛期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示VEGF可作為肺癌發(fā)生發(fā)展的臨床監(jiān)測(cè)指標(biāo)；但SCLC患者有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移血清VEGF濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與影響血清VEGF的因素較多［10-11］和患者例數(shù)較少有關(guān)。

因此，本研究結(jié)果為明確血清中VEGF在SCLC發(fā)展中的作用和作為一種腫瘤檢測(cè)標(biāo)志物的可行性提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，而VEGF反映淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及分期的具體濃度有待進(jìn)一步探討。

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（本文編輯：劉斯靜）

表1 2組對(duì)藥物知識(shí)了解程度和治療依從性比較

3 討 論

慢性心力衰竭的治療是針對(duì)病因和癥狀用藥調(diào)整，正確的藥物治療方法是治療疾病的前提，若患者不服從治療，不按規(guī)定用藥，則不能達(dá)到預(yù)期的目的和效果。所以，合理科學(xué)用藥和長(zhǎng)期服藥依從性的建立至關(guān)重要，因此要求護(hù)士不但要了解此類疾病的治療方法、過程，更要參與到治療當(dāng)中，保證患者嚴(yán)格遵醫(yī)囑用藥。降低住院率和病死率。

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（本文編輯：趙麗潔）

EXPRESSION OF VEGF IN SERUM AND LESION TISSUE AND ITS VALUE IN PATIENTSW ITH SCLC

LV Lili，XIAO Jianbo
（Department of Oncology，the People's Hospital of Tangshan City，Hebei Province，Tangshan 063000，China）

Objective To study the expression of vascular endothelial growth factor（VEGF）in serum and tumor tissue of patientswith small cell lung cancer（SCLC）and to explore its correlation with biological characters of the disease.MethodsExpression of VEGF in serum of patientswith SCLC was detected by radioimmunoassay.Immunohistochemistry method（SP）was used to examine VEGF expression in tumor tissues.ResultsSerum VEGF level in patients with SCLC was correlated with the tumor tissue expression of VEGF（P＜0.05）；The expression of VEGF in tumor tissue of limited diseasesmall cell lung cancer（LD-SCLC）patients with lymph node metastasis was higher than those without lymph nodemetastasis（P＜0.05）.But there was no significant difference in serum VEGF between the two groups（P＞0.05）；The expression of VEGF in serum and tissue of patientswith LD-SCLC was lower than those with extensive disease-small cell lung cancer（ED-SCLC）（P＜0.05）.ConclusionThe serum level of VEGF in patients with SCLC is correlated with the tissue expression of VEGF；There are remarkable correlations between the expression of VEGF and clinical stage.VEGFmay be identified as a new diagnostic marker in SCLC.

carcinoma，small cell；vascular endothelial growth factors；serum

R734.2

A

1007-3205（2013）02-0140-04

2012-03-22；

2012-04-16

呂立麗（1978-），女，河北玉田人，河北省唐山市人民醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事腫瘤放化療研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.02.006