楊文軍 崔秋環(huán) 蔡欣蕊 趙興國 錢秋海

（1山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，濟南250014；2山東中醫(yī)藥大學第一臨床學院，濟南250011）

黃連解毒湯對糖尿病大鼠血清chemerin水平的影響※

楊文軍1崔秋環(huán)2蔡欣蕊2趙興國2錢秋海1

（1山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，濟南250014；2山東中醫(yī)藥大學第一臨床學院，濟南250011）

目的 研究黃連解毒湯干預糖尿病大鼠血清chemerin水平的變化情況，初步探討黃連解毒湯改善胰島素抵抗的作用機制。方法實驗采用高脂高糖飲食聯(lián)合鏈脲佐菌素（STZ）復制大鼠糖尿病模型，連續(xù)給黃連解毒湯6周后測定空腹血糖（FBG）、空腹胰島素（FINS）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量，同時以測定脂肪因子chemerin水平的變化。結果給予黃連解毒湯組治療的糖尿病大鼠，其血清中FBg、TC、Tg、LDL-C水平顯著低于模型組（P＜0.01），HDL-C水平高于模型組（P＜0.01），血清chemerin水平顯著低于模型組（P＜0.01）。結論 黃連解毒湯對高脂高糖飲食聯(lián)合小劑量STZ所致糖尿病大鼠有一定的治療作用，能改善胰島素抵抗，其機制可能是通過調節(jié)脂肪因子chemerin的表達，從而降低了炎癥信號通路，改善了脂肪組織的慢性炎癥反應，繼而改善胰島素抵抗。

黃連解毒湯；糖尿??；大鼠血清chemerin

黃連解毒湯方出于《肘后備急方》，名見《外臺秘要》引崔氏方，由黃連、黃芩、黃柏、梔子以3∶2∶2∶3的比例組成。本方苦寒直折，臨床上一直作為清熱解毒的基礎方而用以大熱煩躁、口燥咽干、舌紅苔黃、脈數(shù)有力的臨床癥狀。實驗研究表明黃連解毒湯具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛的療效［1-2］，能增加胰島素的敏感性［3-5］，增加胰島素受體、受體底物等的數(shù)量或活性，促進糖原的合成，抑制糖原的分解，促進外周組織對葡萄糖的利用，從多個角度改善胰島素抵抗，并且中藥改善胰島素抵抗副作用少［6-7］。近年來發(fā)現(xiàn)脂肪因子Chemerin與胰島素抵抗關系密切。本實驗以wistar大鼠制作Ⅱ型糖尿病模型，以黃連解毒湯干預，觀察其對糖尿病大鼠血清脂肪細胞因子chemerin水平的變化情況。

1 材料與方法

1.1 藥物和試劑 黃連解毒湯水煎劑：方中所需中藥由山東省中醫(yī)院提供。黃連解毒湯原方（黃連9g，黃芩6g，黃柏6g，桅子9g）由山東省中醫(yī)院煎藥室濃縮成煎劑，每ml液體含黃連解毒湯生藥1g。二甲雙胍懸濁液：鹽酸二甲雙胍（山東力諾科技制藥有限公司，國藥準字H37023557，生產(chǎn)批號：BC0188）研末，加100ml生理鹽水配成2%懸濁液。藥物配制好以后置于4℃冰箱冷存，臨用前拿出，待恢復室溫后灌胃使用，用后繼續(xù)置于4℃冰箱冷存。鏈脲佐菌素（STZ）（批號：B64927美國Sigma公司）；大鼠胰島素酶免試劑盒（美國R&DSystem）；檸檬酸鹽緩沖液（修復液）；Chemerin酶聯(lián)免疫試劑盒：（北京博奧森公司，Bio-Swamp Life Science，批內變異系數(shù)＜5%）。

1.2 動物和動物飼料 雄性Wistar大鼠，3月齡，體重（300±30）g，購于山東中醫(yī)藥大學動物實驗中心，許可證號：SCXK（魯）20110003。動物飼養(yǎng)環(huán)境：山東中醫(yī)藥大學動物實驗中心，室內潔凈，通風干燥，光照時間和黑暗時間各12小時，環(huán)境室溫：22～25℃，環(huán)境濕度：50%～60%。普通飼料由山東中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供。高脂高糖飼料（配方：10.0%豬油，20.0%

蔗糖，10.0%蛋黃粉，0.5%膽酸鈉和59.5%普通飼料）由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供。（許可證編號：SCXK（京）2009-0012）提供。除注射STZ前、OGTT時、每周定時測體重時、處死前禁食不禁水外，其余時間自由飲食。

1.3 動物分組及藥物治療 60只Wistar大鼠適應性喂養(yǎng)2周后，按體重隨機選取10只大鼠作為空白組?？瞻捉M繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)；剩余50只大鼠給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)。高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周。4周后所有大鼠禁食不禁水12小時，稱重。高糖高脂組按35mg／kg腹腔注射1.75%STZ檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，空白組按同等劑量的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液腹腔注射（注：檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液配制：取2.1g檸檬酸加入100ml雙蒸水，配制成0.1mmol／lA液，取2.94g檸檬酸鈉加入100ml雙蒸水，配制成0.1mmol／lB液。取28mlA液與22mlB液混合，用雙蒸水定容至100ml，用pH試紙測pH為4.2～4.5，即為檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，臨用前10分鐘配制；1.75%STZ檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液配制：取700mgSTZ溶于40ml上述檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，即可配制成1.75%STZ檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，現(xiàn)用現(xiàn)配，配制過程防潮，配制后30分鐘內用完）。STZ注射72小時后，所有大鼠禁食不禁水12小時，20%葡萄糖溶液按照2.0g／Kg劑量灌胃以測OGTT。斷尾法取血，OneTouch強生血糖儀分別測該組大鼠空腹血糖（FBG）、OGTT后2小時血糖（2hBG），酶聯(lián)免疫法測空腹胰島素（FINS）。取FBG≥7.8mmol／l或血糖峰值≥16.7mmol／l的大鼠為造模成功大鼠。共有32只大鼠符合上述條件。隨機將符合條件的大鼠分為模型組10只，二甲雙胍對照組（0.135mg／g／d二甲雙胍灌胃）10只，黃連解毒湯聯(lián)合二甲雙胍治療組（0.135mg／g／d二甲雙胍＋5.4mg／g／d黃連解毒湯煎劑）10只。空白組、模型組灌服生理鹽水。以上各組大鼠每周測空腹體重，根據(jù)體重調整給藥劑量，每兩周測隨機血糖。連續(xù)灌胃6周。

1.4 檢測指標 實驗結束時，所有大鼠禁食不禁水12小時，稱重，6%水合氯醛（0.5ml／100g）腹腔注射，麻醉，常規(guī)固定、消毒、鋪無菌洞巾等。沿大鼠腹部正中線切開腹壁，用棉簽剝離出腹主動脈，腹主動脈取血4～5ml，分裝試管。血漿靜置1小時后以3000轉／分，離心15min，利用移液槍取上清液分裝EP管后-20℃冷凍保存。FBg，TC、Tg、HDL-C、LDL-C用全自動生化分析儀檢測，F(xiàn)INS、chemerin用酶免法檢測。

1.5 統(tǒng)計學處理 使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對所有實驗數(shù)據(jù)進行分析處理，計量資料以標準差（χ±S）表示，進行t檢驗，差異有顯著性意義的檢驗標準：P＜0.01。

2 結果

2.1 藥物干預6周后大鼠FBG及FlNS水平的變化 治療組和對照組FBG顯著降低（P＜0.01），模型組FINS明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計分析有顯著性差異（P＜0.01）。與模型組對比，治療組和對照組的血清FINS明顯下降，經(jīng)分析有顯著性差異（P＜0.01），治療組和對照組比較，有顯著差異性（P＜0.01），治療組與空白組比較，兩者沒有差異性（P＞0.05），說明經(jīng)6周的治療后，黃連解毒湯治療組和二甲雙胍對照組FINS都有顯著降低的變化，并且黃連解毒湯治療組效果優(yōu)于二甲雙胍對照組。見表1。

表1 藥物干預6周后大鼠FBG及FINS水平變化

2.2 藥物干預6周后大鼠chemerin水平的變化 治療組與對照組chemerin顯著降低（P＜0.01），治療組與對照組相比沒有顯著性差異（P＞0.05）。見表2。

表2 藥物干預6周后大鼠血清chemerin水平的變化

2.3 藥物干預6周后大鼠TC、Tg、HDL-C、LDL-C水平的變化與模型組比較，治療組和對照組TC、Tg，HDL-C、LDL-C有顯著性差異（P＜0.01），治療組與對照組比較有顯著性差異（P＜0.01）。見表3。

表3 藥物干預6周后大鼠TC、Tg，HDL-C、LDL-C水平的變化（χ±S）

3 討論

現(xiàn)代研究認為Ⅱ型糖尿?。╠iabetesmellitus，T2DM）主要是以胰島素抵抗（IR）和胰島β細胞呈現(xiàn)進行性衰退為主要病理改變的疾病，其中胰島素抵抗是Ⅱ型糖尿病發(fā)生與發(fā)展的關鍵因素，而慢性低度炎癥反應在胰島素抵抗及Ⅱ型糖尿病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。因此抗炎治療是Ⅱ型糖尿病代謝紊亂的控制和并發(fā)癥的防治的關鍵。脂肪組織不再僅是作為存儲能量的器官，更是一個能分泌多種激素及細胞因子的活躍內分泌器官，其分泌的多種細胞因子參與調節(jié)脂肪細胞的分化及代謝，其分泌代謝失常將導致肥胖個體的慢性炎性反應。chemerin通過與chemerinR結合募集抗原提呈細胞（APC）如巨噬細胞等［8］，APC細胞不僅具有吞噬作用還能釋放多種炎癥因子如TNF-a、白細胞介素-6、C-反應蛋白等，chemerin及其受體調節(jié)上述炎癥因子的表達進一步導致炎癥反應的發(fā)生［9］。這些炎癥因子參與胰島素抵抗的發(fā)生，是胰島素抵抗炎癥學

說的基礎［10］。因此抗炎治療是Ⅱ型糖尿病代謝紊亂的控制和并發(fā)癥的防治的關鍵。本實驗通過研究血清中chemerin水平的變化，探討炎癥與胰島素抵抗的關系。

隨著對糖尿病發(fā)病機制的不斷深化，“毒邪”致病的觀點被不斷提及，中醫(yī)學的觀點認為糖尿病發(fā)病的病機是以陰虛為本，燥熱為標，采用益氣養(yǎng)陰作為治療糖尿病的根本原則。然而臨床實踐表明，單純采用益氣養(yǎng)陰治法治療糖尿病療效卻不滿意。根據(jù)糖尿病炎性反應學說及有關中醫(yī)內毒致病的學說，近幾年來許多研究者對黃連解毒湯防治糖尿病的作用進行了研究報道，把清熱解毒治法作為治療糖尿病治則之一。課題組在多年應用黃連解毒湯治療Ⅱ型糖尿病的臨床經(jīng)驗中，體會到了黃連解毒湯能改善胰島素抵抗，調節(jié)炎癥因子水平，從而防治糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。本實驗觀察到Ⅱ型糖尿病大鼠在給予黃連解毒湯干預6周后，血脂血糖較模型組顯著降低（P＜0.01），與空白組相比無明顯差異（P＞0.05），且顯著優(yōu)于二甲雙胍對照組（P＜0.01）；血清chemerin水平較模型組顯著降低（P＜0.01）。推測黃連解毒湯通過抑制炎癥反應的信號傳導通路，進而改善胰島素抵抗。這為臨床防治Ⅱ型糖尿病及其各類并發(fā)癥提供了新的途徑和方法。

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Effects of Huanglian Jiedu Decoction on Chemerin Levels in Diabetic Rats Serum

Yang Wenjun1Cui Qiuhuan2Cai Xinrui2Zhao Xingguo2Qian Qiuhai1
(1 Affiliated Hospital,Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Shandong Province,Jinan,250014,China; 2 The First Clinical College,Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Shandong province,Jinan,250014,China

Absrracr：ObjecriveChanges of the Chemerin level of diabetic rats serum treated by Huanglian Jiedu Decoction，preliminarily study the mechanism of insulin resistance improving by Huanglian Jiedu Decoction．MerhodsThe experiment rat model used the high fat and sugar diet combined with streptozotocin（STZ）of continuous replication，examined fasting blood glucose（FBG），fasting insulin（FINS），total cholesterol（TC），triglyceride（TG），high density lipoprotein cholesterol（HDL-C），low density lipoprotein cholesterol（LDL-C）content after Huanglian Jiedu decoction for 6 weeks，and determined the change in fat factor Chemerin level．ResulrsThe FBG，TC，TG，LDL-Clevels in serum of the treatment group were significantly lower than those in the model group（P＜0.01），the level of HDL-C in serum of the treatment group was higher than that of model group（P＜0.01），the level of Chemerin in serum of the treatment group was significantly lower than that of model group（P＜0.01）．ConclusionHuanglian Jiedu decoction had certain therapeutic effect on high fat and sugar diet combined with low dose of STZ induced diabetic rats，and improved insulin resistance．The mechanism was probably regulated the expression of Adipocyte Factor Chemerin，there by reducing the inflammatory signaling pathway，improved the fatty tissue of chronic inflammation and insulin resistance．

Huanglian Jiedu Decoction；Diabetes mellitus；Chemerin

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.15.106

1672-2779（2013）-15-0157-03

楊 佳

2013-06-18）

山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計劃項目［No：2009-088］