姜啟娟 劉 暢 韓 宇

（1吉林省通化市食品藥品檢驗(yàn)所，通化134000；2吉林省吉林市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林132000）

HPLC法測(cè)定腎衰寧丸中鹽酸小檗堿的含量

姜啟娟1劉 暢1韓 宇2

（1吉林省通化市食品藥品檢驗(yàn)所，通化134000；2吉林省吉林市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林132000）

腎衰寧丸；鹽酸小檗堿；HPLC

腎衰寧丸是由太子參、黃連、丹參、半夏（制）、陳皮、茯苓、大黃等十味中藥組成。黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch．三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云連Coptisteeta Wall.Paeonia lactiflora Pall.的干燥根莖。主要成份為鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀等。用于濕熱痞滿，嘔吐吞酸等癥。與本品的功能主治有密切關(guān)系，是本制劑的主藥之一。因此，以黃連中鹽酸小檗堿作為含量測(cè)定指標(biāo)來控制本制劑的內(nèi)在質(zhì)量具有合理性。我們采用反相高效液相色譜法測(cè)定黃連中鹽酸小檗堿的含量，方法簡(jiǎn)便，易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好。

1 儀器與試藥

日本島津LC-2010AHT高效液相色譜儀；AB265-S型電子天平，BSA224S型電子天平。

鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)：110713-200208，產(chǎn)地：中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所，規(guī)格：供含量測(cè)定用），乙腈為色譜純，水為純化水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜柱依利特C18（4.6×200mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液（30∶70）；流速：0.8ml／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：349nm；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 對(duì)照品及樣品溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加鹽酸-70%乙醇（1∶100）混合液制成每1ml含50μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備取本品適量，研細(xì)，取約0.7g，精密稱定，精密加鹽酸-70%乙醇（1∶100）混合液50ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，取出，放冷，再稱定重量，用鹽酸-70%乙醇（1∶100）混合液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml置10ml量瓶中，用鹽酸-70%乙醇（1∶100）混合液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備取不含黃連的陰性對(duì)照樣品照供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 干擾試驗(yàn)照上述色譜條件，吸取上述三種溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照樣品溶液在此保留時(shí)間無干擾，證明此方法可行。

2.4 線性關(guān)系考察分別精密吸取對(duì)照品溶液2、6、10、14、18μl測(cè)定，以進(jìn)樣量和峰面積積分值進(jìn)行回歸，得到回歸方程為Y＝4342997.059x-5331，r＝0.9999。結(jié)果表明鹽酸小檗堿在0.051～0.459μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)分別精密吸取同一供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，鹽酸小檗堿面積平均值為110425，其RSD＝0.15%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)分別精密吸取同一供試品溶液10μl，于0，2，4，8，12h進(jìn)樣，測(cè)定鹽酸小檗堿平均峰面積值為1129755，其RSD＝0.20%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品6份，按供試品溶液的制備方法制備、測(cè)定，結(jié)果鹽酸小檗堿平均含量為18.1mg／g，其RSD＝0.36%。

2.8 回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的供試品（含量為18.16mg／g）6份，分別精密加入對(duì)照品溶液（0.451mg／ml）20ml，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

如表1所示，測(cè)得鹽酸小檗堿的平均回收率為99.98%，RSD＝0.14%

2.9 樣品含量測(cè)定取3批樣品，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測(cè)定含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中鹽酸小檗堿含量測(cè)定結(jié)果（n＝4）

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇我們對(duì)乙腈-0.033mol／L磷酸二氫鉀溶液（30∶70）、乙腈-0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液（30∶70）進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)，結(jié)果，以乙腈-0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液（30∶70）為流動(dòng)相分離效果較好，保留時(shí)間適度，因此，確定其為本法的流動(dòng)相。

3.2 提取方法的考察我們采用了鹽酸-甲醇（1∶100）混合溶液在60℃水浴加熱超聲提取。用鹽酸-甲醇（1∶100）混合溶液加熱回流提?。挥名}酸-乙醇70%（1∶100）混合溶液加熱回流提?。唤?jīng)對(duì)比發(fā)現(xiàn)用鹽酸-70%乙醇（1∶100）混合溶液加熱回流提取方法測(cè)定含量高，分離效果好。因此我們采用正文所述的供試品溶液的制備方法。

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.19.103

1672-2779（2013）-19-0148-01

蘇 玲

2013-08-29）