趙登賢，楊文東

(1、茌平縣人民醫(yī)院檢驗科,山東聊城252100；2、利津縣第二人民醫(yī)院，山東東營257447)

HBV-DNA陽性孕婦產(chǎn)后臍帶血及乳汁中HBV-DNA載量的檢測分析

趙登賢1，楊文東2

(1、茌平縣人民醫(yī)院檢驗科,山東聊城252100；2、利津縣第二人民醫(yī)院，山東東營257447)

目的通過熒光定量PCR(FQ-PCR)方法檢測血清HBV-DNA陽性產(chǎn)婦產(chǎn)后臍帶血及乳汁HBV-DNA載量，探討胎兒宮內(nèi)感染HBV及乳汁攜帶HBV與產(chǎn)婦HBV-DNA載量的相關(guān)性。方法2010年1月至2012年11月，選取在產(chǎn)科住院分娩的HBV-DNA陽性產(chǎn)婦149例，采用FQ-PCR方法檢測產(chǎn)婦產(chǎn)前血清、產(chǎn)后臍帶血和乳汁HBV-DNA載量。結(jié)果①選擇有HBV感染史產(chǎn)婦304例中149例HBV-DNA陽性，陽性率為49.01%(149/304)；②149例HBV-DNA陽性產(chǎn)婦胎兒宮內(nèi)感染為42.95%；HBV-DNA陽性孕婦乳汁中HBV-DNA陽性率(71.14%)顯著高于臍血(42.95%)(P＜0.01)；HBV-DNA≥1×105組臍帶血、初乳及滿月乳中HBV-DNA陽性率(61.29%、82.80%、100.00%)顯著高于1×103≤HBV-DNA＜1×105組(12.50%、51.79%、75.00%)(P＜0.01)；滿月乳中HBV-DNA陽性率(90.60%)顯著高于初乳(71.14%)(P＜0.01)。結(jié)論HBV-DNA陽性孕婦胎兒HBV的宮內(nèi)感染率及乳汁中攜帶HBV的陽性率高，與孕婦血清HBV-DNA載量正相關(guān)，阻斷HBV的宮內(nèi)感染及減少乳汁攜帶HBV者，必須有效的降低孕婦血中的HBV-DNA載量水平。

產(chǎn)婦；乙型肝炎病毒；HBV-DNA載量；宮內(nèi)感染；乳汁

我國是乙型肝炎的高流行區(qū)，人群乙型肝炎病毒(HBV)攜帶率高達10%～20%，超過1.2億，其中40%～50%通過母嬰傳播[1-2],圍產(chǎn)期傳播是重要的傳播途徑，宮內(nèi)感染是母嬰傳播的主要途徑，圍產(chǎn)期母嬰垂直傳播者HBV感染發(fā)展結(jié)局80%～90%為無癥狀攜帶者,但是其確切的傳播規(guī)律和機制至今仍未完全闡明。宮內(nèi)感染也是導致嬰兒出生后乙肝疫苗接種失敗的主要原因。母乳含有豐富的營養(yǎng)成分和免疫物質(zhì)，是嬰兒成長最理想的營養(yǎng)品。若母乳HBV-DNA陽性，采取退乳及人工喂養(yǎng)已成為共識[3]。熒光定量PCR(FQ-PCR)方法檢測HBV-DNA載量為HBV存在和復制的直接證

據(jù)。為了探討胎兒宮內(nèi)感染HBV及乳汁攜帶HBV與產(chǎn)婦HBV-DNA載量的相關(guān)性，我們采用FQPCR方法檢測了HBV-DNA陽性產(chǎn)婦產(chǎn)后臍帶血及乳汁HBV-DNA載量，現(xiàn)分析報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象選取2010年1月至2012年12月，選擇在本院住院分娩的有HBV感染史產(chǎn)婦304例，產(chǎn)前采用FQ-PCR方法檢測血液HBVDNA載量，據(jù)血液HBV-DNA載量檢測結(jié)果進行分組。所有產(chǎn)婦均無肝炎癥狀及體征，ALT正常，全部病例符合2000年全國病毒性肝炎學術(shù)會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》診斷標準，并排除其他病毒(如丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒等)感染。

1.2 檢測項目與方法產(chǎn)婦產(chǎn)前血液(肘靜脈)、產(chǎn)后臍帶血及乳汁中HBV-DNA載量。采集產(chǎn)婦產(chǎn)前血液及產(chǎn)后臍帶血2～3ml，分離血清檢測HBVDNA載量水平。采集初乳(產(chǎn)后24h內(nèi))及滿月乳(產(chǎn)后30d)(注意采前先用溫水清洗乳頭，輕輕擠出乳汁)各2～3ml，置于無菌干燥管內(nèi)，于4℃冰箱保存檢測HBV-DNA載量水平。以上標本均于12h內(nèi)進行檢測。采用FQ-PCR方法檢測，HBV-DNA試劑盒為廣州中山醫(yī)科大學達安基因診斷中心提供，PCR儀為美國生產(chǎn)的ABI 7000熒光定量基因擴增分析儀，Backman儀器有限公司生產(chǎn)的Backman高速冷凍離心機。HBV-DNA載量≥1×103copies/ml判為陽性。臍帶血HBV-DNA載量≥1× 103copies/ml，即判為宮內(nèi)感染。

1.3 統(tǒng)計學處理采用SPSS15.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 有HBV感染史產(chǎn)婦產(chǎn)前血液HBV-DNA載量檢測結(jié)果及分組選擇有HBV感染史產(chǎn)婦304例，產(chǎn)前采用FQ-PCR方法檢測血液HBV-DNA載量，149例檢測陽性，即HBV-DNA載量≥1× 103copies/ml，陽性率為49.01%(149/304)。據(jù)血液HBV-DNA載量檢測結(jié)果，把149例檢測陽性產(chǎn)婦分為1×103≤HBV-DNA＜1×105組(56例)和HBVDNA≥1×105組(93例)。

2.2 HBV-DNA陽性孕婦的臍帶血與乳汁中HBV-DNA載量檢測陽性結(jié)果比較見表1。

表1 HBV-DNA陽性孕婦臍帶血與乳汁中HBV-DNA(copy/ml)載量檢測陽性結(jié)果n(%)

表1顯示:149例HBV-DNA陽性產(chǎn)婦產(chǎn)后臍帶血中HBV-DNA陽性64例，發(fā)生率為42.95%；HBV-DNA陽性孕婦乳汁中HBV-DNA陽性率顯著高于臍血(P＜0.01)；HBV-DNA≥1×105組臍帶血、初乳及滿月乳中HBV-DNA陽性率顯著高于1×103≤HBV-DNA＜1×105組(P＜0.01)；滿月乳中HBV-DNA陽性率顯著高于初乳(P＜0.01)。

3 討論

母嬰傳播是HBV感染的最主要的傳播途徑，HBV母嬰傳播的方式有三種：產(chǎn)前宮內(nèi)感染、分娩時傳播(產(chǎn)道感染)及產(chǎn)后水平傳播(產(chǎn)后感染)，其中宮內(nèi)感染是最主要的母嬰傳播方式[4]。因此，研究胎兒宮內(nèi)感染的機制，制定切實可行的阻斷HBV母嬰傳播的方案，對控制HBV傳播具有重要意義。文獻報道[5]：胎兒宮內(nèi)感染HBV的感染率隨母血乙型肝炎表面抗原(HBsAg)滴度的升高而增加。HBV-DNA是衡量HBV復制和傳染性的最可靠的指標[6]。HBV經(jīng)胎盤侵入胎兒的主要途徑是經(jīng)血和/或細胞傳遞的方式而通過胎盤實現(xiàn)的，但新生兒臍血檢測較胎盤更能客觀反映是否存在宮內(nèi)感染[7]，新生兒臍血檢測也是反映胎盤屏障功能的客觀指標[8]。本文，149例HBV-DNA陽性產(chǎn)婦產(chǎn)后臍帶血中HBV-DNA陽性64例，發(fā)生率為42.95%，也就是胎兒宮內(nèi)感染率為42.95%，略高于文獻報道的0.9%～40.1%[9]。HBV-DNA≥1×105組臍帶血中HBV-DNA陽性率顯著高于1×103≤HBV-DNA＜1×105組。結(jié)果表明胎兒宮內(nèi)感染率與孕婦血中HBV-DNA載量有關(guān)，載量越高其發(fā)生率越高[10]，孕婦血中HBV-DNA載量水平高低是決定宮內(nèi)感染的重要因素，嬰兒HBV-DNA載量水平隨母親血液HBV-DNA載量水平升高而升高，存在呈正相關(guān)[9]。因此，阻斷胎兒HBV的宮內(nèi)感染，必須有效的降低孕婦血中的HBV-DNA載量水平。

血液中的HBV來源于肝臟，乳汁中的HBV來源于血液。嬰兒吸吮母乳也可吸入含有HBV的血液，HBV雖不通過消化道傳染，但當新生兒或嬰兒的口腔、咽喉、食道、胃腸黏膜等處有破損、潰瘍，母乳中HBV就可能通過毛細血管進入血液循環(huán)而引起新生兒或嬰兒感染。嬰兒通過乳汁感染HBV與母乳HBV-DNA載量及母親有無及時采取一定的預防措施有關(guān)[11，12]。采用FQ-PCR方法檢測乳汁HBV-DNA載量結(jié)果來判斷是否母乳喂養(yǎng)是可行的方法[3]。本文，149例HBV-DNA陽性產(chǎn)婦的初乳及滿月乳HBV-DNA檢測陽性135例，陽性率達90.60%，母乳喂養(yǎng)能增加嬰兒感染HBV的危險，為了避免母乳喂養(yǎng)傳染嬰兒，149例產(chǎn)婦均接受醫(yī)生建議，采取了退乳及人工喂養(yǎng)。滿月乳中HBV-DNA陽性率顯著高于初乳，原因可能是，HBV從血液循環(huán)向乳汁播散的程度及時間有所不同，隨著時間的推移及乳汁需求量的增加，從血液滲透到乳汁中的HBV量也在增加，導致HBVDNA陽性率的顯著增高。初乳中HBV-DNA陽性率顯著高于臍帶血，可能是胎盤屏障所致。

綜上所述，HBV-DNA陽性孕婦胎兒HBV的宮內(nèi)感染率及乳汁中攜帶HBV的陽性率高，隨著孕婦血清HBV-DNA載量的升高宮內(nèi)感染率及乳汁攜帶HBV者也增高，阻斷HBV的宮內(nèi)感染及減少乳汁攜帶HBV者，必須有效地降低孕婦血中的HBV-DNA載量水平。有HBV感染史的孕婦應(yīng)重視產(chǎn)前FQ-PCR方法檢測HBV-DNA載量，早發(fā)現(xiàn)、早治療，對降低HBV母嬰傳播有重要意義。

[1]劉敏,鐘清華,鐘水嬌.乙肝攜帶孕婦與新生兒乙肝標志物的表達形式及其胎兒宮內(nèi)染感率分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2012,30(5): 515-517.

[2]曾艷梅，張思泉，婁國強，等.替比夫定阻斷乙肝病毒宮內(nèi)感染的臨床研究[J].中國臨床藥理學與診斷學，2012,15(4)：443-445.

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R512.62；R446.61

A

1674-1129(2013)01-0064-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.01.023