霍光明， 韓 建， 張李陽

(南京曉莊學(xué)院藥用菌物研究所，江蘇 南京211171)

黃顙魚(Pelteobagrus vachelli)隸屬于鲇形目、鲿科、黃顙魚屬，俗稱黃臘丁，其肉味鮮美、蛋白質(zhì)高、脂肪少、無肌間刺，是一種小型名優(yōu)淡水經(jīng)濟(jì)魚類，近幾年來其人工養(yǎng)殖發(fā)展迅速，已成為重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖對象。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和社會的進(jìn)步，人類對環(huán)境保護(hù)和自身健康的意識越來越強(qiáng)，對水產(chǎn)品質(zhì)量的要求也越來越高，無公害生態(tài)養(yǎng)殖已成為水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)展的方向，作為優(yōu)良品種和重要養(yǎng)殖對象的黃顙魚也不例外。近年來，已有關(guān)于中草藥、合生素、復(fù)合酶作為飼料添加劑對魚類等水產(chǎn)動物生長及消化酶影響的研究［1-9］。芝芪菌質(zhì)［10-12］是利用藥用真菌新型雙向性固體發(fā)酵技術(shù)，以靈芝(Ganoderma Lucidum)作為發(fā)酵菌種，培養(yǎng)基中添加中藥材黃芪，進(jìn)行雙向性固體發(fā)酵的產(chǎn)物。研究證實(shí)，合理的組合能比真菌或基質(zhì)自身或者二者簡單混合具有更強(qiáng)的藥效作用，也明顯超過僅采用營養(yǎng)基質(zhì)所產(chǎn)生藥用菌質(zhì)的作用;并且無污染、無公害、無毒副作用，含有多種多糖類、核苷酸類、生物堿、三萜類化合物等多種生物活性物質(zhì)。前期研究結(jié)果表明添加一定量的芝芪菌質(zhì)能顯著提升青蝦、河蟹等免疫活性［13-14］，但對黃顙魚生長及免疫活性影響的文獻(xiàn)未見報(bào)道。本試驗(yàn)通過添加不同比例芝芪菌質(zhì)的飼料，測定其對黃顙魚體重、體長、脾臟及頭腎部位免疫指標(biāo)的影響，以期為黃顙魚飼料添加劑的開發(fā)應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動物 試驗(yàn)用黃顙魚取自江蘇省淡水研究所祿口試驗(yàn)基地。

1.1.2 試驗(yàn)藥品及飼料 芝芪菌質(zhì):由南京曉莊學(xué)院藥用菌物研究所提供，為靈芝在黃芪藥渣上發(fā)酵所得，由皂苷、糖類等天然生物活性物質(zhì)組成?；A(chǔ)日糧:魚粉25%、豆粕50%、麩皮20%、玉米粉3%、礦物質(zhì)2%、維生素0.2%(復(fù)合維生素膠囊)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)分組及飼養(yǎng)方法 試驗(yàn)在南京曉莊學(xué)院水產(chǎn)養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。選擇規(guī)格整齊、體格健壯、平均體質(zhì)量的黃顙魚，隨機(jī)分為5 組，每組3 個重復(fù)，每重復(fù)25 尾魚，整個試驗(yàn)期維持水質(zhì)穩(wěn)定，無強(qiáng)烈外界應(yīng)激。馴化5 d 后開始投喂試驗(yàn)日糧，將芝芪菌質(zhì)以不同的添加量加入到黃顙魚基礎(chǔ)日糧中進(jìn)行飼喂，具體分組見表1。

表1 試驗(yàn)分組及飼料組成Table 1 The experimental groups and feed compositions

試驗(yàn)水箱規(guī)格為80 cm×60 cm×100 cm，水體為80 cm×60 cm×50 cm，養(yǎng)殖用水為曝氣后的自來水，每日換水2 次。恒定水溫26 ℃，pH 7.0，試驗(yàn)中連續(xù)充氣，溶解氧≥5.0 mg/L，每日分早、中、晚3 次投喂，投餌率為魚體重的3%，并根據(jù)攝食情況進(jìn)行調(diào)整，觀察并記錄情況，不定期清污。

1.2.2 樣品采集與保存 飼喂35 d 后，對黃顙魚在冰浴條件下進(jìn)行解剖，剝?nèi)「我扰K、頭腎，各組織再按質(zhì)量體積比1∶ 9 加入預(yù)冷生理鹽水，用電動勻漿機(jī)在冰浴條件下進(jìn)行組織勻漿。用Eppendorf 高速冷凍離心機(jī)在4 ℃、8 000 r/min離心20 min，提取上清液作為粗酶液。

1.2.3 黃顙魚生長性能測定 體重(濕重):采用吸水紙吸去飼喂7 d、14 d、21 d、28 d、35 d 黃顙魚體表水分后，用電子天平(精確到0.01 g)稱量體重(g);特定生長率= (lnWt－lnWo)/T×100%。

其中Wt、Wo分別為結(jié)束時平均體重(飼喂35 d)和初始平均體重(飼喂1 d);T 為飼養(yǎng)天數(shù)。

1.2.4 黃顙魚免疫指標(biāo)測定 頭腎部位和脾臟測定指標(biāo):堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LSZ)、超氧化物歧化酶(SOD)。上述指標(biāo)均按由南京建成生物工程研究所購得的試劑盒上的指定方法進(jìn)行測定。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 作初步處理，SPSS 軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用單因子方差(One-Way ANOVA)分析各試驗(yàn)組之間的差異，采用最小顯著差數(shù)法(LSD)進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果

2.1 芝芪菌質(zhì)對黃顙魚體重的影響

芝芪菌質(zhì)對黃顙魚生長影響的結(jié)果見表2。飼養(yǎng)35 d 的試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼料中添加0.50%、0.75%和1.00%芝芪菌質(zhì)的黃顙魚特定生長率顯著高于對照(P ＜0.05)，由此可見，0.50%、0.75%和1.00%芝芪菌質(zhì)的添加量可以明顯提高黃顙魚的生長，其中以1.00%添加水平效果最好。

2.2 芝芪菌質(zhì)對黃顙魚頭腎組織非特異性免疫相關(guān)生化指標(biāo)的影響

芝芪菌質(zhì)對黃顙魚頭腎部位免疫活性的影響見表3。由表3 可知，飼喂35 d 后，與對照相比，0.75%和1.00%芝芪菌質(zhì)添加劑量的黃顙魚頭腎部位免疫活性(堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、溶菌酶和超氧化物歧化酶的活性)均得到了顯著提高(P ＜0.05)，其中0.75%添加劑量組的堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、超氧化物歧化酶和溶菌酶的活性分別比對照提高了48.59%(P ＜0.01)、6.40%(P ＜0.05)、13.00%(P ＜0.05)和37.74% (P ＜0.01);1.00%添加劑量組分別比對照提高了70.97%(P ＜0.01)、19.35%(P ＜0.01)、34.57%(P ＜0.05)和44.66%(P ＜0.01)。

表2 芝芪菌質(zhì)對黃顙魚體重的影響Table 2 The effect of Zhiqi fungal substance on the growth of Pelteobagrus vachelli

表3 芝芪菌質(zhì)對黃顙魚頭腎組織非特異性免疫相關(guān)生化指標(biāo)的影響Table 3 Effect of Zhiqi fungal substance on non-specific immunity of head kidney of Pelteobagrus vachelli

2.3 芝芪菌質(zhì)對黃顙魚脾臟非特異性免疫相關(guān)生化指標(biāo)的影響

芝芪菌質(zhì)對黃顙魚脾臟免疫活性的影響見表4。由表4 可知，飼喂芝芪菌質(zhì)35 d 后，0.50%芝芪菌質(zhì)添加量組的酸性磷酸酶活性顯著高于對照(P ＜0.05)，0.75%添加量組的超氧化物歧化酶活性顯著高于對照組(P ＜0.05)，1.00 添加劑量組的堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、溶菌酶活性分別比對照提高了39.10% (P ＜0.01)、30.60% (P ＜0.01)、

10.60 %(P ＜0.05)。

表4 芝芪菌質(zhì)對黃顙魚脾臟非特異性免疫相關(guān)生化指標(biāo)的影響Table 4 Effect of Zhiqi fungal substance on non-specific immunities of spleen of Pelteobagrus vachelli

3 討論

水產(chǎn)品生長的快慢是水產(chǎn)養(yǎng)殖中最關(guān)注的問題之一。本研究中在飼料中分別添加0.50%、0.75%和1.00%的芝芪菌質(zhì)，對促進(jìn)魚體的特定生長率有明顯的效果，且以1.00%芝芪菌質(zhì)添加劑量的促進(jìn)效果最佳。芝芪菌質(zhì)提高黃顙魚生產(chǎn)性能原因可能是芝芪菌質(zhì)中含有誘食作用的某些糖類，改善了飼料適口性，增強(qiáng)魚的食欲，提高了黃顙魚的采食量。

在養(yǎng)殖過程中大量、無序地使用抗生素等化學(xué)藥物造成的抗藥性以及藥物殘留問題已經(jīng)引起高度重視［15］，尋找高效、安全的綠色飼料添加劑已經(jīng)成為新的方向，其中傳統(tǒng)中草藥研究是目前熱點(diǎn)［16-17］。新型的藥用真菌新型(雙向性)固體發(fā)酵工程是對傳統(tǒng)中藥加工技術(shù)的改革和創(chuàng)新，具有諸多特點(diǎn)和優(yōu)勢［18］。芝芪菌質(zhì)中主活性物質(zhì)多糖的含量顯著提高，同時還產(chǎn)生新的可被利用的活性成分，作為禽類飼料添加劑已被證明比單純靈芝和黃芪藥渣具有更好的促進(jìn)生長和提高免疫力的作用［18-20］。

魚類特異性免疫應(yīng)答能力相對低下，非特異性免疫在其免疫防御中具有重要意義，在抵抗入侵病原生物的過程中，主要依靠其非特異性免疫防御系統(tǒng)清除異物。溶菌酶活性、堿性磷酸酶活性、超氧化物歧化酶活性等非特異性生化指標(biāo)是當(dāng)前評價(jià)魚類非特異性免疫力的常用指標(biāo)［18-22］。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)芝芪菌質(zhì)可以促進(jìn)黃顙魚頭腎及脾臟中酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶的活性，從而提高黃顙魚的非特異性免疫功能。這可能與芝芪菌質(zhì)含多糖和皂苷等生物活性成分有關(guān)。Yin 等［23］研究發(fā)現(xiàn)黃芪多糖可有效提高鯉的非特異性免疫能力，并相應(yīng)提高鯉血清中的抗體水平。Yuan 等［24］研究結(jié)果顯示，特定劑量的黃芪多糖可有效提高鯉免疫相關(guān)基因的表達(dá)水平。同時，黃芪與靈芝在雙向發(fā)酵時某些成分發(fā)生轉(zhuǎn)變，黃芪甲苷轉(zhuǎn)化為6-O-β-D-葡萄糖基-環(huán)黃芪醇［25］，在溶菌酶刺激下，化合物6-O-β-D-葡萄糖基-環(huán)黃芪醇誘導(dǎo)產(chǎn)生IL-1 和IL-8 的能力強(qiáng)于黃芪甲苷［26］，這一轉(zhuǎn)化具有增效的作用，為黃芪發(fā)酵后具有增效作用提供了依據(jù)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在基礎(chǔ)飼料中添加適量的芝芪菌質(zhì)對黃顙魚的生長和非特異性免疫都具有促進(jìn)作用，芝芪菌質(zhì)可以作為一種安全高效的口服免疫增強(qiáng)劑，應(yīng)用于黃顙魚健康養(yǎng)殖及病害防治。

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