俞亞波， 王金玉， 顧玉萍， 顧云飛， 金崇富

(1.江蘇京海禽業(yè)集團(tuán)有限公司，江蘇 南通226103;2.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州225009)

生長(zhǎng)性狀和產(chǎn)蛋性能是雞的重要經(jīng)濟(jì)性狀，是反映雞場(chǎng)生產(chǎn)力和經(jīng)濟(jì)效益的重要指標(biāo)。利用候選基因法進(jìn)行分子標(biāo)記輔助育種，是提高生長(zhǎng)性狀和產(chǎn)蛋性能的基礎(chǔ)。生長(zhǎng)激素-類胰島素-類胰島素結(jié)合蛋白質(zhì)軸(GH-IGF-IGFBP 軸)通過(guò)調(diào)控細(xì)胞的增值和分化，影響動(dòng)物機(jī)體的生長(zhǎng)和生產(chǎn)性能的發(fā)揮［1-3］，GH、IGF 和IGFBP 基因是機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育和生產(chǎn)性能發(fā)揮的重要候選基因。目前已經(jīng)確定有7 種IGFBP 基因(IGFBP1 ～I(xiàn)GFBP7)，IGFBP-3 是其中重要的一種，它是血液中最豐富的IGFBP 結(jié)合形式［3-4］。血液中95% 的IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ都與IGFBP-3 結(jié)合［5-6］。IGFBP-3 有延長(zhǎng)IGF 半衰期、調(diào)節(jié)IGF 的生物學(xué)活性等作用，故IGFBP-3 對(duì)IGF 功能的發(fā)揮有很大影響［7］，從而間接地影響家畜的生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖性能及肉的品質(zhì)等［8-9］。近幾年來(lái)，隨著對(duì)家畜IGFBP-3 研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)IGFBP-3 基因多態(tài)性對(duì)家畜的產(chǎn)奶量、生長(zhǎng)性能［10］、屠宰性能［11-13］以及繁殖性能［14］有顯著影響。

目前，畜禽IGFBP-3 基因多態(tài)性研究主要集中在牛和羊上［15-19］。雞IGFBP-3 基因的遺傳多態(tài)性研究鮮有報(bào)道［20］。本試驗(yàn)把雞IGFBP-3 基因作為影響其體重和母雞產(chǎn)蛋性能的候選基因，利用PCRRFLP 技術(shù)對(duì)4 個(gè)雞品種MspI 酶切位點(diǎn)多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)，并分析其對(duì)京海黃雞部分重要經(jīng)濟(jì)性狀的影響，為將該基因用于京海黃雞的分子標(biāo)記輔助育種提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)雞共326 只，其中200 只京海黃雞和30 只AA 雞取自江蘇京海禽業(yè)集團(tuán)有限公司，46 只鹿苑雞取自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，50 只邊雞取自山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所。試驗(yàn)雞翅靜脈采血，肝素鈉抗凝，按常規(guī)酚/氯仿抽提法提取基因組DNA。收集200 只京海黃雞的以下性狀:初生重、4 周齡體重、8 周齡體重、12 周齡體重、16 周齡體重、300 日齡體重、66 周齡體重、開(kāi)產(chǎn)日齡、開(kāi)產(chǎn)體重、開(kāi)產(chǎn)蛋重、300 日齡產(chǎn)蛋數(shù)、300 日齡蛋重、66 周齡產(chǎn)蛋數(shù)和66 周齡蛋重。

1.2 PCR 引物的設(shè)計(jì)與合成

根據(jù)GenBank 上雞IGFBP-3 基因DNA 序列(基因登錄號(hào):NC006089)，利用Primer 5.0 軟件設(shè)計(jì)1 對(duì)引物，用于擴(kuò)增外顯子2 部分序列。上游引物為5'-CATCTTGGGACCAGTGCTTT-3'，下游引物為5'-ATTTTTCAAGCCTGCTGTGG-3'。擴(kuò)增片段大小為161 bp。引物由上海生物技術(shù)服務(wù)有限公司合成，超純水溶解引物，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 基因型檢測(cè)

采用PCR-RFLP 方法對(duì)所有個(gè)體進(jìn)行基因型檢測(cè)。PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系總體積為20.0 μl，其中DNA 1.0 μl，10 ×Buffer 2.0 μl，Mg2+(25 mmol/L)2.2 μl，上下游引物(10 pmol/μl)各1.0 μl，dNTPs(10 mmol/L)0.8 μl，Taq 酶(2 U/L)0.2 μl，ddH2O 11.8 μl。擴(kuò)增反應(yīng)條件為:94 ℃預(yù)變性5 min;94℃變性60 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，30 個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min，10 ℃保存。

取PCR 產(chǎn)物5.0 μl、限制性內(nèi)切酶MspI 5 U和10 ×Buffer 1.0 μl，雙蒸水補(bǔ)足至10.0 μl，65 ℃水浴過(guò)夜，次日用10%的聚丙烯酰胺(Acr∶ Bis =29∶ 1)電泳檢測(cè)酶切產(chǎn)物。凝膠成像系統(tǒng)觀察酶切結(jié)果。根據(jù)特征條帶判定基因型。根據(jù)酶切結(jié)果，選取不同基因型個(gè)體的PCR 產(chǎn)物，經(jīng)純化回收后，送至上海生物工程有限公司正反向直接測(cè)序。隨后對(duì)測(cè)定的序列進(jìn)行比對(duì)分析，以驗(yàn)證基因型判定的準(zhǔn)確性。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

1.4.1 IGFBP-3 基因第2 外顯子多態(tài)性分析 采用SPSS 11.0 軟件計(jì)算基因頻率、基因型頻率、卡方(χ2)適合性、純合度(Ho)、雜合度(He)、有效等位基因數(shù)(Ne)和多態(tài)信息含量(PIC)等遺傳參數(shù)。

1.4.2 IGFBP-3 基因第2 外顯子多態(tài)性與京海黃雞體重和產(chǎn)蛋性能的關(guān)聯(lián)分析 運(yùn)用SPSS 11.0 軟件，根據(jù)廣義線性模型分析IGFBP-3 基因型效應(yīng)。建立模型如下:Yi=μ +Markeri+ei，其中Yi為性狀表型值，μ 為群體均值，Markeri為標(biāo)記基因型效應(yīng)，ei為隨機(jī)誤差。

2 結(jié)果與分析

2.1 IGFBP-3 基因第2 外顯子MspI 酶切多態(tài)性

IGFBP-3 基因第2 外顯子擴(kuò)增序列的測(cè)序結(jié)果顯示所擴(kuò)增的片段為目的片段。測(cè)序結(jié)果和PCRRFLP 檢測(cè)結(jié)果分別見(jiàn)圖1 和圖2。IGFBP-3 基因C1087T 位點(diǎn)的突變產(chǎn)生了MspI 酶切位點(diǎn)(C ↓CGG)多態(tài)性，經(jīng)酶切消化后產(chǎn)生大小分別為161 bp、161 bp/95 bp/66 bp、95 bp/66 bp 的3 種帶型，分別命名為TT、CT、CC 基因型。

圖1 CC 和TT 基因型中IGFBP-3 基因序列比較Fig.1 Comparison of sequence of IGFBP-3 gene between CC genotype and TT genotype of chicken

圖2 IGFBP-3 基因第2 外顯子擴(kuò)增產(chǎn)物MspⅠ酶切鑒定Fig.2 Identification of PCR products of IGFBP-3 gene exon 2 by MspⅠ

2.2 IGFBP-3 基因第2 外顯子C1087T 位點(diǎn)多態(tài)性遺傳分析

由表1 可知，京海黃雞、AA 雞、鹿苑雞、邊雞4個(gè)群體的IGFBP-3 基因C1087T 位點(diǎn)的基因型頻率分布趨勢(shì)一致:都是CC 基因型＞CT 基因型＞TT 基因型，4 個(gè)群體中優(yōu)勢(shì)等位基因是C 基因，優(yōu)勢(shì)基因型是CC 型?？ǚ竭m合性(χ2)檢驗(yàn)結(jié)果表明:京海黃雞MspI 位點(diǎn)基因型分布偏離Hardy-Weinberg 平衡狀態(tài)(P ＜0.05)，其余3 個(gè)群體基因型分布處于Hardy-Weinberg 平衡狀態(tài)(P ＞0.05)。

表1 4 雞種IGFBP-3 基因第2 外顯子C1087T 位點(diǎn)的基因頻率和基因型頻率Table 1 Frequencies of genotypes and alleles for locus C1087T of IGFBP-3 gene exon 2 in four chicken breeds

由表2 可知，4 個(gè)試驗(yàn)群體中，AA 雞IGFBP-3基因第2 外顯子C1087T 位點(diǎn)純合度最大，為0.68;京海黃雞純合度最小，為0.53。4 個(gè)群體基因雜合度和多態(tài)信息含量變化趨勢(shì)相一致:京海黃雞＞鹿苑雞＞邊雞＞AA 雞。京海黃雞有效等位基因數(shù)最多，為1.90;AA 雞有效等位基因數(shù)最少，為1.47。

表2 IGFBP-3 基因第2 外顯子C1087T 位點(diǎn)遺傳多態(tài)性Table 2 Genetic polymorphism of locus C1087T for IGFBP-3 gene exon 2

2.3 IGFBP-3 基因第2 外顯子C1087T 位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)京海黃雞生長(zhǎng)性能的效應(yīng)

IGFBP-3 基因第2 外顯子C1087T 位點(diǎn)多態(tài)性與京海黃雞生產(chǎn)性能相關(guān)分析結(jié)果見(jiàn)表3。C1087T位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)京海黃雞初生重、4 周齡體重、8 周齡體重、12 周齡體重、16 周齡體重和開(kāi)產(chǎn)體重均無(wú)顯著影響(P ＞0.05)。CT 基因型和TT 基因型300 日齡體重顯著高于CC 基因型(P ＜0.05)。京海黃雞C1087T 位點(diǎn)對(duì)不同周齡體重均顯示正的顯性效應(yīng)，300 日齡時(shí)體重的加性效應(yīng)和顯性效應(yīng)值最大，分別為42.25 和55.60。

表3 IGFBP-3 基因第2 外顯子C1087T 位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)京海黃雞生長(zhǎng)的影響Table 3 Effect of polymorphism of locus C1087T for IGFBP-3 gene exon 2 on growth of Jinghai yellow chicken

2.4 IGFBP-3 基因第2 外顯子C1087T 位點(diǎn)多態(tài)性與京海黃雞產(chǎn)蛋性能的相關(guān)分析

京海黃雞IGFBP-3 基因第2 外顯子C1087T 位點(diǎn)基因型與產(chǎn)蛋性能的最小二乘均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)誤及該位點(diǎn)加性效應(yīng)和顯性效應(yīng)見(jiàn)表4。由表4 可知，C1087T 位點(diǎn)各基因型之間開(kāi)產(chǎn)蛋重差異不顯著(P ＞0.05)。CC 基因型個(gè)體的開(kāi)產(chǎn)日齡最大，為146.42 d;CT 基因型開(kāi)產(chǎn)最早，為133.80 d。CC 基因型開(kāi)產(chǎn)日齡顯著大于CT 基因型(P ＜0.05)。TT基因型300 日齡產(chǎn)蛋數(shù)和66 周齡產(chǎn)蛋數(shù)分別為111.94 個(gè)和186.80 個(gè)，TT 基因型300 日齡和66 周齡產(chǎn)蛋數(shù)顯著高于CC 基因型(P ＜0.05)。京海黃雞C1087T 位點(diǎn)對(duì)增加開(kāi)產(chǎn)蛋重和開(kāi)產(chǎn)日齡的加性效應(yīng)為負(fù)值，分別為－0.03 和－4.20，對(duì)增加300日齡產(chǎn)蛋數(shù)和66 周齡產(chǎn)蛋數(shù)加性效應(yīng)分別為2.06和3.31。

表4 IGFBP-3 基因第2 外顯子C1087T 位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)京海黃雞產(chǎn)蛋性能的影響Table 4 Effect of polymorphism of locus C1087T for IGFBP-3 gene exon 2 on egg laying of Jinghai yellow chicken

3 討論

3.1 IGFBP-3 基因第2 外顯子C1087T 座位遺傳變異分析

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)4 個(gè)雞品種IGFBP-3 基因第2 外顯子多態(tài)性的研究，首次發(fā)現(xiàn)IGFBP-3 基因第2 外顯子存在MspⅠ酶切多態(tài)位點(diǎn)。該座位C 基因頻率最高變化范圍為0.62 ～0.80，但在4 個(gè)雞種中的分布趨勢(shì)是一致的，其中AA 雞群體中C 和T 的基因頻率差異最大，分別為0.80 和0.20。

生物的遺傳變異，主要?dú)w根于基因和基因型的差異。同一群體內(nèi)個(gè)體之間的遺傳變異一般起因于等位基因的差異，而同一物種內(nèi)不同群體之間的遺傳變異，則主要是由基因頻率的差異引起。平衡定律揭示了基因頻率與基因型頻率的遺傳規(guī)律，基因頻率的平衡對(duì)于群體穩(wěn)定起著直接的保護(hù)作用［21］。在本研究中，鹿苑雞、邊雞和AA 雞IGFBP-3 基因第2 外顯子C1087T 位點(diǎn)基因型分布處于Hardy-Weinberg 平衡狀態(tài)，這說(shuō)明這幾個(gè)雞品種在該座位處于隨機(jī)交配的穩(wěn)定狀態(tài)。值得注意的是，處于Hardy-Weinberg 平衡狀態(tài)下的群體，AA 雞CC 基因型頻率為0.67，鹿苑雞的CC 基因型頻率只有0.48，說(shuō)明隨機(jī)交配下的群體經(jīng)常維持不同基因頻率下的平衡。京海黃雞IGFBP-3 基因第2 外顯子MspI 酶切位點(diǎn)基因型分布不符合Hardy-Weinberg 平衡，可能是受到人工選擇的影響，因?yàn)榫┖｜S雞是經(jīng)過(guò)多個(gè)世代連續(xù)人工選育而成的優(yōu)質(zhì)雞品種，在選育過(guò)程中打破了該基因座的平衡，進(jìn)行有效的選種和選配，從而導(dǎo)致MspI 位點(diǎn)基因型的分布不符合Hardy-Weinberg 平衡。

當(dāng)多態(tài)信息含量處于中度多態(tài)(0.5 ＞PIC ＞0.25)水平時(shí)，4 個(gè)雞種C1087T 位點(diǎn)均屬于中度多態(tài)位點(diǎn)。但4 個(gè)雞種中京海黃雞的PIC 最高(0.36)，等位基因數(shù)目最多(1.90)，雜合度也最大(0.47)，表明京海黃雞在該位點(diǎn)有較大的選擇潛力。

3.2 IGFBP-3 第2 外顯子MspI 位點(diǎn)與京海黃雞生長(zhǎng)和繁殖性能的相關(guān)性

本試驗(yàn)通過(guò)IGFBP-3 基因多態(tài)性與京海黃雞300 日齡體重和母雞產(chǎn)蛋性能的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，C1087T 突變與京海黃雞產(chǎn)蛋性能顯著相關(guān)，這與IGFBP-3 的生理功能密不可分。一方面，大量的研究證實(shí)，IGFBP-3 通過(guò)GH-IGF-IGFBP 軸有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和增值的重要作用［22-24］。IGFBP-3 通過(guò)依賴性和非依賴性2 種作用方式結(jié)合IGF，影響胰島素樣生長(zhǎng)因子受體下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的信號(hào)強(qiáng)度，從而調(diào)控靶細(xì)胞的生長(zhǎng)和增值，影響畜禽生長(zhǎng)和繁殖性能的發(fā)揮［2］。另一方面，IGFBP-3 基因的多態(tài)性對(duì)畜禽的經(jīng)濟(jì)性狀也有著一定的影響。例如張潤(rùn)鋒等發(fā)現(xiàn)IGFBP-3 基因HaeⅢ位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)奶牛產(chǎn)奶量、乳蛋白率和體細(xì)胞評(píng)分有顯著影響［25］。Gao等發(fā)現(xiàn)中國(guó)肉牛IGFBP-3 第2 外顯子有1 個(gè)T/C突變與牛胸圍和臀圍有顯著關(guān)系:BB 型個(gè)體的臀寬和胸圍顯著高于AB 型個(gè)體［15］。Lan 等首次在山羊IGFBP-3 基因中發(fā)現(xiàn)HaeⅢ和XspⅠ位點(diǎn)多態(tài)性，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)山羊IGFBP-3 基因CC 基因型平均每胎產(chǎn)羔數(shù)顯著高于CG(CT)型個(gè)體［16，26］。這都說(shuō)明基因多態(tài)性與家畜的生產(chǎn)性能相關(guān)聯(lián)。家禽中的相關(guān)研究結(jié)果也顯示，IGFBP-3 基因內(nèi)含子1 的第160 bp 處T→G 的突變與京海黃雞8 周齡體重和產(chǎn)蛋數(shù)相關(guān)［20］。這些都表明IGFBP-3 基因是與畜禽生產(chǎn)性能相關(guān)的重要候選基因，對(duì)其進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇能有效地提高畜禽的生產(chǎn)性能。

從研究的結(jié)果還可以看出TT 基因型是增加產(chǎn)蛋數(shù)的優(yōu)勢(shì)基因型，而產(chǎn)蛋數(shù)與種雞的經(jīng)濟(jì)效益存在直接的關(guān)系，因此，可以將TT 基因型作為產(chǎn)蛋性狀的優(yōu)勢(shì)基因型用于京海黃雞的標(biāo)記輔助選擇育種。

［1］ XI G，KAMANGA-SOLLO E，HATHAWAY M R，et al. Effect of constitutive expression of porcine IGFBP-3 on proliferation and differentiation of L6 myogenic cells［J］. Domest Anim Endocrin，2006，31:35-51.

［2］ 漆正堂. 胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3 ［J］. 生命的化學(xué)，2003，2(2):102-104.

［3］ GE Z P，ELIZABETH M，WHITNEY N，et al. Insulin-like growth factor (IGF)-I and IGF binding proteins-2，-3，-4，-5 in porcine corpora lutea during the estrous cycle;evidence for inhibitory actions of IGFBP-3 ［J］. Domest Anim Endocrin，2003，25:183-197.

［4］ BAXTER R C. Insulin-like growth factor binding proteins in the human circulation［J］. Horm Res，1994，42:140-144.

［5］ 王 萍，馮佑民. 類胰島素生長(zhǎng)因子-Ⅰ和胰島素表現(xiàn)其功能的結(jié)構(gòu)和分子基礎(chǔ)［J］. 生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，1999，26(6):525-528.

［6］ 張建峰，侯加法，張 皎，等. 雞類胰島素生長(zhǎng)因子Ⅰ的克隆、表達(dá)及其表達(dá)產(chǎn)物的生物學(xué)活性研究［J］. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，38(10):2129-2133.

［7］ BALE I K，CONOVER C A. Regulation of insulin like growth factor binding protein 3 messenger ribonucleic acid expression by insulin like growth factor-1 ［J］. Endocrinology，1992，131:608-614.

［8］ HASTIE P M，ONAGBESAN O M，HAREIGN W. Co-expression of messenger ribonucleic acids encoding IGF-I，IGF-II;type I and II IGF receptors and IGF-binding proteins (IGFBP-1 to -6)during follicular development in the ovary of seasonally anoestrous ewes［J］. Anim Reprod Sci，2004，84:93-105.

［9］ 程婷婷. 山羊MSTN、IGFBP-3 基因多態(tài)性及其與生長(zhǎng)性能的關(guān)聯(lián)性分析［D］.雅安:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

［10］ 劉 哲，吳建平，馬彥男，等. 奶牛IGFBP-3 基因部分序列PCR-SSCP 多態(tài)性與產(chǎn)奶量和生長(zhǎng)性能的相關(guān)性［J］. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2009，17(3):445-450.

［11］ 孫維斌，陳 宏，雷雪琴，等. IGFBP-3 基因多態(tài)性與秦川牛部分屠宰性狀的相關(guān)性［J］.遺傳，2003，25(5):511-516.

［12］ 黨瑞華，陳 宏，魏伍川，等. IGFBP-3 基因多態(tài)性與魯西牛和晉南牛部分屠宰性狀的相關(guān)性［J］. 畜牧獸醫(yī)科學(xué)，2005，21(3):18-22.

［13］ 閔令江，沈 偉，李美玉，等. 山羊IGFBP-3 基因多態(tài)性與體重、屠體性狀的關(guān)系［J］. 廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué)，2006，25(3):56-58.

［14］ 胡沈榮，陳 宏，于 姣，等. 西農(nóng)薩能奶山羊IGFBP-3 基因多態(tài)與產(chǎn)羔數(shù)、體尺性狀的關(guān)聯(lián)分析［J］. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2007，35(11):1-5.

［15］ GAO X，SHI M Y，XU X R. Sequence variations in the bovine IGF-I and IGFBP-3 genes and their association with growth and development traits in Chinese beef cattle［J］. Agri Sci in China，2009，8(6):717-722.

［16］ LAN X Y，Pan C Y，CHEN H. The Hae Ⅲand Xsp ⅠPCRRFLPs detecting polymorphisms at the goat IGFBP-3 Locus［J］.Small Ruminant Res，2007，73:283-286.

［17］ PADMA B，KUMAR P，CHOUDHARY V，et al. Nucleotide sequencing and PCR-RFLP of insulin-like growth factor binding protein-3 gene in riverine buffalo (Bubalus bubalis)［J］. Asian-Aust J Anim Sci，2004，17:910-913.

［18］ MACIULLA J H，ZHANG H M，DENISE S K. A novel polymorphism in the bovine insulin-like growth factor binding protein-3(IGFBP-3)gene［J］. Anim Genet，1997，28:375.

［19］ PUSHPENDRA K，CHOUDHARY V，GANESH KUMAR K，et al.Nucleotide sequencing and DNA polymorphism studies on IGFBP-3 gene in sheep and its comparison with cattle and buffalo［J］.Small Ruminant Res，2006，64:285-292.

［20］ 金崇富，王金玉，王慧華，等. 京海黃雞IGFBP-3 基因外顯子1 和內(nèi)含子1 部分序列多態(tài)性及其與生長(zhǎng)繁殖性狀的相關(guān)性［J］. 中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2010，37(9):133-134.

［21］ 王金玉，陳國(guó)宏. 數(shù)量遺傳與動(dòng)物育種［M］. 南京:東南大學(xué)出版社，2004.

［22］ TETYANA L V，ROBERT J F J. Novel roles of the IGF-IGFBPS axis in etiopathophysiology of diabetic nephropathy［J］. Diabetes Res Clin Pr，2007，76:177-186.

［23］ VASYLYEVA T L，CHEN X，F(xiàn)ERRY J R J. Insulin-like growth factor binding protein-3 mediates cytokine-induced mesengial cell apoptosis［J］. Growth Hormone IGF Research，2005，15(3):207-214.

［24］ BINGRONG L，STUART A W，TARA B G，et al. Type I collagen is an IGFBP-3 bind protein［J］. Growth Hormone IGF Research，2003，13:89-97.

［25］ 張潤(rùn)鋒，陳 宏，雷初朝，等. IGFBP-3 基因PCR-RFLP 多態(tài)性與中國(guó)荷斯坦奶牛泌乳性狀的相關(guān)分析［J］. 中國(guó)畜牧雜志，2006，42(3):9-11.

［26］ LAN X Y，PAN C Y，CHEN H，et al. The novel SNPs of the IGFBP-3 gene and their associations with litter size and weight traits in goat［J］. Arch Tierzucht，2007，50 (2):223-224.