■游飛明 林 欽 歐陽(yáng)立群 黃紅霞

(福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，國(guó)家加工食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，福建福州 350002)

隨著飼料工業(yè)的發(fā)展，各種飼料資源的開發(fā)和動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究的進(jìn)步，飼料的生產(chǎn)越來越注重其營(yíng)養(yǎng)性及適口性。為了改善飼料的氣味和口味，通過動(dòng)物的嗅覺和味覺引誘和增進(jìn)動(dòng)物采食，因此在飼料中添加各種調(diào)味劑已越來越普遍。飼用調(diào)味劑的種類很多，常用的調(diào)味劑主要有香料及其他引誘劑、甜味劑和谷氨酸鈉，香料是目前應(yīng)用最為廣泛的飼用調(diào)味劑之一。但調(diào)味劑的添加是在保持飼料質(zhì)量前提下對(duì)飼料的襯托，而不能過分依賴它，目前一些養(yǎng)殖戶在調(diào)味劑應(yīng)用上有一個(gè)誤區(qū)，認(rèn)為香味越濃越好，實(shí)際上這可能對(duì)飼料的誘食性產(chǎn)生負(fù)面影響，因?yàn)榇髣┝渴褂眠@些香料也可能會(huì)有害動(dòng)物的健康。早在2000年歐盟專家委員會(huì)稱，經(jīng)多年的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，大劑量使用香蘭素可以導(dǎo)致動(dòng)物頭暈、惡心、嘔吐、呼吸困難，甚至能夠損傷肝、腎，對(duì)動(dòng)物有較大危害。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)乳酸乙酯、乙基麥芽酚及乙基香蘭素等的研究多集中在酒中芳香性成分分析、香料植物芳香性成分分析以及食品中香料成分的分析等。對(duì)于同時(shí)測(cè)定飼料中乙基香蘭素、乙基麥芽酚的方法有少量文獻(xiàn)報(bào)道，但飼料中6種香料成分的同時(shí)測(cè)定方法，目前還鮮有文獻(xiàn)報(bào)道，因此建立一種靈敏有效、簡(jiǎn)便快速且同時(shí)測(cè)定多種香味劑的檢測(cè)方法在實(shí)際工作中具有很強(qiáng)的實(shí)用性。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

氣相色譜儀（Agilent公司），分析天平（德國(guó)Sartorius公司），旋渦混均器（江蘇康健醫(yī)療用品有限公司）。所用試劑除特別標(biāo)注外均為分析純?cè)噭?種香料成分標(biāo)準(zhǔn)品（乳酸乙酯、乳酸丁酯、麥芽酚、乙基麥芽酚、甲基環(huán)戊烯醇酮、乙基香蘭素）純度均≥98.0%；甲醇、乙醇、丙酮及氯仿、甲酸；提取劑酸化丙酮：500 ml丙酮加入0.2 ml甲酸，混勻。

1.2 氣相色譜條件

檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器，溫度280℃；色譜柱：VB-WAX（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；柱溫：程序升溫，初始溫度65℃，恒溫4 min，以30℃/min速率升溫到 240℃，恒溫3 min；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；進(jìn)樣量：1 μl；柱流量：2.0 ml/min；分流比：30∶1。

1.3 樣品前處理

稱取試樣0.5 g(準(zhǔn)確至0.000 1 g)，置于25 ml容量瓶中，加入20 ml提取劑酸化丙酮溶液，在旋渦混勻器上渦旋2 min，用酸化丙酮溶液定容至25 ml，充分搖勻，靜置6 h，取上清液供氣相色譜進(jìn)樣分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的確定

2.1.1 色譜柱及柱溫的選擇

這幾種物質(zhì)的極性比較強(qiáng)，因此本實(shí)驗(yàn)選擇極性比較強(qiáng)的VB-WAX色譜柱作為分離色譜柱。由于6種目標(biāo)分離物沸點(diǎn)差異較大，在恒溫條件下目標(biāo)物分離時(shí)間長(zhǎng)，且高沸點(diǎn)組分峰型拓寬，所以采用程序升溫的條件。實(shí)驗(yàn)通過對(duì)初始溫度、升溫速率等參數(shù)反復(fù)優(yōu)化比較，最后確定柱溫升溫程序?yàn)椋?5℃保持4 min，后以30℃/min上升到 240℃，保持3 min，共用13 min。

2.1.2 進(jìn)樣口溫度、分流比優(yōu)化

試驗(yàn)比較了230、250℃時(shí)的氣化室溫度對(duì)6種香味劑色譜峰行為進(jìn)行了考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同進(jìn)樣口溫度下，6種香味劑的峰形及響應(yīng)值差異不顯著。實(shí)驗(yàn)在確保目標(biāo)組分充分汽化的前提下，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，最終選擇進(jìn)樣口溫度為250℃。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合方法檢測(cè)限和儀器靈敏度選擇分流比30∶1。

2.1.3 檢測(cè)器溫度的選擇

檢測(cè)器溫度一般比目標(biāo)物沸點(diǎn)高30～50℃，多組分分析一般檢測(cè)器溫度不得低于程序升溫最高溫度，在不影響分析結(jié)果的情況下，檢測(cè)器溫度適當(dāng)高點(diǎn)可減少檢測(cè)器被污染，綜合考慮這些因素，選擇檢測(cè)器溫度為280℃。

2.2 樣品前處理過程的優(yōu)化

2.2.1 提取溶劑選擇

本文選擇了4種有機(jī)溶劑（甲醇、無水乙醇、丙酮及三氯甲烷）作為提取劑，比較了這4種不同提取溶劑對(duì)飼料調(diào)味劑樣品中6種香料成分的提取效果。具體實(shí)驗(yàn)步驟為：稱取0.5 g左右陽(yáng)性試樣（平行樣各3份），分別以25 ml不同提取溶劑渦旋2 min提取，放置6 h后進(jìn)樣分析。結(jié)果見表1，結(jié)果表明，在這4種提取劑中，丙酮提取效果最佳。

2.2.2 甲酸濃度的選擇

研究表明，乙基香蘭素在酸性條件下，以分子形式存在，可用有機(jī)溶劑有效提取。此外，麥芽酚、乙基麥芽酚、甲基環(huán)戊烯醇酮等在酸性條件下比較穩(wěn)定，因此，在實(shí)驗(yàn)過程中，加入甲酸對(duì)提取效果進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)比較了丙酮加入甲酸濃度分別為0、0.02%、0.04%、0.08%及1.0%作為提取劑，提取樣品中6種香料成分，放置6 h后進(jìn)樣檢測(cè)，對(duì)提取效果進(jìn)行比較。表2實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，加入甲酸會(huì)明顯提高實(shí)際樣品中麥芽酚等香料成分的提取量，而加入甲酸的量大于0.04%后對(duì)提取的效果無明顯影響，所以選擇甲酸的濃度為0.04%，因此，選擇的提取劑為酸化丙酮（含0.04%甲酸）。

表1 不同提取劑提取效果比較(%)

表2 甲酸濃度對(duì)提取效果影響(%)

2.2.3 提取時(shí)間的選擇

合理的提取時(shí)間對(duì)樣品的提取效果有很大的影響。在樣品中加入提取劑20 ml酸化丙酮溶液后渦旋2 min，之后放置2、4、6、8、24 h，在放置過程中不時(shí)振搖，待靜置到上層溶液澄清后進(jìn)樣分析，結(jié)果如圖1所示。結(jié)果表明，放置6 h后，6種香料成分的提取結(jié)果趨于穩(wěn)定，因此放置時(shí)間設(shè)定為6 h。

圖1 提取時(shí)間的選擇

2.3 線性范圍及檢出限

配制6種調(diào)味劑系列標(biāo)準(zhǔn)溶液0.01～5.0 mg/ml，按照本實(shí)驗(yàn)的操作條件下進(jìn)行分析，以峰面積Y對(duì)標(biāo)樣濃度X進(jìn)行線性回歸，平行測(cè)定2次，結(jié)果如表3所示。結(jié)果表明，6種香料成分在此范圍內(nèi)線性良好。根據(jù)3倍的信噪比計(jì)算方法的檢測(cè)限得到本方法檢測(cè)限，乳酸乙酯為37.5 mg/kg，乳酸丁酯、麥芽酚、乙基香蘭素均為20.0 mg/kg，乙基麥芽酚為17.5 mg/kg，甲基環(huán)戊烯醇酮為15.0 mg/kg。6種香料成分標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖如圖2所示，試樣的色譜圖如圖3所示。

表3 線性范圍及方法檢測(cè)限

圖2 6種目標(biāo)分析物標(biāo)準(zhǔn)氣相色譜圖

圖3 試樣的氣相色譜圖

2.4 回收率和精密度

為了考察方法的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，在空白樣品基質(zhì)中分別加入2種不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)水平平行測(cè)定6次，結(jié)果如表4所示，結(jié)果表明該方法具有良好的精密度和準(zhǔn)確度：添加量約為0.5%時(shí)，平均回收率在102.0%～103.0%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在0.7%～1.2%之間；添加量約為5.0%時(shí)，平均回收率在99.6%～100.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在1.1%～1.4%之間。

表4 空白樣品回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）（%）

3 結(jié)論

本文在優(yōu)化前處理?xiàng)l件和儀器分析條件的基礎(chǔ)上，建立了氣相色譜法同時(shí)測(cè)定飼料調(diào)味劑中6種香料成分含量的方法，該方法前處理簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定可靠，實(shí)用性強(qiáng)，為飼料調(diào)味劑中香料成分的檢測(cè)提供科學(xué)規(guī)范的技術(shù)手段，對(duì)加強(qiáng)飼料質(zhì)量監(jiān)管和促進(jìn)相關(guān)行業(yè)的發(fā)展具有積極的意義，本檢測(cè)方法具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值且易于推廣。

（參考文獻(xiàn)若干篇，刊略，需者可函索）