段偉 張忠波 劉瑩瑩 張立鯤

短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)是缺血性腦血管病的一種常見類型，其神經(jīng)功能損害是短暫的，但TIA后卒中的發(fā)生率將明顯增加［1］。血小板與血管內(nèi)皮的相互作用一致被認(rèn)為是缺血性腦血管病重要因素，其中活化血小板起著關(guān)鍵作用［2］。為了探討TIA患者血小板活性的變化情況及臨床意義，我們采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)30例TIA患者的CD62P和CD63的陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行了檢測(cè)分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 我院神經(jīng)內(nèi)科住院的TIA患者30例，男18例，女12例。年齡42～78歲(平均59.2歲)，診斷符合短暫性腦缺血發(fā)作的中國(guó)專家共識(shí)更新版(2011年)的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］，考慮到血糖、血壓對(duì)CD63表達(dá)率的影響，故全部病例排除合并有高血壓病、糖尿病。正常對(duì)照組選擇性別和年齡與病例組相似的無高血壓病、糖尿病及腦卒中病史的健康人30例。男15例，女14例，年齡39～79歲(平均58.4歲)。

1.2 試劑和儀器 美國(guó)BD亞洲公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀BD FACS Aria和上海碧迪醫(yī)療器械有限公司提供的美國(guó)進(jìn)口分裝試劑。

1.3 方法 所有受試者采血前2周未服用或停用抗血小板制劑及抗凝血酶制劑。常規(guī)采靜脈血5 ml，置于含有1/10體積0.109 mol/L枸櫞酸鈉抗凝劑管中，3000 r/min離心10 min，收集上層血漿進(jìn)行檢測(cè)。具體實(shí)驗(yàn)操作和結(jié)果判定均嚴(yán)格按照試劑和儀器的說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，所得數(shù)據(jù)用±s表示，組間比較采用非配對(duì)t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

TIA組發(fā)作期、緩解期和對(duì)照組的CD62P、CD63的表達(dá)情況見表1。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，TIA患者在發(fā)作期和緩解期的CD62P、CD63陽(yáng)性表達(dá)率均高于正常對(duì)照組，差異均具有顯著性(P＜0.01)。

表1 TIA組與對(duì)照組CD62P、CD63表達(dá)的比較(±s)

CD62P CD63 TIA組發(fā)作期組別 例數(shù)30 8.22±1.04 8.04±1.08 TIA組緩解期 30 7.96±0.91 8.01±1.22正常對(duì)照組30 2.01±0.43 0.88±0.26

3 討論

TIA是臨床常見病，可導(dǎo)致缺血區(qū)可行性區(qū)域神經(jīng)功能障礙，是腦梗死的前兆。目前認(rèn)為，TIA發(fā)作的病因主要包括腦動(dòng)脈粥樣硬化的基礎(chǔ)上發(fā)生微栓塞或血流動(dòng)力學(xué)改變，是血管內(nèi)皮細(xì)胞受損、血小板和白細(xì)胞被激活、凝血因子被活化、抗凝和纖溶系統(tǒng)功能減低以及血液黏度增高等一系列病理狀態(tài)。在血管狹窄、收縮，內(nèi)皮下較遠(yuǎn)暴露等條件存在時(shí)，血小板發(fā)生粘附并被激活，活化的血小板通過多種途徑，加速體內(nèi)血栓的形成及凝固過程，同時(shí)通過血小板收縮擠出血清，使血凝塊變得更堅(jiān)實(shí)。有研究表明，α顆粒膜糖蛋白(CD62P)、溶酶體顆粒膜糖蛋白(CD63)被認(rèn)為是識(shí)別血小板活化分子標(biāo)志物［4］。CD62P又稱P-選擇素(P-selectin)，是血小板膜α顆粒發(fā)生釋放反應(yīng)的標(biāo)記物，是血小板晚期活化程度的一個(gè)特征性指標(biāo)。CD63為溶酶體整合膜糖蛋白，在正常血小板僅有極少的分子表達(dá)，在活化血小板膜和表面連接的小管系統(tǒng)膜上大量表達(dá)，也是血小板活化的一種標(biāo)志［5］。血小板被激活后，α-顆粒膜上的CD62P很快與血小板質(zhì)膜融合移至膜表面，而血小板內(nèi)的溶酶體膜蛋白的CD63也隨血小板活化脫顆粒而表達(dá)于血小板膜表面。采用單克隆抗體能夠準(zhǔn)確的標(biāo)記檢測(cè)這兩個(gè)糖蛋白，因此，測(cè)定CD62P、CD63是直接客觀的檢測(cè)活化血小板的特異方法。流式細(xì)胞儀(FCM)能對(duì)流動(dòng)液體中排成單列的細(xì)胞或顆粒進(jìn)行逐個(gè)分析，測(cè)定細(xì)胞或顆粒的光散射和熒光情況，以獲得其大小，內(nèi)部結(jié)構(gòu)DNA，RNA，PRO，Ag等物理及化學(xué)特征，具有測(cè)量指標(biāo)多、檢測(cè)速度快、對(duì)所需的細(xì)胞或顆?？梢赃M(jìn)行分選等特點(diǎn)。由于FCM檢測(cè)能夠達(dá)到基因和分子水平，彌補(bǔ)了以往血小板膜上糖蛋白測(cè)定方法的缺陷和不足，通過特異光譜的測(cè)定分析，F(xiàn)CM可以提供血小板生理的細(xì)微變化，從而比較準(zhǔn)確地反映出血小板表面膜活化依賴性改變、膜受體的缺陷及CD62P、CD63的表達(dá)率等。我們采用FCM對(duì)對(duì)30例TIA患者的發(fā)作期和緩解期的CD62P和CD63陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行了檢測(cè)分析。結(jié)果表明，TIA組發(fā)作期和緩解期的CD62P的陽(yáng)性表達(dá)率分別為(8.22±1.04)和(7.96±0.91)，CD63的陽(yáng)性表達(dá)率分別為(8.04±1.08)和(8.01±1.22);對(duì)照組的CD62P和CD63的陽(yáng)性表達(dá)率分別為(2.01±0.43)和(0.88±0.26)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，TIA患者在發(fā)作期和緩解期的CD62P、CD63陽(yáng)性表達(dá)率均高于正常對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

總之，TIA患者的血小板表面CD62P和CD63表達(dá)均增強(qiáng)，表明TIA患者的血小板活化程度異常增高，為臨床進(jìn)行抗血小板治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。今后，我們還將研究TIA患者經(jīng)抗血小板治療后的CD62P、CD63陽(yáng)性表達(dá)率的變化情況。

［1］ 李俊玉，畢齊.關(guān)于短暫性腦缺血發(fā)作的最新認(rèn)識(shí).中國(guó)卒中雜志，2012，7(1):36-39．

［2］ 段金海，哈斯朝魯，張生林.腦梗死患者血漿ICAM21、CD62P、CD63的動(dòng)態(tài)變化及其臨床意義.臨床神經(jīng)病學(xué)雜志，2005，18(4):260-262．

［3］ 短暫性腦缺血發(fā)作的中國(guó)專家共識(shí)組.短暫性腦缺血發(fā)作的中國(guó)專家共識(shí)更新版(2011年).中華內(nèi)科雜志，2011，50(6):530-533．

［4］ 陳飛，徐運(yùn).腦小血管病的發(fā)病機(jī)制和臨床特點(diǎn).國(guó)際腦血管病雜志，2011，19(8):620-624．

［5］ 劉運(yùn)涌，楚蘭.頻發(fā)頸動(dòng)脈系統(tǒng)短暫性腦缺血發(fā)作患者顱內(nèi)外血管檢查及血小板活化分析.中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)，2012，6(6):1643-1644．