劉軼華 朱紅麗 任亮

·實(shí)驗(yàn)研究·

虎杖中白藜蘆醇提取分離研究

劉軼華 朱紅麗 任亮

目的考察虎杖中白藜蘆醇苷的最佳提取分離工藝。方法研究酶法提取虎杖中的白藜蘆醇的工藝條件，從酶的種類、溫度、pH值、酶解時間等方面分析。結(jié)果最佳提取工藝為：采用植物水解酶，提取溫度40℃，酶解pH值3.0，酶解時間7 h，為最佳提取條件。結(jié)論酶處理后，可顯著提高虎杖中白藜蘆醇的得率，且該提取工藝穩(wěn)定性好且簡便易行。

虎杖；白藜蘆醇；提取分離；研究

虎杖為蓼科植物虎杖的根莖，主要含有[1]蒽醌類、二苯乙烯類、水溶性多糖和鞣質(zhì)等成份。白藜蘆醇和白黎蘆醇苷是虎杖的主要功效成分。白藜蘆醇作為一類親脂性多酚物質(zhì)，具有抗血小板凝聚，保護(hù)肝臟，抗腫瘤活性等藥理作用，特別是對心腦血管系統(tǒng)具有較強(qiáng)的藥理活性。本實(shí)驗(yàn)采用酶法實(shí)驗(yàn)，對虎杖中的白藜蘆醇進(jìn)行提取分離，本研究旨在為虎杖開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Ag ilent 1100 高效液相色譜儀；AG285分析天平；KS-600 d超聲清洗器；Delta 320 pH 計(jì)；H HW420 型三用恒溫水箱。

1.2試藥 虎杖粉末，批號：20060829；纖維素酶，批號：F20071116；植物水解酶、植物提取酶；白藜蘆醇對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：1535-200001，純度：99.5%；甲醇、乙醇、磷酸、磷酸二氫鉀(分析純)；乙腈(色譜純)；蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1白藜蘆醇的測定方法 色譜條件色譜柱ODSC18；流動相乙腈 ∶ 水(0.02%磷酸)30 ∶ 70；流速1 ml/min；柱溫30℃；檢測波長303 nm；20 μl進(jìn)樣環(huán)。理論塔板數(shù)不低于3000；分離度大于1.5。精密稱取干燥白藜蘆醇對照品330 μg，置10 ml容量瓶中加甲醇制成濃度33 μg/ml的溶液作為對照品溶液[2]。

2.2單因素考察 ①試樣的制取:精密稱取虎杖粉末若干份，每份約0.1 g，再每份加入pH = 5.0 緩沖鹽溶液5 ml。搖勻，在45℃酶解18 h 后，加入20 ml 95%乙醇超聲提取30 min，取出放冷，定容至25 ml，搖勻，過濾，取續(xù)濾液。②酶種類的篩選:取試樣3份，1 份不加酶，其他2份分別加入10 mg 纖維素酶和植物水解酶，并按色譜條件進(jìn)行測定，對于沒有加入任何酶的試樣，虎杖中白藜蘆醇含量為1.8/ mg/g-1，加入纖維素酶試樣中白藜蘆醇含量為4.6/ mg/g-1，加入植物水解酶的試樣中白藜蘆醇含量為9.1/ mg/g-1。由測定結(jié)果可知，

3 討論

近年來，隨著科技及研究的不斷進(jìn)展，人們對虎杖白藜蘆醇提取分離已取得了一定的進(jìn)展，一些新的技術(shù)和手段不斷應(yīng)用于這一領(lǐng)域，為白藜蘆醇提取提供了更科學(xué)的方法[4]。本試驗(yàn)采用的白藜蘆醇測定方法，條件比較穩(wěn)定，分離效果好，可用于虎杖及其制劑的含量測定。

[1] 江曙，朱蓉蓉，張芳,等.虎杖中白藜蘆醇提取方法及工藝的優(yōu)化.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2006,22(3):197-199.

[2] 黃志芳，易進(jìn)海，劉倩伶，等. 酶解法提取純化虎杖提取物中白藜蘆醇的工藝研究.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2009，21(6)： 1061-1064.

[3] 趙鴻賓, 陳華國, 龔小見, 等. 酶解法提取虎杖中的白藜蘆醇.貴州師范大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2010, 28 (2)： 104-106.

[4] 康連香, 王瑛, 賈彥超. 虎杖的藥理研究和臨床應(yīng)用.中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育, 2010, 8 (10)： 86.

462300 漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第二附屬醫(yī)院(劉軼華 朱紅麗)；漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校(任亮)

植物水解酶處理效果最好，白藜蘆醇含量最高，與不加入任何酶的試樣相比較，白藜蘆醇含量提高了4倍。③溫度的選擇:酶的活性與溫度有關(guān)，各種酶的溫度需求不同。一般來說[3]，溫度越高，酶的反應(yīng)速度越快，但當(dāng)溫度過高時，部分酶可能會失去活性，一般酶的酶解溫度是在30℃～60℃左右，故在實(shí)驗(yàn)中分別選取30℃、40℃、50℃和60℃四個溫度段。取試樣4份試樣，分別置于不同的溫度段中，30℃時，白藜蘆醇回收率為0.82%；40℃時，白藜蘆醇回收率為1.57%；50℃時，白藜蘆醇回收率為1.49%；當(dāng)是60℃時，白藜蘆醇回收率為1.31%，由此可見，酶解的最適宜溫度為40℃左右。④酶解時間的選擇:根據(jù)酶的活性及溫度需求，還要找出酶解的時間。取4份試樣，分別進(jìn)行3 h，5 h，7 h，9 h時間的酶解，經(jīng)過不同的時間段后，3 h后的白藜蘆醇回收率為0.52%，5 h后的白藜蘆醇回收率為1.32%；7 h后的白藜蘆醇回收率為1.79%；9 h后的白藜蘆醇回收率為1.38%，由以上數(shù)據(jù)可知，酶解最適宜的時間為7 h。⑤酶解pH值及酶量的選擇:采用以上的方法步驟，實(shí)驗(yàn)后通過數(shù)據(jù)分析可知，虎杖專用酶最適酶解pH=3.0，酶含量為原藥材的30.0%。