楊 光

（內(nèi)蒙古赤峰市醫(yī)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

HPLC法測定蒙藥嘎古拉-11中鹽酸麻黃堿含量

楊 光

（內(nèi)蒙古赤峰市醫(yī)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

目的：測定蒙藥嘎古拉-11中鹽酸麻黃堿含量。方法 ：HPLC法，流動相：乙腈-0.1%磷酸（5：95），波長：207nm，室溫測定。結(jié)果：鹽酸麻黃堿在0.0214μg～0.214μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為Y=2258708.3X-673.2，r=1.000，線性關(guān)系良好。 3批次平均含量分別為：0.373、0.407、0.382(mg·g-1)。結(jié)論：本法方法測定，簡便、易行，結(jié)果可靠。

嘎古拉-11；鹽酸麻黃堿；HPLC法；含量測定

嘎古拉 -11由草果仁、紫草茸、木鱉仁（制）等 11味藥組成，具有清熱、消食功能。其中麻黃為方中君藥，功能溫中散寒，下氣止痛。主要有效成分為1-麻黃堿，d-偽麻黃堿等。參照《中國藥典》2005年版一部“麻黃”含量測定項(xiàng)下麻黃的測定方法，采用HPLC法對本品中的麻黃建立含量測定方法，通過實(shí)驗(yàn)摸索，確定了色譜條件，并經(jīng)過方法學(xué)考察表明該方法操作簡單，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：LC10-ATVP型高效液相議，CLASS-VP色譜工作站。島津UV-2450型紫外-可見分光光度儀。

1.2 試劑與試藥：對照品 鹽酸麻黃堿（C10H15NO·HCL）（批號：171241-200303）中國藥品生物制品檢定所提供；供試品 由內(nèi)蒙古赤峰市翁牛特旗中蒙醫(yī)院提供。乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑為分析純。

2 方法學(xué)考察

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 色譜柱：色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本實(shí)驗(yàn)采用迪瑪公司Diamonsil（鉆石）色譜柱 C18（250×4.6mm，5μm）。

2.1.2 流動相的選擇：參照《中國藥典》2010年版一部“麻黃”含量測定項(xiàng)下麻黃的測定方法，用乙腈-0.1%磷酸為流動相，通過不同比例的比較，當(dāng)流動相比例為（5：95）時，樣品中的鹽酸麻黃堿與其它成分達(dá)到較好的分離，并具有適宜的保留時間而且理論板數(shù)高，故確定流動相為乙腈 -0.1%磷酸（5：95）。

2.1.3 柱溫：由于在室溫條件下鹽酸麻黃堿峰的保留時間穩(wěn)定，且分離效果較好，故選定柱溫為室溫。

2.1.4 檢測波長的選擇：精密稱取鹽酸麻黃堿對照品適量，用甲醇制成 20μg·mL-1的溶液，在 200nm～600nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果鹽酸麻黃堿在207nm處有最大吸收，結(jié)合《中國藥典》2010年版一部“麻黃”含量測定項(xiàng)下鹽酸麻黃堿的測定方法，選用207nm作為檢測波長。

2.1.5 理論板數(shù)的確定：從對多批檢測數(shù)據(jù)可見，鹽酸麻黃堿的理論板數(shù)在3000以上，即能達(dá)到較好的分離效果，故確定理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2 提取溶劑及提取時間的選擇

2.2.1 提取溶劑的選擇：參照《中國藥典》2010年版一部“麻黃”含量測定項(xiàng)下鹽酸麻黃堿的測定方法，選用甲醇作為提取溶劑。

2.2.2 提取效率的考察：以甲醇作為提取溶劑進(jìn)行超聲提?。üβ?200W，頻率 50kHz），為保證被測成分提取完全，實(shí)驗(yàn)中考察了模擬樣超聲提取 25、35、45、55(min)不同超聲提取時間對提取效率的影響，實(shí)驗(yàn)表明超聲處理45 min、55 min鹽酸麻黃堿含量基本一致，故超聲提取時間定為45 min。

2.2.3 中性氧化鋁用量及洗脫液收集量的考察：精密量取上述提取后樣品續(xù)濾液1mL，置中性氧化鋁柱（100～200目，內(nèi)徑 1cm）中，用 50%甲醇洗脫，收集洗脫液置10mL量瓶中，為保證被測成分洗脫完全，實(shí)驗(yàn)中考察了氧化鋁用量及洗脫液收集量對提取效率的影響，結(jié)果表明：中性氧化鋁用量1.5g以下含量基本穩(wěn)定不變，故將中性氧化鋁用量定為1.5g。洗脫液收集量在9mL以上含量基本穩(wěn)定不變，故將洗脫液收集量定為9mL。

2.3 溶液的制備：對照品溶液的制備：精密稱取鹽酸麻黃堿對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，精密量取上述溶液2.0mL,置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。

供試品溶液的制備：取本品適量，研細(xì)，取細(xì)粉2.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50mL，稱定重量，超聲處理（功率 200W，頻率 50kHz）45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取 1mL，置中性氧化鋁柱（100～200目，1.5g，內(nèi)徑 1cm）上，用 50%甲醇洗脫，收集洗脫液約 9mL，置10mL量瓶中，加磷酸1滴，用 50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

陰性對照溶液的制備：按處方比例并以相同工藝制備的缺麻黃的陰性對照，按供試品溶液制備法制得陰性對照溶液。

按上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液、供試品溶液各 10μL測定，結(jié)果陰性對照色譜圖在與鹽酸麻黃堿對照品以及供試品色譜圖相應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明成方制劑中其它組分對測定無干擾。

2.4 線性關(guān)系考察：取鹽酸麻黃堿對照品（批號：171241-200303）約 10mg，置 100mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取 0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、5.0mL，分別置 25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取10μ l注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以峰面積對進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果鹽酸麻黃堿在0.0214μg～0.214μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為 Y=2258708.3X-673.2，r=1.000，線性關(guān)系良好。

2.5 樣品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別于 0h、2h、4h、16h、24h進(jìn)行了測定，記錄峰面積，求得鹽酸麻黃堿的RSD為 0.29%，24h內(nèi)峰高無明顯變化，表明供試品溶液制備24h內(nèi)是基本穩(wěn)定的。

2.6 精密度：重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號供試品 6份，各約2.5g，精密稱定，分別按含量測定項(xiàng)下方法操作，測定每份供試品含量，測得鹽酸麻黃堿含量RSD為0.18%。

2.7 準(zhǔn)確度：加樣回收試驗(yàn)：精密稱取鹽酸麻黃堿對照品 10.5mg（批號：171241-200303），置 100mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。取同一批號的供試品9份，精密稱定，分別置9個錐形瓶中，其中 3個錐形瓶中精密加入上述對照品溶液7mL；另3個錐形瓶中精密加入上述對照品溶液10mL；其余3個錐形瓶中精密加入上述對照品溶液12mL。按上述方法，精密加甲醇使總體積為25mL，同法操作，測定每份供試品的含量，計算平均回收率為99.6%，RSD為1.84%。

2.8 樣品含量測定：取對照品及供試品溶液各10μL測定，結(jié)果見表1。

表1 樣品中鹽酸麻黃堿含量測定結(jié)果

3 討論

通過以上實(shí)驗(yàn)可見，采用此方法測定，簡便、易行，結(jié)果可靠。提取工藝簡單，使被測成分在提取過程中出現(xiàn)的偶然誤差減少，所得結(jié)果也相對準(zhǔn)確。更好地控制了藥品質(zhì)量，保證人民用藥安全。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

[2]徐國鈞,等.中藥材粉末顯微鑒別[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1986.

[3]孫文基,謝世昌,等.天然藥物成分定量分析[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2002.8.

[4]南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典（第二版）[S].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2006.

[5]內(nèi)蒙古自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.內(nèi)蒙古蒙藥制劑規(guī)范（第一冊）[S].內(nèi)蒙古:內(nèi)蒙古人民出版社,2007.

R 291.2

A

1006-6810（2013）04-0052-03

2013年2月2日收稿