師永晶
(錫盟藥品檢驗所,內(nèi)蒙古 錫林浩特 026000)
菊科(Compositae)風毛菊屬(Saussurea)系多年生草本植物,該屬植物化學成分主要有倍半萜、三萜、甾體、黃酮、香豆素、有機酸、多糖類等。藥理作用主要表現(xiàn)為抗腫瘤、抗炎、抗衰老、改善心血管系統(tǒng)機能等[1]。驢耳風毛菊Saussurea amara(L)DC為常用的民族醫(yī)藥材。蒙醫(yī)學認為,驢耳風毛菊性苦、寒、殺粘,清熱解毒,止痛消腫,用于發(fā)疹,心熱,血熱,感冒發(fā)燒等癥[2]。本文對多糖含量進行了測定。
葡萄糖、蒽酮、硫酸均為AR(市售)。210型可見紫外分光光度計(日本島津)。
2.1 對照品溶液的配制、顯色劑的配制及蒽酮-硫酸法最大吸收波長的選擇:取葡萄糖約6mg,精密稱定,置100mL量瓶中,用水溶解稀釋至刻度,即為葡萄糖對照品溶液(60μg·mL-1)。蒽酮溶于硫酸中,配制成.5%濃度。棕色瓶保存。精密吸取0.6mL對照品溶液,加蒸餾水至2.0mL,加入0.5%的蒽酮硫酸溶液4mL,混勻,同法制的陰性溶液,振搖10min,置沸水浴中15min,然后置冷水中冷卻30min,同法制得陰性對照溶液,在可見紫外分光光度計200~800nm范圍內(nèi)測定吸收度,結(jié)果最大吸收波長λmax=615nm.
2.2 線性化范圍試驗:精密吸取.0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2mL葡萄糖對照品溶液,加蒸餾水至.0mL,加入0.5%的蒽酮溶液4mL,混勻,振搖min,置沸水浴中min,然后置冷水中冷卻30min,在可見紫外分光光度計615nm,處測定吸收度。經(jīng)回歸處理回歸方程如下A=-0.1120+0.0005x,r=0.999。在,12.0~72.0μg·mL-1范圍內(nèi)葡萄糖量與吸收度成一條不通過原點的直線,供試品溶液測定可采用外標兩點法定量。
2.3 精密度試驗:精密吸取0.6mL葡萄糖對照品溶液,加蒸餾水至2.0mL,照上述蒽酮 -硫酸法顯色,按上法測定吸收度次,吸收度分別為.265,0.264,0.265,0.267,0.264,RSD=0.46%。
2.4 穩(wěn)定性試驗:精密吸取0.6mL葡萄糖對照品溶液,加蒸餾水至2.0mL,照上述蒽酮-硫酸法顯色,按上法測定吸收度,每隔20min測定1次。結(jié)果,RSD=0.98%,在2h內(nèi)穩(wěn)定。
2.5 加樣回收率的測定:取驢耳風毛菊粉末(80目,105℃干燥h,)約.8g,6份,精密測定,其中份不加葡萄糖對照品,作為隨行對照,其余5份分別加入精密稱定的葡萄糖對照品,余下操作按“2.6.1供試品溶液制備”方法處理,得到5份加樣回收率供試品溶液。精密吸取0.25mL各加樣回收率供試品溶液,按上述蒽酮-硫酸法顯色,按上法測定吸收度,結(jié)果見表1。
表1 加樣回收率試驗
2.6 含量測定
2.6.1 供試品溶液的制備及含量測定:取不同產(chǎn)地驢耳風毛菊粉末(80目,105℃干燥h,)約g,精密稱定,加水100 mL,回流提取次,每次30min。合并提取液,濃縮至mL,加%乙醇至含量%,攪拌min,放置24h,過濾,殘渣用%的乙醇洗滌,然后用丙酮洗滌,自然干燥后用水溶解轉(zhuǎn)移至100mL量瓶內(nèi),用水稀釋至刻度,即得供試品溶液。精密吸取0.25mL供試品溶液,加水至2 mL,照上述蒽酮-硫酸法顯色,按上法測定吸收度,根據(jù)外標法計算不同產(chǎn)地驢耳風毛菊中多糖含量,錫盟、阿盟、呼盟、烏盟、呼市多糖含量分別為6.32%、6.11%、5.31%、7.25%、6.52%,平 均 含 量 為6.30%。
硫酸-蒽酮法是測定多糖含量的較為常用的方法,其原理為多糖類在濃硫酸作用下先水解為單糖分子,并迅速脫水生成糠醛衍生物,糠醛衍生物再與蒽酮結(jié)合成有色化合物以比色法在適當波長測定多糖含量。本文采用加水回流提取多糖,提取液加乙醇至85%沉淀,沉淀物用85%乙醇、丙酮洗滌,自然干燥,樣品為白色粉末,用蒽酮-硫酸顯色法測定多糖含量。測定結(jié)果,驢耳風毛菊多糖平均含量為6.30%。該方法簡單、可靠、重現(xiàn)性好,可用于藥材的質(zhì)量控制方法之一。
[1]王紅兵,秦國偉.風毛菊屬植物的化學成分和生物活性[J].國外醫(yī)學-植物藥分冊,20(2);47.
[2]藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準-蒙藥分冊 [S].1998,21.