王偉麗 朱明偉 高 芳

（河南省商丘市食品藥品藥檢所，商丘 476000）

高效液相色譜法測(cè)定丹柴散結(jié)口服液中丹酚酸B的含量

王偉麗 朱明偉 高 芳

（河南省商丘市食品藥品藥檢所，商丘 476000）

目的 建立丹柴散結(jié)口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用HPLC法對(duì)丹柴散結(jié)口服液中丹酚酸B的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果 丹柴散結(jié)口服液中丹酚酸B的含量在0.0081～0.1628μg的范圍內(nèi)，有良好的線性關(guān)系，r＝0.9999，平均回收率為98.76%，RSD為1.04%。結(jié)論 建立了丹柴散結(jié)口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，該方法操作易行，穩(wěn)定可靠，用于丹柴散結(jié)口服液中丹酚酸B的含量，可以用于該制劑的質(zhì)量控制。

丹柴散結(jié)口服液丹酚酸B HPLC

丹柴散結(jié)合劑是經(jīng)批準(zhǔn)生產(chǎn)的醫(yī)院中藥制劑［1］（豫藥制字Z04140031），處方由當(dāng)歸，赤芍，丹參，川芎，甘草等十味藥組成，具有疏肝解郁，活血化瘀軟堅(jiān)散結(jié)的功效。主治乳腺增生癥，適用于瘀乳房脹痛和乳房結(jié)塊等。經(jīng)過(guò)多年的臨床應(yīng)用證明其功效顯著。丹參是其主藥之一，其有效成分是丹酚酸B，所以為了進(jìn)一步提高標(biāo)準(zhǔn)，保證制劑的穩(wěn)定可靠，我們采用高效液相法對(duì)制劑中的丹酚酸B進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

Agilent1200高效液相色譜儀；色譜柱Agilent-C18（5μm，4.6mm×150mm），AEU-210電子天平，丹酚酸B對(duì)照品 （批號(hào)：111562-200605，中國(guó)藥品生物制品檢定所），丹柴散結(jié)口服液為商丘市柘城縣人民醫(yī)院提供 （批號(hào)為110201，110306，110402），缺位陰性對(duì)照樣品由商丘市中醫(yī)院提供。乙腈為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Agilent-C18色譜柱 （150mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液 （13∶87），檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm，柱溫：25℃，流速為1.0ml·min－1，進(jìn)樣量10μl。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取對(duì)照品丹酚酸B8.14mg，置100ml棕色量瓶中，加75%甲醇溶解至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加75%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備［2］取供試品混勻，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加75%甲醇70ml，超聲處理（功率240W，頻率45kHz）30分鐘，放冷，加75%甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.4 陰性對(duì)照品溶液的制備 除丹參外，其他各藥按供試品處方量投料按丹柴散結(jié)口服液的制備工藝制成陰性對(duì)照品，然后按供試品的制備方法，制成陰性對(duì)照品溶液的制備。

2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

2.5.1 線性關(guān)系考察 分別吸取對(duì)照品溶液 （0.158 mg·ml－1）2.5、5、8、10、12、15μl各進(jìn)樣兩次，記錄峰面積分值，以丹酚酸B峰面積積分值對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸，得到回歸曲線y＝51.784x-29.176，r＝0.9999。結(jié)果表明其線性關(guān)系良好，線性范圍為：0.0081～0.1628μg。

2.5.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。結(jié)果，RSD＝0.73% ，表明儀器精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批 （批號(hào)：110306）樣品6份，照 “2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定。結(jié)果，平均含量為0.0617mg／ml，RSD＝0.77%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液 （批號(hào)：110306），分別于0、1、2、4、8、12h各精密吸取10μL，按上述色譜條件測(cè)定峰面積積分值。結(jié)果，RSD＝0.81%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

圖1 丹酚酸B對(duì)照品 （A）樣品 （B）陰性對(duì)照 （C）

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品9份，精密量取3ml，置100ml量瓶中，分別精密加入一定量的丹酚酸B對(duì)照品，照 “2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣10μL，測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果詳見(jiàn)表1。

表1 加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 樣品含量測(cè)定

按上述含量測(cè)定方法測(cè)定樣品中丹酚酸B含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 丹柴散結(jié)口服液中丹酚酸B的測(cè)定結(jié)果

4 結(jié)論

在供試品制備的的過(guò)程中，也曾考慮到其他樣品對(duì)丹參提取以及含量測(cè)定的影響［3－4］，考察了用不同濃度的甲醇進(jìn)行提取和處理方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以75%甲醇和超聲提取30分鐘的效果最，考慮到操作的方便性，可操作性，本實(shí)驗(yàn)采取了75%甲醇超聲提取。

丹柴散結(jié)口服液在長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐中證明，就有良好的療效，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有薄層色譜鑒別，未收載含量測(cè)定項(xiàng)目，不能有效的控制藥品質(zhì)量。長(zhǎng)期以來(lái)，以薄層鑒別作為該藥的標(biāo)準(zhǔn)，沒(méi)有具體定量的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，而丹參是丹柴散結(jié)口服液的主藥之一，測(cè)定丹柴散結(jié)口服液制劑中丹酚酸B含量對(duì)控制丹柴散結(jié)口服液的質(zhì)量有著十分積極的意義。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)用HPLC法對(duì)丹柴散結(jié)口服液中丹酚酸B的含量進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)，建立了丹柴散結(jié)口服液制劑的質(zhì)量控制方法，該方法穩(wěn)定可靠，操作簡(jiǎn)便，專屬性較強(qiáng)，可以作為該制劑的質(zhì)量控制的參考。

［1］河南省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn).豫藥制字：Z04140031.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：70.

［3］楊翠微，張俊偉.HPLC測(cè)定參蘇丸中丹酚酸B的含量［J］.湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2000，6（16）：36

［4］邵陸，李振志.HPLC法測(cè)定愈風(fēng)寧心膠囊中丹酚酸B的含量［J］.齊魯藥事.2001，（4）：23.

Determination of Paeoniflorin in Danchaisanjie Mixture by HPLC

Wang Weili Zhu Mingwei GaoFang
（Shangqiu Institute for Food and Drug Control，Shangqiu 476000，China）

Sbstact：Objective To establish a standard for determination of paeoniflorin in DanChaisanjie mixture.Method Paeoniflorin in DanChaisanjie mixture by HPLC.Result The linear range of paeoniflorin was 0.0081-0.1628μg，r＝0.9999.The average recovery of paeoniflorin was 98.76%and RSD was 1.04%.ConclusionThe method is simple，sensitive and accurte and can be used to determine paeoniflorin in DanChaisanjie mixture and quality control of DanChaisanjie mixture.

DanChaisanjie mixturePaeoniflorinB，HPLC

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.05.111

1672-2779（2013）-05-0160-02

（本文校對(duì)：韓世輝

2013-02-10）