馬 英 馬桂云 崔 曉

（河北省石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司質(zhì)檢科，石家莊 050035）

高效液相色譜法測定三九胃泰顆粒中芍藥苷的含量

馬 英 馬桂云 崔 曉

（河北省石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司質(zhì)檢科，石家莊 050035）

目的 建立三九胃泰顆粒中芍藥苷的含量測定方法。方法 以島津Shim－pack ODS C18（250mm×4.6mm，5μm）為色譜柱；以乙腈-0.1%磷酸 （21∶79）為流動相；檢測波長為230nm；流速為1.0ml·min－1。結(jié)果 芍藥苷在0.8244μg～%2.474μg范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好，r＝0.9999，平均回收率為99.45%，RSD＝0.39%。結(jié)論 該法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于制劑中該成分的含量測定。

三九胃泰顆粒；芍藥苷；高效液相色譜法

三九胃泰顆粒由三叉苦、黃芩、茯苓、白芍、地黃等8味藥材組成，具有清熱燥濕、行氣活血、柔肝止痛的功能。臨床主要用于濕熱內(nèi)蘊(yùn)、氣滯血瘀所致的胃痛，癥見脘腹隱痛、飽脹反酸、惡心嘔吐、嘈雜納減；淺表性胃炎、糜爛性胃炎、萎縮性胃炎見上述證候者。白芍作為三九胃泰顆粒的主要組成成分之一，其性微寒，味苦酸，歸肝經(jīng)［1］，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝膽之功能。芍藥苷 （C23H28O11）為白芍 （Radix Paeoniae Alba.）中的有效成分之一，以芍藥苷作為單一定量指標(biāo)來控制白芍總苷 （total glucoside of paeony，TGP）的質(zhì)量，采用HPLC法測定芍藥苷已有許多報(bào)道［2－5］。為更好地控制產(chǎn)品中白芍的含量，本實(shí)驗(yàn)亦采用高效液相色譜法（HPLC）測定三九胃泰顆粒中芍藥苷的含量。

1 材料與方法

1.1 儀器 高效液相色譜儀：Waters515-717-2487型，PDA檢測器；AG285電子天平 （上海梅特勒托利多儀器有限公司）；超聲波清洗器 （KQ-500E，昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑 甲醇、乙腈均為色譜純 （天津科密歐）；水為純凈水；其余試劑均為分析純。芍藥苷對照品 （中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110736-201035，純度為96.5%）。

1.3 材料 三九胃泰顆粒系華潤三九醫(yī)藥股份有限公司提供 （規(guī)格：每袋2.5g，批號：110601～110605）。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件 色譜柱為島津Shim－pack ODS C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸（21∶79） （v／v）；流速為1.0ml·min－1；柱溫：30℃；檢測波長230nm；理論塔板數(shù)不少于4000；進(jìn)樣量20μl。

1.4.2 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品適量（0.01056g），置100ml容量瓶中，用稀乙醇溶解制并稀釋至刻度，搖勻。得到101.9μg·ml－1的對照品溶液。

1.4.3 供試品溶液的制備 取三九胃泰顆粒，研勻，精密稱取2.0365g，置于100ml具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，超聲處理 （功率240W，頻率45KHz）30min，放冷，再次稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液，即得供試品溶液。

2 結(jié)果

2.1 空白試驗(yàn) 按處方項(xiàng)下比例制備缺白芍的顆粒劑，同 “1.4.3”項(xiàng)下同法制得陰性樣品溶液，備用。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各20μl注入液相色譜儀分析，記錄色譜圖，如圖A、B、C。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取芍藥苷對照品適量（0.01068g），置50ml容量瓶中，用稀乙醇溶解制并稀釋至刻度，搖勻。得到206.1μg· ml－1的對照品儲備溶液。分別精密吸取芍藥苷貯備液 （206.1μg·ml－1）5ml、15ml、10ml、5ml、15ml置于25ml、50ml、25ml、10ml、25ml量瓶中，加稀乙醇稀釋成41.22μg·ml－1，61.83 μg·ml－1，82.44μg·ml－1，103.0μg·ml－1，123.7μg·ml-15個系列對照品溶液，分別吸取上述溶液各20μl注入液相色譜儀分析，按 “1.4.1”色譜條件測定，記錄色譜圖，以其色譜峰面積 （A）值為橫坐標(biāo)，芍藥苷對照品的進(jìn)樣量 （C，單位μg）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為：C＝9.61×10-6A＋0.067 （r＝0.9999）。結(jié)果表明，芍藥苷在0.8244μg～2.474μg范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好。

2.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一份供試品溶液20μl注入液相色譜儀，按 “1.4.1”項(xiàng)下色譜條件測定，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定其色譜峰面積分別為286773、290633、286458、288476、290454、287181，平 均 值 為 288329，RSD為0.64%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一份供試品溶液，室溫放置，分別在0、2、6、12、24h，按 “1.4.1”項(xiàng)下色譜條件測定，測定其色譜峰面積分別為252045、251949、252015、251882、251666，平均值為251911，RSD為0.06%。結(jié)果表明供試品溶液室溫放置24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號樣品 （110601批）6份，按 “1.4.3”項(xiàng)下處理后，按 “1.4.1”項(xiàng)下色譜條件測定，獨(dú)立測定6次，測定每片樣品中含芍藥苷的量，RSD為0.64%。結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.6 回收率實(shí)驗(yàn) （采用加樣回收法） 精密稱取已知含量的樣品9份，每份約1.0g，然后精密加入芍藥苷對照品溶液206.1μg·ml-15ml，按 “1.4.3”項(xiàng)下制成供試品溶液。精密吸取續(xù)濾液20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。將測得峰面積代入線性方程計(jì)算供試液中芍藥苷的含量，并計(jì)算回收率。平均回收率為99.45%，RDS為0.39%，回收率較好。

2.7 樣品含量測定及結(jié)果分析 取本品5個批號（110601～110605）的樣品，按 “1.4.3”項(xiàng)制成供試品溶液，分別精密吸取樣品溶液和對照品溶液20μl注入液相色譜儀分析，測定其中芍藥苷的含量，在上述色譜條件下測得峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表1。

表1 5批三九胃泰顆粒中芍藥苷含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 流動相的選擇 HPLC測定芍藥苷采用乙腈和磷酸溶液的混合溶液作流動相的文獻(xiàn)報(bào)道較多［5，6］，本實(shí)驗(yàn)采用乙腈—0.1%磷酸溶液混合溶液 （21∶79）（v／v）作流動相，在此實(shí)驗(yàn)條件下，待測組分芍藥苷與樣品中其他組分完全分離，色譜圖峰形尖銳，基線平穩(wěn)。本實(shí)驗(yàn)前后試驗(yàn)并調(diào)整乙腈-0.1%磷酸溶液混合溶液 （v／v）的比例，①10∶90，②20∶80，③22∶78，④21∶79等，通過出峰時間、分離度、峰面積以及峰形等多方面綜合考察，最后確定以乙腈-0.1%磷酸溶液混合溶液 （21∶79）（v／v）為最佳流動相。

3.2 檢測波長的選擇 根據(jù)芍藥苷的理化性質(zhì)，選用C18柱 （250mm×4.6mm，5μm）芍藥苷與其他成分完全分離，理論塔板數(shù)不低于4000。通過紫外全波長掃描，芍藥苷在230nm處有最大吸收，參考藥典及文獻(xiàn)中的最大吸收波長，確定選擇230nm為檢測波長。

3.3 對照品溶劑的選擇 本實(shí)驗(yàn)曾采用甲醇和稀乙醇為溶媒配制對照品溶液，經(jīng)考察選擇稀乙醇為溶媒較為適宜。

3.4 供試品的處理方法的選擇 ①樣品的前處理是中藥復(fù)方制劑分析的關(guān)鍵，其目的在于提取待測成分，消除其他成分的干擾，芍藥苷可溶于醇及水［1］，而且2010版中國藥典中以芍藥苷作為HPLC法測定白芍藥材和含芍藥苷制劑有30余種［1］。且據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［3－5，7］，以 HPLC 法測定白芍藥材及含芍藥苷制劑中芍藥苷的方法穩(wěn)定。②超聲提取苷類成分省時，節(jié)約藥材，雜質(zhì)少，提取率高等優(yōu)點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)參考2010版藥典白芍藥材的含測方法［1］，以稀乙醇為溶劑進(jìn)行超聲提取，用補(bǔ)充損失溶媒的方法處理供試品，對于HPLC法而言最為快速、簡便，而且方法的回收率和重現(xiàn)性均良好。③在供試品溶液的制備過程中，曾采用10、20、30、40、50min進(jìn)行超聲提取，分別測定其峰面積，結(jié)果表明超聲提取30min后芍藥苷得率趨于穩(wěn)定，40min、50min反而有所下降，是否因超聲時間長產(chǎn)熱，對芍藥苷有所破壞？據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道［8］，芍藥苷在含水溶液中會因受熱而不穩(wěn)定，因其結(jié)構(gòu)含有苯甲酸酯鍵，在有水的條件下受熱易分解或受其他成分的干擾，故其含量下降。但是超聲過程中的產(chǎn)熱一般≤60℃，故認(rèn)為其影響很小，綜合10、20、30、40、50min五個實(shí)驗(yàn)結(jié)果差別并不大，因此選擇的表現(xiàn)出的10～50min提取量的不規(guī)則波動也有可能是實(shí)驗(yàn)誤差所造成，所以最后確定超聲時間為30min。

本實(shí)驗(yàn)建立的方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，空白無干擾，可用于三九胃泰顆粒的質(zhì)量控制。

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The Determination of Content of Paeoniflorin in Sanjiuweitai Granules by HPLC

Ma Ying Ma Guiyun Cui Xiao
（Quality Testing Department of Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co.，Ltd，Shijiazhuang 050035，China）

Objective An assay method was established for the determination of paeoniflorin in Sanjiuweitai granules by HPLC.Methods The chromatographic colum was Daojin Shim-pack ODS C18（250mm×4.6mm，5μm）。A mixture of acetonitrile-water（1%phosphoric acid）（21∶79）was used as the mobile phase，the detection wavelength was at 230nm and the flow rate was 1.0ml·min－1.Results The calibration curve was showed good linearity within the mass range of 0.8244～2.474μg，r＝0.9999，the average recovery was 99.45%，RSD＝0.39%.Conclusion The method is accurate，simple and reproducible，and can be used to control the quality of this preparation.

Sanjiuweitai；Granules；Paeoniflorin；HPLC

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.05.110

1672-2779（2013）-05-0158-03

（本文校對：韓世輝

2013-02-06）