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        E B V-DNA定量檢測對鼻咽癌的診斷

        2013-01-29 14:16:42翁玉玲廣東省東莞市大朗醫(yī)院輸血科廣東東莞53770廣東省東莞市人民醫(yī)院檢驗科廣東東莞53000
        中國當(dāng)代醫(yī)藥 2013年14期
        關(guān)鍵詞:鼻咽癌定量血漿

        李 哲 翁玉玲.廣東省東莞市大朗醫(yī)院輸血科,廣東東莞 53770;.廣東省東莞市人民醫(yī)院檢驗科,廣東東莞 53000

        E B V-DNA定量檢測對鼻咽癌的診斷

        李 哲1翁玉玲2
        1.廣東省東莞市大朗醫(yī)院輸血科,廣東東莞 523770;2.廣東省東莞市人民醫(yī)院檢驗科,廣東東莞 523000

        目的通過對鼻咽癌患者經(jīng)治療后EBV-DNA含量變化的觀察,為臨床診治該病尋求最佳方法。 方法 血漿EBV-DNA檢測采用熒光定量PCR法,選擇確診的145例鼻咽癌患者為研究對象,對其EBV-DNA進(jìn)行定量檢測,并以同期健康者140名的血漿情況進(jìn)行對比研究。 結(jié)果 鼻咽癌組中有136例(93.79%)患者血漿EBVDNA呈陽性;健康組中有10例(7.14%)血漿EBV-DNA呈陽性,鼻咽癌組患者血漿EBV-DNA陽性檢出率明顯高出健康組(P<0.01);血漿EBV-DNA呈陽性的患者在治療過程中,血漿EBV-DNA含量呈逐漸下降趨勢。結(jié)論 給予鼻咽癌患者EBV-DNA定量檢測,對診斷和指導(dǎo)治療價值明顯。

        EBV-DN;定量檢測;鼻咽癌;診斷

        EB病毒(EBV)是一種普遍存在的皰疹病毒群,感染后能累及機體全身各個器官系統(tǒng)[1]。人體一旦被該病毒侵入,易引起癌變。鼻咽癌在我國的發(fā)病率較高,多發(fā)于我國南方[2]。該病屬于惡性腫瘤的一種,目前雖未清楚其致病源,但自患者血漿中發(fā)現(xiàn)了EBV-DNA后,普遍存在觀點認(rèn)為該病的發(fā)病與EBV感染有關(guān)聯(lián)。多位學(xué)者研究證實:對患者血漿中EBV-DNA含量的檢測,可觀察到機體內(nèi)腫瘤負(fù)荷狀況。本院將已被確診的145例鼻咽癌患者為研究對象,并以同期身體健康者140名進(jìn)行對比研究,旨在探討EBV-DNA定量檢測對鼻咽癌患者的臨床作用,現(xiàn)報道如下:

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        將2012年1月~2012年6月已被本院確診的145例鼻咽癌患者(鼻咽癌組)為研究對象,其中,男85例,女60例,年齡2~76歲,平均45歲;其中泡狀核癌、低分化鱗癌、中分化鱗癌例數(shù)分別為21、86、38例。同時選擇身體健康者140名為健康組,進(jìn)行對照研究。

        1.2 方法

        1.2.1 血漿EBV-DNA檢測采用熒光定量PCR法[3]。標(biāo)本采集手段:抽取研究對象外周血3mL,置入EDTA抗凝管內(nèi),給予每分鐘4000r離心后實施上層血漿分離,將被分離出的50μL血漿存放在零下20℃的溫度中;試劑盒選擇德國Qiagen公司提供,對分離出的血漿按說明要求進(jìn)行血漿DNA提取。熒光定量PCR擴增:擴增的目的基因為EBV的BamH1-W片段。上下游引物序列分別是W-44F和W-119R,給予每批PCR以雙蒸水為陰性參照;克隆合成的EBV的DNAW片段為陽性參照,將其稀釋為不同的濃度梯度后給予擴增,濃度梯度為:106、105、104、103、102、10copies/uL;PCR以50μL為反應(yīng)總體積,其中含緩沖液10μL PCR,引物與相對的熒光標(biāo)記探針各為10pmol。dATP、dCTP、dGTP、dUTP 均為 200μmol/L 5U Tap 聚合酶,5μL DNA模板,將提取的DNA置入PCR反應(yīng)管中實施擴增。計算血漿EBV-DNA拷貝數(shù),當(dāng)結(jié)果低于1×103拷貝/mL視為陰性。

        1.2.2 治療方法 給予患者放療結(jié)合化療法。放療:Siemens直線加速器6MV X線體外照射,照射范圍包括鼻咽部腫瘤及頸部淋巴引流區(qū),進(jìn)行常規(guī)分割放療,每天2Gy,1周5次,鼻咽部給予6mV X線照射,頸部 12MeV β線與9MeV β線照射?;煟涸谶M(jìn)行放療當(dāng)天、第4周最后1d、第7周最后1d,均給予順鉑聯(lián)合亞葉酸鈣200mg/m2聯(lián)合5-氟尿嘧啶500mg/m2化療,共計4個療程,3周為1個療程;化療同時應(yīng)充分水化并聯(lián)合止吐處理,并注意復(fù)查患者血常規(guī)、肝腎功能和心電圖。

        1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

        采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件,計數(shù)資料用百分率表示,組間比較行χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組人員血漿EBV-DNA陽性檢出率

        鼻咽癌組中有136例 (93.79%)患者血漿EBV-DNA呈陽性;健康組中有10例(7.14%)血漿EBV-DNA呈陽性,鼻咽癌組患者血漿EBV-DNA陽性檢出率明顯高出健康組(P<0.01),見表 1。

        表1 兩組血漿EBV-DNA陽性檢出率對比表(n)

        2.2 鼻咽癌組治療后不同時期血漿EBV-DNA水平

        對136例血漿EBV-DNA陽性患者治療后:有125例患者經(jīng)治療后EBV-DNA含量逐漸下降,在42d后未能檢測出含有EBV-DNA,其余11例仍含有EBV-DNA,情況見表2。

        表2 136例血漿EBV-DNA陽性患者不同時期血漿EBV-DNA水平(IU/mL)

        3 討論

        EBV特點為親淋巴細(xì)胞性和親上皮細(xì)胞性[4]。經(jīng)臨床資料顯示EB病毒感染淋巴細(xì)胞是致鼻咽癌的主要因素,對該病的診斷,目前以影像學(xué)檢查為主,但該檢查存在費用高、對治療效果的判定差、癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移敏感性不高等缺點,因此,在臨床的采用上受到一定限制。該技術(shù)手段因?qū)儆诰植匡@影技術(shù),導(dǎo)致其不能對可能會發(fā)生癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移部位進(jìn)行完全檢測,同時對較小的轉(zhuǎn)移處、殘存腫瘤性質(zhì)的判斷等方面均被制約。伴隨核酸分子雜交與PCR技術(shù)的進(jìn)步,鼻咽癌診斷方式也隨之更新,PCR技術(shù)因具有高特異、高靈敏和有效防污的優(yōu)點在臨床備受親睞,當(dāng)檢測到患者體內(nèi)EBV-DNA拷貝數(shù)高,說明其病癥較重。本文對兩組人員血漿EBV-DNA陽性檢出率對比中發(fā)現(xiàn):鼻咽癌組中有136例(93.79%)患者血漿EBV-DNA呈陽性;健康者組中有10例(7.14%)血漿EBV-DNA呈陽性,鼻咽癌組患者血漿EBV-DNA呈陽性檢出率明顯高出健康組 (P< 0.01);鼻咽癌組患者在治療過程中,血漿EBV-DNA含量呈逐漸下降趨勢,由此可見:鼻咽癌的發(fā)生和EBV之間存在密切聯(lián)系。

        鼻咽癌是鼻咽上皮細(xì)胞發(fā)生的惡性腫瘤,在我國南方頭頸部惡性腫瘤中發(fā)病率居前位[5]。該病的發(fā)病與EBV有關(guān),EBV病毒歸類為皰疹病毒科,EBV病毒一旦被感染,將在細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄 EBER,在其感染后生成的相關(guān)產(chǎn)物可引發(fā)細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的抑制及一系列基因變異而導(dǎo)致惡變。EB-DNA拷貝數(shù),VCA-IgA抗體滴數(shù)以及EA-IgA抗體滴數(shù)可間接反映EB病毒在人體內(nèi)的激活狀態(tài)[6]。在本次研究中可以顯示出:其檢測值能間接體現(xiàn)出咽后淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移狀況。鼻咽癌的惡性程度高,有些患者在鼻咽鏡檢查尚未發(fā)現(xiàn)原發(fā)灶時,就有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[7]。在患者外周血中有多種EB病毒相關(guān)的抗原、抗體,早期以采用血漿VCAIgA當(dāng)作對鼻咽癌治療效果評判的血液學(xué)指標(biāo),但其不能及時反應(yīng)腫瘤消長變化情況。檢測血清中抗EB病毒抗體水平是臨床上輔助診斷鼻咽癌的常規(guī)手段[8],該手段取材方便且易于操作,具備敏感性高等優(yōu)點,已廣泛應(yīng)用與鼻咽癌的篩查及鼻咽癌放療后復(fù)發(fā)的監(jiān)測。

        總之,給予鼻咽癌患者EBV-DNA定量檢測,對診斷和指導(dǎo)治療價值明顯,值得臨床應(yīng)用。

        [1]柳文菊,杜昆.監(jiān)測血漿EBV-DNA含量在鼻咽癌診療中的意義[J].海南醫(yī)學(xué),2012,23(18):7-9.

        [2]王雪英.定量檢測血漿EBV-DNA在鼻咽癌診治中的臨床研究[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2012,18(12):5-6.

        [3]李杰.血漿EBV-DNA檢測對鼻咽癌的診斷價值的探討[J].醫(yī)學(xué)檢驗與臨床,2011,22(1):20-22.

        [4]孔平.鼻咽癌患者血漿與PBMC EBV-DNA定量測定的臨床意義[J].山東醫(yī)學(xué)高等??茖W(xué)校學(xué)報,2010,32(5):321-324.

        [5]應(yīng)香嵐,楊幼萍,應(yīng)亞君,等.EBV病毒PCNAKi-67和C-myc癌基因蛋白在鼻咽癌中的表達(dá)及預(yù)后意義[J].浙江臨床醫(yī)學(xué),2011,13(11):1201-1203.

        [6]趙淑芬,朱超綱,陳新林,等.鼻咽癌咽后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與EBV-DNA血清學(xué)標(biāo)記物關(guān)系探討 [J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2012,20(10):2034-2036.

        [7]范國宇,劉偉.血漿EBV-DNA與VCA-IgA聯(lián)合檢測對鼻咽癌診斷的意義[J].中國實用醫(yī)藥,2012,7(19):46-47.

        [8]魏世鴻,羅宏濤,王小虎,等.血清EBV抗體檢測聯(lián)合99mTc-MIBI顯像和MRI在診斷鼻咽癌放射治療后復(fù)發(fā)中的價值[J].甘肅醫(yī)藥,2012,31(5):327-330.

        Quantitative detection of EBV-DNA for diagnosis of nasopharyngeal carcinoma

        LI Zhe1WONG Yuling21.Department of Blood Transfusion,Dalang Hospital of Dongguan City in Guangdong Province,Dongguan 523700, China;2.Department of Clinical Laboratory,People's Hospital of Dongguan City in Guangdong Province,Dongguan 523000,China

        ObjectiveTo seek the best approach of diagnosis and treatment for the disease through observing the changes of EBV-DNA content of nasopharyngeal carcinoma patients after treatment.MethodsThe plasma EBV-DNA was detected by fluorescence quantitative PCR method.One hundred and forty five patients confirmed as nasopharyngeal carcinoma were selected as study object.Their plasma EBV-DNA were detected and compared with those of 140healthy persons in corresponding time.ResultsIn the nasopharyngeal carcinoma group,136cases(93.79%)showed plasma EBV-DNA-positive,while 10cases(7.14%)in healthy group.The plasma EBV-DNA-positive detection rate of nasopharyngeal carcinoma group was significantly higher than that of healthy group(P<0.01).In plasma EBV-DNA-positive patients,the plasma EBV-DNA content decreased gradually in the course of treatment.ConclusionThe quantitative detection of EBV-DNA for nasopharyngeal carcinoma patients has significant value in diagnosing and guiding treatment of the disease.

        EBV-DN;Quantitative detection;Nasopharyngeal carcinoma;Diagnosis

        R739.6

        A

        1674-4721(2013)05(b)-0106-02

        2013-03-01 本文編輯:魏玉坡)

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