鈕英杰，袁瑾，蔡巧玲，孟祥樂，3，4（1.朱家角人民醫(yī)院藥劑科，上海01713；.上海中醫(yī)藥大學中藥學院，上海 0103；3.上海交通大學附屬第六人民醫(yī)院藥劑科，上海 0033；4.河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院藥學部，鄭州 450000）

戊己丸出自宋代《太平惠民合劑局方》，為棕黃色的水丸，味苦，稍有麻辣感，處方由黃連、（炒）白芍、（制）吳茱萸3味中藥組成，具有瀉肝和胃、降逆止嘔之功效，用于治療肝火犯胃、肝胃不和所致的胃脘灼熱疼痛、嘔吐吞酸、口苦嘈雜、腹痛泄瀉[1]等證狀，臨床常用于治療胃潰瘍[2]。戊己丸作為治療胃腸道疾病，特別是胃潰瘍的經典方劑，其組方用藥精準，所含有效成分較多。方中黃連的主要活性成分是小檗堿、巴馬汀、藥根堿、黃連堿等；白芍含有芍藥苷、牡丹酚、氧化芍藥苷、苯甲酸等成分；吳茱萸含有吳茱萸堿、次吳茱萸堿等成分。為了保證戊己丸的安全性與有效性，質量控制的方法與手段研究日趨重要。2005年版《中國藥典》中戊己丸項下含量測定是用酸性甲醇索氏提取，乙醇洗脫氧化鋁柱分離后，紫外分光光度法測定鹽酸小檗堿的含量。2010年版《中國藥典》中戊己丸項下采用高效液相色譜（HPLC）法測定鹽酸小檗堿和芍藥苷的含量。本文重點就近年來戊己丸活性成分藥理作用及質量控制相關內容進行綜述，并對其進展進行評價。

1 活性成分及藥理作用

1.1 黃連

黃連為毛莨科植物黃連（Coptis chinensis Franch）的根莖。有效成分有生物堿類化合物，如小檗堿、巴馬汀、藥根堿、黃連堿、甲基黃連堿、表小檗堿和木蘭花堿等；也有酸性成分，如阿魏酸、綠原酸等。其中，生物堿類成分在抗HIV-1活性化合物中占有重要地位[3]，具有保肝、解痙、抗腫瘤等功效[4-5]：小檗堿能抗氧化刺激，保護膽堿功能[6]，對四氯化碳誘導的大鼠急性肝毒性有保護作用[7]；巴馬汀能改善急性心肌損傷[8]，抑制鈣鉀電流從而保護肝臟細胞[9]；藥根堿能降低糖尿病大鼠血糖指數(shù)[10-11]，對過氧化氫導致細胞損傷具有神經保護作用[12]。另外，有大量研究表明，黃連具有廣譜的抗菌作用，對鏈球菌、肺炎球菌、霍亂弧菌、肺炎桿菌、白喉桿菌、百日咳桿菌等均有抑菌作用[13]；對耐藥菌也有較好的抑制作用，如對耐喹諾酮類藥物的金黃色葡萄球菌有抑制作用[14]，對耐第1、第2、第3代β-內酰胺類抗生素的AmpC酶有較好的抑制作用[15-17]。

1.2 白芍

白芍為毛莨科植物芍藥（Paeonia lactitlora Pall）的干燥根。主要成分為芍藥苷、牡丹酚、氧化芍藥苷、苯甲酸等。其中，芍藥苷具有神經保護作用[18]。有研究表明，向大鼠海馬組織內注射Abeta（1-42）寡聚物可增加鈣離子內流產生細胞毒性，造成大鼠海馬功能障礙，而持續(xù)給予芍藥苷可抑制海馬神經元凋亡，緩解大鼠認知障礙，其機制可能與芍藥苷顯著降低細胞內鈣離子有關[19]。體外研究發(fā)現(xiàn)，芍藥苷可延遲整流鉀離子電流及抑制電壓依賴性鈉離子電流，且顯著減少神經元的自發(fā)放電頻率，從而調節(jié)神經內分泌[20]。Huang KS等[21]通過體內、外實驗發(fā)現(xiàn)，芍藥水溶液與芍藥苷混合制成的芍藥提取物可以顯著提高PC12細胞的生長，提高大鼠坐骨神經的再生速度，說明芍藥提取物有潛在的神經生長促進作用。吳玲善等[22]采用血清藥理法，研究芍藥苷含藥血清對人肝癌細胞Bel-7402增殖的影響，利用MTT比色法發(fā)現(xiàn)20%的芍藥苷血清對人肝癌細胞Bel-7402的抑制率最高，與阿霉素血清的作用相當。

1.3 吳茱萸

吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸（Medicinal Evodia Fruit.）及其變種石虎[Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.officinalis（Dode）Huang]的干燥將近成熟果實。主要成分為生物堿類化合物，包括吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿、吳茱萸卡品堿、二氫吳茱萸卡品堿等；也有苦味素類化合物，包括檸檬苦素、吳茱萸苦素、吳茱萸苦素乙酸酯、吳茱萸內酯醇等；還有揮發(fā)油類化合物，包括月桂烯、吳茱萸烯等。有研究表明，吳茱萸次堿能促進內源性降鈣素相關基因多肽的釋放，激活辣椒素受體，從而對抗由乙酰水楊酸引起的急性大鼠胃黏膜損傷[23]。吳茱萸堿對大鼠心肌缺血再灌注損傷有一定的保護作用，能提高大鼠血漿中內源性降鈣素相關基因多肽的表達，降低腫瘤壞死因子的生成，從而顯著降低心肌梗死程度[24]。有研究表明，吳茱萸堿可促進細胞凋亡，抑制細胞增殖和抑制癌細胞的轉移。通過原位分析技術發(fā)現(xiàn)，吳茱萸堿可抑制微管蛋白多聚化和紡錘體的形成，其N-14位上的甲基和C-13位上的氫與吳茱萸堿的抗腫瘤活性有很大的相關性[25]。去氫吳茱萸堿能抑制小腦粒細胞中谷氨酸的攝取和釋放，興奮神經系統(tǒng)[26]。另有研究表明，通過3 d給雄性小鼠連續(xù)灌胃吳茱萸次堿，用Western blot技術可檢測到其肝臟代謝酶P450（CYP）1 A和CYP 2 B表達的上調，顯示吳茱萸次堿可誘導肝臟代謝酶P450的生成[27]。Iwata H等發(fā)現(xiàn)，吳茱萸次堿和檸檬苦素可抑制人肝臟代謝酶CYP3 A4的活性[28]。

2 質量控制和評價

2.1 質量控制模式

在中藥質量控制方面，主要有化學藥模式、指紋圖譜技術、生物效應模式、血清藥效物質基礎控制模式以及工程控制論模式。對于戊己丸，目前主要采用化學藥模式、指紋圖譜技術，利用現(xiàn)代分析技術手段對其主要化學成分進行含量測定。但研究主要集中在對黃連的活性成分小檗堿上，而對其他活性成分的研究較少。因此，對戊己丸中各活性成分應全面研究，才能更好的了解戊己丸的內在質量。

在指紋圖譜研究上，主要有紫外分光光度（UV）、薄層色譜（TLC）、高效毛細管電泳（HPCE）、HPLC等方法，它們?yōu)橄到y(tǒng)控制和評價戊己丸的質量提供方法和技術上的支持。

2.2 現(xiàn)代分析技術

2.2.1 UV法 王義海等[29]采用內比-UV法，將戊己丸成方的各指標成分分別與各單味藥減半時的各指標成分的吸光度相比，將比值作為質量控制指標。黃鶯等[30]采用多波長紫外-可見吸收光譜法對戊己丸進行質量控制，考察了線性組合方式及試樣提取方法對測定的影響。結果，線性組合法可有效消除重選光譜組分的正干擾，該法準確、簡單、快速，戊己丸中鹽酸小檗堿回收率高達99%。

2.2.2 TLC法 張夕村等[31]用雙波長薄層掃描法鑒定戊己丸中各單味藥的存在。以硅膠G為固定相，正丁醇-醋酸-水為流動相，薄層分離之后，用雙波長掃描法得到掃描圖譜，然后用標準藥材作陰、陽性對照，鑒別出戊己丸中各單味藥。焦慶才[32]用薄層光密度法，以硅膠GF254為吸附劑，正丁醇、水、冰乙酸的混合溶劑作為展開劑，系統(tǒng)地分離了戊己丸中各有效成分。

2.2.3 HPLC法 該法是戊己丸質量控制中最常見的方法。展雪峰等[33]采用HPLC法測定戊己丸中鹽酸小檗堿的含量，色譜柱為EMG C18（150mm×4.6mm，5μm），流動相為0.033 mmol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈（61∶39，V/V），流速為1.0ml/min，檢測波長為266 nm。所得結果準確，重現(xiàn)性好。俞學煒[34]用HPLC法測定戊己丸中鹽酸小檗堿的含量，色譜柱為Shim-pack CLC-DDS，流動相為乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.002 mol/L十二烷基磺酸鈉，pH 4.8，50∶50，V/V），檢測波長為345 nm，柱溫為室溫，流速為1.0 ml/min。該方法簡便、快速。凌麗美[35]用HPLC法測定戊己丸中鹽酸小檗堿含量，色譜柱為 Gemini C18（250mm×4.6mm，5μm），流動相為乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀（用100 g/L氫氧化鉀溶液調pH 5.0，35∶65，V/V），檢測波長為246nm，流速為1.0ml/min，柱溫為25℃，該測定方法簡便、快速而準確。金佩芬等[36]用HPLC法測定戊己丸中鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀的含量，色譜柱為Hypersil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為0.033 mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈（90∶40，V/V），流速為1.0 ml/min，檢測波長為265 nm，柱溫為室溫。此方法分離效果較好。譚生建等[37]用HPLC法測定戊己丸中吳茱萸堿和吳茱萸次堿含量，色譜柱為Intersil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-10%乙腈（50∶50，V/V），流速為1 ml/min，檢測波長為225 nm，該方法簡便、可行。李榮東等[38]利用HPLC法比較超微戊己丸和常規(guī)戊己丸中芍藥苷的含量，色譜柱為Hyersil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-水（14∶86，V/V），流速為1 ml/min，檢測波長為230 nm。結果，方法回收率均在95%以上，且超微戊己丸中芍藥苷的含量明顯高于常規(guī)戊己丸。HPLC法在戊己丸的含量測定中應用廣泛，且以黃連活性成分鹽酸小檗堿的含量來評價戊己丸較為常用。

2.2.4 HPCE法 羅敏等[39]用HPCE法測定戊己丸中鹽酸小檗堿和芍藥苷的含量，測定緩沖液為50 mmol/L硼砂溶液-甲醇溶液（1/1.5，V/V），未涂層石英毛細管（50 μm×64.5 cm，有效長度：57.1 cm）為分離通道，操作電壓為30 kV，檢測波長為230 nm，壓力進樣為1.5kpa×8s，柱溫為25℃。該方法快速、準確。近年隨著科學技術的進一步發(fā)展，HPCE分析大多采用內徑更細的毛細管，這樣使焦耳熱降低到最低程度，改善了以前譜帶展寬等問題，柱效得以提高。羅東玲等[40]利用HPCE-膠束電動色譜（MEKC）法測定戊己丸中吳茱萸堿和吳茱萸次堿含量，選用甲醇超聲提取45 min，以225 nm作為測定波長，采用MEKC模式進行分離，選用50mmol/L硼砂溶液（含SDS 50 mmol/L）-甲醇溶液（1.3∶1，V/V）為緩沖液。結果，方法穩(wěn)定，回收率好，且柱效遠高于HPLC法。

3 結語

戊己丸作為治療胃腸道疾病，特別是胃潰瘍的經典方劑，具有高度實用價值?，F(xiàn)代社會胃腸道疾病常見，可以考慮在戊己丸傳統(tǒng)丸劑的基礎上改變劑型，使其在胃潰瘍部位停留時間更長，更好的發(fā)揮療效。比如采用胃懸浮劑型，將戊己丸制成胃內滯留制劑，有效地調節(jié)藥物釋放與吸收[41]，使戊己丸的研究有更大的空間。這就迫切需要建立更加科學的戊己丸質量控制方法。目前，已有用HPLC法單獨檢測戊己丸中的鹽酸小檗堿、芍藥苷、鹽酸巴馬汀、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的報道，卻沒有同時測定芍藥苷、黃連生物堿類與吳茱萸生物堿類成分的含量以及戊己丸體內質量控制的報道。而現(xiàn)在的LC-MS/MS技術可以解決同時檢測多種成分、基質復雜的樣品的難題，它具有靈敏度高、快速高效的特點。本課題組已在進行相關方面的工作，希望能為戊己丸的開發(fā)提供質量控制方法的參考。

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