趙曉萍蒲傳強(qiáng)

（1 北京軍區(qū)總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，北京100700；2 解放軍總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，北京 100853）

肌肉病理未見(jiàn)異常的肌無(wú)力患者肌肉組織myostatin基因mRNA表達(dá)

趙曉萍1蒲傳強(qiáng)2

（1 北京軍區(qū)總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，北京100700；2 解放軍總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，北京 100853）

肌肉病理；肌無(wú)力；肌肉組織

病理檢查結(jié)果陽(yáng)性是疾病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，正常成人肱二或股四頭肌肌纖維直徑 60～80μm，肌質(zhì)均勻，肌核扁平，位于周邊，每根肌纖維橫斷面上肌核數(shù)不超過(guò)5個(gè)。I、IIA、IIB型肌纖維各占約1/3。常規(guī)病理檢查符合上述標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)論通常是肌肉病理檢查未見(jiàn)異常。Myostatin屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）超家族的成員之一，是骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育抑制因子（肌抑素）。由骨骼肌分泌，作用于衛(wèi)星細(xì)胞，其基因突變或抑制其表達(dá)后動(dòng)物（牛、兔、狗及人）骨骼肌異常發(fā)達(dá)。本研究的目的是探討酶組織化學(xué)染色病理結(jié)果未見(jiàn)異常的肌無(wú)力患者肌肉組織中Myostatin基因mRNA的表達(dá)情況。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

自覺(jué)肌肉無(wú)力，但體檢、肌酶譜及肌電圖檢查未見(jiàn)異?；颊?例。年齡14～45歲，平均年齡25.3歲，病程3～48個(gè)月，平均病程11.8個(gè)月。其中，男性4例，年齡14～45歲，平均年齡27歲，病程6～48個(gè)月，平均18個(gè)月；女性5例，年齡18～27歲，平均年齡23歲；病程3～11個(gè)月，平均6個(gè)月。具體每例臨床特點(diǎn)如下，見(jiàn)表1。

1.2 方法

標(biāo)本獲取：左側(cè)肱二頭肌開(kāi)放式活檢，常規(guī)冰凍切片組織學(xué)檢查未見(jiàn)明顯異常。

Myostatin mRNA表達(dá)情況分析：應(yīng)用RT-PCR方法，檢測(cè)肌肉組織中Myostatin mRNA表達(dá)，并以管家基因GAPDH mRNA表達(dá)水平為內(nèi)參照，經(jīng)凝膠電泳鑒定，圖像分析系統(tǒng)分析積分光密度值（A），計(jì)算表達(dá)指數(shù)（I）I myostatin = A myostatin/ A GAPDH。

2 結(jié) 果

灰度測(cè)定顯示各例肌肉組織中GAPDH 基因mRNA表達(dá)水平相近（灰度值739～788，年齡相關(guān)系數(shù)-0.1341）。9例患者中2例未見(jiàn)Myostatin mRNA表達(dá)（男女各1例），7例有表達(dá)。有表達(dá)者的表達(dá)指數(shù)I為0.16～1.15；平均表達(dá)指數(shù)為0.5655。男女分層后表達(dá)指數(shù)無(wú)明顯差別（0.425 vs0.678，P=0.4185）。表達(dá)指數(shù)與活檢時(shí)的年齡的相關(guān)系數(shù)為0.2961，與病程的相關(guān)系數(shù)為0.0399。男性年齡相關(guān)系數(shù)為0.6855，女性為0.2306；男性病程相關(guān)系數(shù)為0.2083，女性為0.5799。

3 討 論

血清肌酸激酶活性（CK）及肌電圖未見(jiàn)異常，臨床表現(xiàn)為肌肉無(wú)力的骨骼肌疾病包括輕型先天性肌病、代謝性肌病、神經(jīng)肌肉接頭疾病及周圍神經(jīng)病早期等，全身性疾病亦可表現(xiàn)為肢體無(wú)力及沉重感。肌肉病理未見(jiàn)異常的無(wú)力性疾病有神經(jīng)肌肉接頭疾病、超微結(jié)構(gòu)異常性肌病、未認(rèn)識(shí)的疾病、全身性疾病，或情感障礙性疾病。

Maher AC等以兩組年齡在18～25歲（12例vs 12例、11例vs 13例）的健康志愿者為對(duì)象的研究表明，男女肌肉組織中Myostatin基因mRNA及蛋白含量均無(wú)明顯差別，均明顯低于內(nèi)標(biāo)基因及蛋白（β-actin）含量[1]。與其結(jié)果相似，本組男女患者的myostatin mRNA表達(dá)亦無(wú)明顯差異，不同的是其中2例未見(jiàn)表達(dá)。產(chǎn)生這一結(jié)果的原因可能系本組研究對(duì)象為肌無(wú)力患者，并非正常人群個(gè)體。雖然常規(guī)病理檢查顯示骨骼肌形成未見(jiàn)異常，但其超微結(jié)構(gòu)及分子結(jié)構(gòu)是否異常不得而知。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示熱休克蛋白基因剔除小鼠的myostatin基因mRNA表達(dá)水平明顯減少，其常規(guī)骨骼肌病理結(jié)構(gòu)與野生型相似，但免疫組化染色證明其串珠素蛋白缺乏[2]。因此，此2例可能系超微結(jié)構(gòu)異常的患者，需進(jìn)一步深入研究觀察。

一項(xiàng)以股四頭肌為對(duì)象，針對(duì)年齡分別為：18～30歲（8例）和80～89歲（6例）的女性的研究顯示老年女性的myostatin基因mRNA表達(dá)水平高于年輕女性。本組對(duì)象的表達(dá)與年齡無(wú)明顯相關(guān)性，但按性別分層后，女性亦與年齡無(wú)相關(guān)性?？赡芘c年齡跨度小，均為青壯年患者（14歲～45歲）有關(guān)。文獻(xiàn)中青年組表達(dá)量約為GAPDH的1.8倍，而老年組約為2.9倍，但本組中表達(dá)水平最高者為GAPDH的1.15倍。此差別不除外種族間差異所致，亦可能為所檢目標(biāo)肌肉不同所致[3]。而男性的表達(dá)指數(shù)與年齡正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)0.6855），與病程無(wú)明顯相關(guān)；女性患者的表達(dá)與病程成正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)0.5799）。提示男性年齡增長(zhǎng)或女性病和與myostatin基因表達(dá)水平增高的互為因果。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示，常規(guī)組織病理學(xué)結(jié)構(gòu)正常的肌肉組織中myostatin基因mRNA表達(dá)水平變異較大。國(guó)人的表達(dá)水平可能低于高加索人，其表達(dá)指數(shù)在男性可能與年齡相關(guān)，而在女性可能與病程相關(guān)。

[1] Maher AC,Fu MH,Isfort RJ,et al.Sex Differencesin G lobalm-RNAContentof HumanSkeletal Muscle[J].PLoS One,2009,4(7): e6335.

[2] Xu Z,Ichikawa N,Kosaki K,et al.Perlecan deficiency causes muscle hypertrophy,a decrease in myostatinexpression,and changes in muscle fiber composition[J].Matrix Biol,2010, 29(6):461-470.

[3] Williamson DL,Raue U,Slivka DR,et al. ResistanceExercise,Skeletal MuscleFOXO3A, and 85-Year-OldWomen[J].J Gerontol A Biol Sci Med Sci,2010,65A(4):335-343.

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1671-8194（2013）27-0151-02