張紅萍 徐麗丹 浙江省東陽(yáng)市人民醫(yī)院中藥房 東陽(yáng) 322100

俞忠明 董 宇 浙江省中醫(yī)藥研究院中藥研究中心

注射用銀杏葉提取物對(duì)小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的影響

張紅萍 徐麗丹 浙江省東陽(yáng)市人民醫(yī)院中藥房 東陽(yáng) 322100

俞忠明 董 宇 浙江省中醫(yī)藥研究院中藥研究中心

目的：觀察注射用銀杏葉提取物靜脈注射對(duì)動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)的影響。方法：以注射用銀杏葉提取物高劑量（18mg/kg）、中劑量（9mg/kg）、低劑量（4.5mg/kg）靜脈注射給藥，經(jīng)小鼠自主活動(dòng)試驗(yàn)、小鼠轉(zhuǎn)棒試驗(yàn)及與戊巴比妥鈉閾下劑量催眠協(xié)同作用試驗(yàn)，觀察銀杏葉提取物對(duì)小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的影響。結(jié)果：銀杏葉提取物高、中、低三個(gè)劑量組與溶劑對(duì)照組比較，小鼠自主活動(dòng)數(shù)、落棒率及翻正反射發(fā)生率均無(wú)顯著影響（P＞0.05）。結(jié)論：注射用銀杏葉提取物在劑量范圍內(nèi)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)無(wú)明顯影響。

小鼠 注射用銀杏葉提取物 神經(jīng)系統(tǒng)

銀杏作為一味中藥，味微苦，性平，歸心、肺經(jīng)，具有活血化瘀、通經(jīng)止痛、斂肺平喘、化濁降脂等功效。銀杏葉提取物（extract of ginkgo biloba，EGb）是從銀杏葉中提取的具有獨(dú)特藥理活性的混合物，國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者采用現(xiàn)代分離技術(shù)和測(cè)試手段對(duì)銀杏葉提取物的化學(xué)成分進(jìn)行研究，從銀杏葉提取物中發(fā)現(xiàn)了黃酮類(lèi)、萜類(lèi)內(nèi)酯、聚異戊烯醇類(lèi)、有機(jī)酸、烷基酚和烷基酚酸、甾體化合物、氨基酸和微量元素在內(nèi)的100多種化學(xué)成分，其中黃酮具有保護(hù)毛細(xì)血管通透性、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、恢復(fù)動(dòng)脈血管循環(huán)、解除心臟平滑肌痙攣等功效。近年對(duì)銀杏葉提取物藥理和神經(jīng)系統(tǒng)作用進(jìn)行大量的研究，取得一定進(jìn)展[1-3]，為銀杏葉提取物的臨床應(yīng)用提供了依據(jù)。本研究觀察銀杏葉提取物靜脈注射對(duì)小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng) 物 ICR小鼠，體質(zhì)量（20±2）g，雌雄各半，120只，由浙江省中醫(yī)藥研究院動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SYXK（浙）2009-0122。

1.2 儀器與試劑 YSD-4Q藥理生理多用儀（安徽蚌埠無(wú)線二廠）；YLS-4C轉(zhuǎn)棒式疲勞儀（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站）；注射用銀杏葉提取物（杭州合核生物化工技術(shù)升發(fā)有限公司提供）；0.9%氯化鈉注射液。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響[4-6]取小鼠40只，隨機(jī)分成4組，即注射用銀杏葉提取物高劑量組（18mg/ kg）、中劑量組（9mg/kg）、低劑量組（4.5mg/kg）及空白溶劑對(duì)照組（0.9%氯化鈉注射液），每組10只，雌雄各半。將小鼠置藥理生理多用儀中適應(yīng)10min后測(cè)3min內(nèi)自主活動(dòng)數(shù)，然后取每組相同編號(hào)的小鼠間隔一定時(shí)間，按組別分別尾靜脈注射給藥，各鼠分別在給藥后15、30、60、120min置藥理生理多用儀光電盒中測(cè)其活動(dòng)次數(shù)，以給藥前后各組活動(dòng)次數(shù)的差值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2.2 對(duì)小鼠肌肉協(xié)調(diào)能力的影響 小鼠轉(zhuǎn)棒試驗(yàn)（Rotarod Test）[7-9]主要是用于檢測(cè)小鼠的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力、藥物對(duì)小鼠肌肉松弛作用的強(qiáng)度及檢測(cè)神經(jīng)毒性物質(zhì)對(duì)小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的影響等。本實(shí)驗(yàn)采用轉(zhuǎn)棒試驗(yàn)觀察注射用銀杏葉提取物對(duì)小鼠肌肉協(xié)調(diào)能力的影響。實(shí)驗(yàn)前將小鼠放置轉(zhuǎn)棒上，轉(zhuǎn)速為16次/ min，選取在棒上停留3min以上小鼠40只進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分組方法同2.1。每次取各組相同編號(hào)的小鼠，共40只尾靜脈注射給藥，注射容積0.2mL/10g，小鼠于給藥后15、30、60、120min分別放置轉(zhuǎn)棒儀1～4室中的轉(zhuǎn)棒上，記錄3min內(nèi)落棒動(dòng)物數(shù)，計(jì)算落棒率。

2.3 對(duì)小鼠戊巴比妥鈉的閾下催眠劑量影響[10-11]取小鼠40只，分組方法同2.1。按組別進(jìn)行小鼠尾靜脈注射給藥，注射容積0.2mL/10g，給藥后15min，按27mg/kg的劑量腹腔注射戊巴比妥鈉，觀察30min內(nèi)翻正反射消失達(dá)1min以上的動(dòng)物數(shù)，計(jì)算各組小鼠翻正反射發(fā)生率。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0軟件，進(jìn)行方差分析，對(duì)于落棒率及入睡率采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 四組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)比較 各組小鼠活動(dòng)次數(shù)差值、均值經(jīng)單因素方差分析，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.87），見(jiàn)表1。

表1 四組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)比較（±s） 次/3min

組別溶劑對(duì)照組銀杏葉提取物高劑量組銀杏葉提取物中劑量組銀杏葉提取物低劑量組n/只10 10 10 10劑量/（mg/kg）0 18 9 4.5藥前活動(dòng)次數(shù)62.20±24.60 63.70±18.40 59.40±18.72 60.90±18.62 15min 22.80±13.57 20.30±8.00 15.70±4.11 21.10±8.60 30min 26.20±12.05 27.60±17.39 27.60±11.64 29.30±11.20 60min 31.10±13.40 30.60±20.22 26.80±11.35 30.20±10.64 120min 34.00±13.37 35.70±16.43 31.10±11.87 36.40±10.06藥后活動(dòng)次數(shù)差值/次

3.2 四組小鼠肌肉協(xié)調(diào)能力比較 各組小鼠落棒率經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.06），見(jiàn)表2。

3.3 四組小鼠戊巴比妥鈉閾下催眠劑量比較 各組小鼠入睡數(shù)經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.73），見(jiàn)表3。

4 討論

銀杏屬于裸子植物門(mén)銀杏科銀杏屬，只有一個(gè)種，至今具有接近2億年的歷史。因此，被稱(chēng)為“活化石”，銀杏葉中含有天然活性黃酮及苦內(nèi)酯等與人體健康有益的多種有效成份，具有溶解膽固醇，擴(kuò)張血管的作用，對(duì)改善腦功能障礙、動(dòng)脈硬化、高血壓、眩暈、耳鳴、頭痛、老年癡呆、記憶力減退等方面具有明顯效果。其防病、治病、健身的價(jià)值和使用在明代李時(shí)珍的《本草綱目》中早有記載。銀杏葉提取物（EGb）是從銀杏葉中提取精制而成的純天然藥物，主要含有黃酮類(lèi)、萜類(lèi)和有機(jī)酸類(lèi)等有效成分，具有清除自由基、抑制血小板活化因子、抑制一氧化氮合酶、抑制谷氨酸毒性、保護(hù)線粒體等多種生理作用[12-15]，目前已經(jīng)廣泛用于心腦血管疾病的臨床治療。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)注射用銀杏葉提取物高、中、低劑量對(duì)小鼠自主活動(dòng)、肌肉協(xié)調(diào)能力及戊巴比妥鈉閾下催眠劑量的影響的研究提示，注射用銀杏葉提取物高、中、低劑量對(duì)小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的影響與空白對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。表明注射用銀杏葉提取物對(duì)小鼠神經(jīng)系統(tǒng)，在劑量范圍內(nèi)使用安全，為注射用銀杏葉提取物臨床安全使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)為銀杏葉提取物的深度開(kāi)發(fā)和利用提供可能。

［1］趙世印，譚華炳，賀琴，等.銀杏葉提取物神經(jīng)系統(tǒng)藥理作用與臨床應(yīng)用進(jìn)展［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2006，25（10）：1037-1038.

［2］王云袁，寶強(qiáng).銀杏葉提取物對(duì)發(fā)育期戊四氮點(diǎn)燃癲癇大鼠認(rèn)知功能及海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響［J］.實(shí)用兒科臨床雜志，2011，26：17.

［4］張科學(xué)，趙佳佳，張慶華，等.異氟烷對(duì)幼小鼠自主活動(dòng)和學(xué)習(xí)記憶行為的影響［J］.中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2011，25（3）：245-248.

［5］高艷，趙佳佳，陳雪，等.氯胺酮對(duì)幼齡小鼠自主活動(dòng)的影響和致遺忘作用及其與GABA-A，NMDA受體的關(guān)系［J］.中國(guó)藥房，2013，24（1）：27-29.

［6］王玲，晏明，劉晶晶，等.多次使用丙泊酚對(duì)小鼠自主活動(dòng)和學(xué)習(xí)記憶的影響［J］.徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，32（5）：306-308.

［7］安述明，曾慶文，徐浩，等.CaMKII在前腦過(guò)量表達(dá)損傷小鼠靈活性學(xué)習(xí)能力［J］.華東師范大學(xué)學(xué)報(bào)·自然科學(xué)版，2010，（2）：111-118.

［8］陰均濤，張麗紅，閆欣，等.不同行為學(xué)測(cè)試方法在家族性肌萎縮側(cè)索硬化小鼠模型的比較［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2013，（1）：57-60.

［9］呂楠，宋寶珍，榮子丹，等.角鯊烯膠丸對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞的影響及作用機(jī)制的探討［J］.中成藥，2012，（1）：037.

［10］熊濤，夏晴，王成，等.復(fù)方棗仁膠囊鎮(zhèn)靜催眠作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2006，22（6）：67-68.

［11］李寶莉，朱海，符兆英，等.酸柏梔油軟膠囊對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜催眠促學(xué)習(xí)記憶作用的影響［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2012，32（8）：1639-1642.

［12］李海龍，李紅.銀杏葉提取物的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007，13（7）：111-112.

［13］王琛，李昌煜.銀杏葉提取物藥理作用研究新進(jìn)展［J］.中國(guó)現(xiàn)代中藥，2009，11（3）：10-12.

［14］高華榮.銀杏葉提取物的藥理作用［J］.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2010，16：168-169.

［15］金鑫.銀杏葉提取物藥理研究進(jìn)展［J］.天津藥學(xué)，2012，24（2）：69-71.

Influence of the Injection of Ginkgo Biloba Extract on the Nervous System of Mice

ZHANG Hongping，XU Lidan，YU Zhongming，et al.The People's Hospital of Dongyang，Dongyang（322100），China

Objective：To observe the effect of the injection of ginkgo biloba extract on the nervous system of mice. Methods：Forty mice were randomly divided into 4 groups and were intravenously given injection of ginkgo biloba extract at the dose of 18，9，and 4.5 mg/kg and 0.9%sodium chloride injection（served as solvent control），respectively.The spontaneous activity test，turn rod test and hypnotic synergy test under sodium pentobarbital threshold dose were carried out to observe the effect of ginkgo biloba extract on the nervous system.Results：No significant difference was noted in the number of spontaneous activity，rod drop rate，and the righting reflex of mice between the ginkgo biloba extract groups and the solvent control group（P＞0.05）.Conclusion：The injection of ginkgo biloba ex tract in the dose range had no obvious influence on the nervous system of mice.

mice injection of ginkgo biloba extract nervous system

2013-05-23

浙江省科技廳計(jì)劃項(xiàng)目（No.2012C33125）

董宇，Tel：0571-88849088；E-mail：107393636@qq.com