王 冠，劉曉莉，孫 輝

（吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院甲狀腺外科、吉林省外科轉(zhuǎn)化醫(yī)學重點實驗室、吉林省甲狀腺疾病防治重點實驗室，吉林 長春130033）

甲狀腺癌居內(nèi)分泌惡性腫瘤之首，在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率呈穩(wěn)定上升趨勢［1］，除髓樣癌外，絕大部分類型甲狀腺癌起源于濾泡上皮細胞，按照病理分型可分為乳頭狀甲狀腺癌（papillary thyroid cancer，PTC）、濾泡狀甲狀腺癌（follicular thyroid cancer，F(xiàn)TC）和 未 分 化 癌 （anaplastic thyroid cancer，ATC）。其中乳頭狀甲狀腺癌（PTC）是最常見的病理類型，約占所有甲狀腺惡性腫瘤的75%－85%［2］。目前，針對甲狀腺癌的術(shù)前診斷主要通過超聲檢查以及穿刺活檢，治療方法主要為手術(shù)切除、放射性碘治療等幾方面。

乳頭狀甲狀腺癌是一種復雜性疾病，發(fā)生機制至今尚未明確。研究顯示其分布多為散發(fā)性（95%）［3］，亦存在家族聚集現(xiàn)象，提示其發(fā)生與環(huán)境及遺傳因素有關［4］，因此尋找和研究乳頭狀甲狀腺癌的易感基因?qū)τ诹私馄洳∫蚺c發(fā)病機理、探求新的診斷和治療方法具有重要意義。越來越多的研究表明，PTC是一種受到多基因、多因子所影響的疾病，遺傳因素可能是PTC的主要危險因素［5］。遺傳因素對PTC發(fā)病機制可分為兩個方面，其一，為個體在生長發(fā)育過程中發(fā)生基因突變或重排，表現(xiàn)為體細胞中一個或多個分子事件的疊加，導致MAPK途徑或PTEN／AKT途徑持續(xù)激活從而引起細胞癌變。這類分子學事件只在腫瘤組織中發(fā)生，是散發(fā)性乳頭狀甲狀腺癌發(fā)病的主要分子機制，包括RAS基因突變、RET／PTC重排、BRAF基因突變等；其二，源自個體本身所屬家系或種系的基因多態(tài)性，如果一個群體中存在兩種以上的等位基因，其中最低的基因頻率也比突變所能維持的頻率高，即稱為DNA多態(tài)性，其本質(zhì)是進化過程中各種原因引起染色體中核苷酸排序變化，即產(chǎn)生的DNA片段和DNA序列在個體內(nèi)的差異，在個體中保持終生不變。這種基因多態(tài)性使具有某些特定遺傳背景的個體更容易患病，也可稱之為遺傳易感種性。由于同系或家系的個體通常生活在相同或相似的環(huán)境之中，所以對于此類機制的研究有希望揭示基因與環(huán)境因素之間相互作用的關系，并為乳頭狀甲狀腺癌的早期診斷、危險性評估和治療方案的制定提供指導和參考。當前腫瘤學研究認為，腫瘤是環(huán)境因素和多種微效基因共同積累作用的結(jié)果，基因的多態(tài)性及其特定的組合可能是造成腫瘤易感性的主要因素。國內(nèi)外關于PTC發(fā)生發(fā)展的分子遺傳學機制研究表明，多種基因的SNP與乳頭狀甲狀腺癌易感性相關，如CDKN1B基因、FOXE1基因、RET基因、hMSH2基 因 以 及 XRCC3 基 因 等［6－10］。BRAF基因單核苷酸多態(tài)（SNP）是近年來發(fā)現(xiàn)的與甲狀腺乳頭狀癌遺傳易感性相關的位點，BRAF基因SNP與乳頭狀甲狀腺癌遺傳易感性的研究目前受到學者們越來越多的重視。

1 BRAF基因基本結(jié)構(gòu)

BRAF，又名鼠類肉瘤濾過性毒菌致癌同源體B1，是RAF基因家族成員，位于人染色體7q34，大小190Kb，含有七個轉(zhuǎn)錄區(qū)，包含18個外顯子，編碼蛋白質(zhì)分子全長約94kD，有783個氨基酸殘基，是一種存在于細胞質(zhì)內(nèi)的絲氨酸－蘇氨酸特異性蛋白激酶，在細胞MAPK通路中發(fā)揮重要作用。目前，已發(fā)現(xiàn)有超過30種的BRAF突變類型，其中有約90%的突變位于第15外顯子，10%的突變位于第11外顯子［11］。與乳頭狀甲狀腺癌相關的突變主要 有： BRAFT599I， BRAFV599E， BRAFVK600－IE，BRAFV600E，BRAFK601E，BRAFKSRWS600，BRAFE585K等［12］，其中BRAFV600E突變被認為是PTC最常見的可遺傳變異，The Catalogue of Somatic Mutations in Cancer（COSMIC）癌癥數(shù)據(jù)庫在其網(wǎng)站上發(fā)表報告顯示，78000例存在BRAF基因突變的樣本中超過95%為V600E突變［13］，即第15外顯子中第1799位核苷酸胸腺嘧啶（T）轉(zhuǎn)換為腺嘌呤（A），導致蛋白質(zhì)產(chǎn)物中第600位的繳氨酸（V）轉(zhuǎn)換為谷氨酸（E），在BRAF野生型構(gòu)象中，其 G597－V601殘基端和G465－V472殘基端（ATP結(jié)合袢）形成一個疏水性殘基（P－環(huán)），使其保持非激活狀態(tài)，而BRAFV600E突變破壞了這個疏水性相互作用，使BRAF激酶成為激活通路的催化劑，持續(xù)激活MAPK 通路，進而引起腫瘤的發(fā)生［14－16］。

2 單核苷酸多態(tài)性（SNP）與腫瘤易感性

人類基因組具有高度多態(tài)性，存在著大量遺傳變異，涉及單個堿基改變、短片段插入、缺失、序列重復，甚至大片段的插入、重復或缺失。利用遺傳信息與疾病、藥物代謝之間的關系來進行疾病的輔助診斷與治療和新藥研發(fā)等研究已成為當前的研究方向［17，18］。研究基因的單核苷酸多態(tài)性有助于解釋個體的表型差異以及不同群體和個體對疾病，特別是對復雜疾病的易感性以及對各種藥物的耐受性和對環(huán)境因子反應的差異。

作為第三代遺傳標記，單核苷酸多態(tài)性（single nocleotide polymorphism，SNP）在整個人類基因組中達1000萬多個，占己知基因多態(tài)性的90%以上［19］，SNP極大程度的代表了個體之間的遺傳差異，是當前藥物基因組以及疾病基因組研究的重要工具。根據(jù)在基因中的位置，SNP可分為基因調(diào)控區(qū)SNP（rSNP）和基因編碼區(qū)SNP（cSNP）。其中cSNP根據(jù)是否改變編碼的氨基酸有分為同義cSNP（synonymous cSNP）和非同義cSNP（non－synonymous cSNP）。非同義cSNP可改變編碼的氨基酸殘基的種類，例 如 腫 瘤 易 感 基 因 p53［20］、XRCC1［21］、ADPRT［21］、ERCC2［22］和GSTP1［23］上分別有72Arg／Pro、194Arg／Trp、762Ala／Val和105Ile／Val氨基酸的改變，這些改變導致其所表達的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生變化，繼而導致攜帶此SNP等位基因的個體腫瘤易感性增高。此外，研究發(fā)現(xiàn)調(diào)控區(qū)的rSNP能夠調(diào)節(jié)所在區(qū)域附近的基因表達，影響細胞的正常生理功能，直接或間接引起一些重要通路的異常激活而引發(fā)腫瘤形成。而出現(xiàn)在調(diào)控區(qū)的rSNP可以調(diào)節(jié)所在區(qū)域附近的基因表達，繼而影響細胞正常功能，進而導致腫瘤的發(fā)生［32］。

根據(jù)腫瘤的一個或幾個易感基因（包括順式作用元件區(qū)、剪切位點）或附近SNP對患病人群與健康對照人群進行相關性分析，確定某單核苷酸多態(tài)（SNP）的某種基因型或單倍型頻率在患病人群與健康對照人群中的差異分布，由此即可確定該基因型或單倍體型所反映的個體對某種腫瘤具有遺傳易感性，在這個領域的研究目前已經(jīng)取得了飛速的進展。

3 BRAF基因多態(tài)性與乳頭狀甲狀腺癌遺傳易感性

BRAF基因體細胞突變在乳頭狀甲狀腺癌中比較多見，以BRAFV600E突變最常見，比例從29～83%不等［27］，研究證實BRAFV600E突變通過持續(xù)激活細胞內(nèi)MAPK信號通路，導致腫瘤形成。但BRAF基因單核苷酸多態(tài)（SNP）與乳頭狀甲狀腺癌遺傳易感性的關系目前國內(nèi)外研究較少，機制尚不明確。已被確認的BRAF基因單核苷酸多態(tài)（SNP）位點主 要 有：A1023G （P341P）；A1227G （S409S）；A1383G（Q461Q）；A1797C（T599T）；A1929G（G643G）；G2272A（G758R）。BRAF基因單核苷酸多態(tài)性（SNP）已被證實與惡性黑色素瘤、卵巢癌、結(jié)腸癌等多種人體腫瘤易感性相關［24、25、26］。BRAF基因單核苷酸多態(tài)性（SNP）與腫瘤易感性的關系是當前腫瘤研究的熱點，越來越多的學者投入到BRAF基因多態(tài)性與PTC易感性的研究中。

晏光榮等［28］研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺腫瘤不同基因的SNP位點頻率存在著差異，這種差異代表了甲狀腺腫瘤的良惡性鑒別以及甲狀腺腫瘤的不同病理分型。研究BRAF基因與甲狀腺腫瘤相關SNP位點，有助于幫助了解不同個體的表型差異、不同群體對疾病的易感性以及不同病理分型對藥物的耐性及患者對不同環(huán)境反應之間的差異。確定了BRAF基因SNP等位位點頻率差異與PTC的相關性，就可以以此SNP作為PTC分子遺傳標記，采集患者血清樣本進行基因?qū)W診斷，用于篩查PTC患病的高危人群以及判斷易感危險程度，建立有效的預警，達到一級預防的目的，并為進一步分子靶向治療和預防干預提供研究基礎［29］。

乳頭狀甲狀腺癌是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，許多研究也證實了這一點，利用可以反映個體遺傳差異的分子標記SNP研究其與某些腫瘤易感性的關系時，可能不會發(fā)現(xiàn)明確的相關性，但當考慮個體所處的環(huán)境因素（如飲酒、吸煙）時，這種相關性可變得明確。在BRAF基因單核苷酸多態(tài)性與乳頭狀甲狀腺癌易感性的研究中，Qiang Zhang等［30］首次研究了BRAF基因單核苷酸多態(tài)（SNP）和中國人口乳頭狀甲狀腺癌易感性之間的相關性，選取了BRAF基因多態(tài)性位點rs17161747，rs1042179、rs3748093以及rs3748093，來研究在中國人群中定位在BRAF基因上普遍的基因突變與乳頭狀甲狀腺癌易感性的關系。研究包含了368例乳頭狀甲狀腺癌患者以及564例健康對照組 。研究發(fā)現(xiàn)，在Hardy－Weinberg平衡檢驗分析下，選取的4個BRAF基因SNP位點等位基因頻率在乳頭狀甲狀腺癌患者組和健康對照組間無顯著差異（rs1042179P＝ 0．970 ；rs11762469p ＝ 0．975；rs17161747p＝0．840；rs3748093P＝0．996）。當所得結(jié)果根據(jù)傳統(tǒng)的PTC危險因素進行分層分析時，結(jié)果表明，對于年齡小于45歲的患者，攜帶BRAF基因rs3748093位點AT基因型 （P＝0．011、OR 1．75）以及 AT＋AA聯(lián)合基因型（P＝0．015、OR 1．68）是乳頭狀甲狀腺癌發(fā)病的危險因素。此外，rs3748093位點AA基因型對于非飲酒者是一個獨立的危險因素（P＝0．049、OR 2．12）。對于有遺傳家族史的患者，BRAF基因rs17161747位點（GC和GC＋CC）基因型為PTC的高危因素（GC 基 因 型：OR 4．74 ［CI 1．73－13．18］，P＝0．003；GC＋CC 基 因 型：OR 3．24 ［CI 1．29－8．12］，P＝0．012），于此同時，BRAF基因 SNP位點－－rs1042179GG＋AG聯(lián)合基因型，在吸煙者中為PTC的危險因素（OR 2．51 ［CI1．10－5．74］，P＝0．029）。值得說明的是，BRAF基因單核苷酸多態(tài)性（SNP）會影響到乳頭狀甲狀腺癌的預后，Qiang Zhang等的［30］研究發(fā)現(xiàn)，乳頭狀甲狀腺癌患者中，和攜帶BRAF基因SNP rs3748093多態(tài)性位點TT基因型相比，AT和AT＋AA基因型攜帶者相對不易出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（AT基因型：OR 0．40，P＜0．001；AT＋AA 基 因 型：OR 0．44 ，P＜0．001），而BRAF基因SNP rs3748093多態(tài)性位點AT基因型攜帶者則有低齡發(fā)病的傾向（發(fā)病年齡小于 45 歲）（OR 0．64 ［CI 0．41－0．99］，P＝0．047）；研究還發(fā)現(xiàn)，和BRAF基因rs17161747位點GG基因型相比，攜帶CC基因型者PTC腺外侵襲 風 險 增 加 （OR 5．72 ［CI 1．22－26．77］，P＝0．027）。此外，朱曉娥等［31］的一項研究表明，BRAF基因rs17623382位點在存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTC癌旁組織中有不同的基因分型，但是否可作為判斷PTC存在早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的依據(jù)，尚不明確，仍需進一步研究。

4 結(jié)語與展望

BRAF基因是和乳頭狀甲狀腺癌密切相關的基因，BRAF基因突變使MAPK通路持續(xù)性激活導致腫瘤的發(fā)生，但是BRAF基因單核苷酸多態(tài)性（SNP）和乳頭狀甲狀腺癌遺傳易感性的關系尚不明確。深入研究SNP與PTC易感性的關聯(lián)對PTC患者早期診斷具有指導作用，通過SNP相關性的分析來揭示甲狀腺乳頭狀癌的遺傳背景和風險基因，確定真正增加PTC遺傳易感性的基因變異，有助于更進一步了解PTC發(fā)病機制并作出科學、準確的個體化分析，為乳頭狀甲狀腺癌早期診斷提供新的依據(jù)。在治療方面，隨著遺傳變異研究與藥物基因組學的結(jié)合，可根據(jù)特定個體的SNP來改善藥物設計、制藥技術(shù)、用藥方法，并根據(jù)個體間不同的基因多態(tài)性有針對性的選擇藥物，提高療效。

［1］Xing M．Prognostic utility of BRAF mutation in papillary thyroid cancer［J］．Mol Cell Endocrinol，2010，321（1）：86．

［2］Aschebrook－Kilfoy B，Ward MH，Sabra MM，et al．Thyroid cancer incidence patterns in the United States by histologic type，1992－2006［J］．Thyroid，2011，21（2）：125．

［3］J Lee，ES Lee，YS Kim．Clinicopathologic significance of BRAF V600Emutation in papillary carcinomas of the thyroid：ameta－analysis［J］．Cancer，2007，110：38．

［4］khara L，Silverman A，Bethel C，et al．Thyroid papillary carcinoma in a 3－year－old American boy with a family history of thyroid cancer：a case report and literature review ［J］．J Pediatr Hematol Oncol，2010，32（3）：118．

［5］朱虔兮，邊建超，沈 強，等．遺傳因素在乳頭狀甲狀腺癌發(fā)生中的作用［J］．中國預防醫(yī)學雜志，2004，5（5）：321．

［6］Landa I，Montero－Conde C，Malanga D，et al．Allelic variant at－79（C＞ T）in CDKN1B（p27KIP1）confers an increased risk of thyroid cancer and alters mRNA levels［J］．Endocr Relat Cancer，2010，17（2）：317．

［7］Kallel R，Belguith－Maalej S，Akdi A，et al．Genetic investiga－tion of FOXE1polyalanine tract in thyroid diseases：new insight on the role of FOXE1in thyroid carcinoma［J］．Cancer Biomark，2010，8（1）：43．

［8］Ho T，Li G，Zhao C，et al．RET polymorphisms and haplotypes and risk of differentiated thyroid cancer［J］．Laryngoscope，2005，115（6）：1035．

［9］施文平，邊建超，江 峰，等．hMSH2基因多態(tài)性與乳頭狀甲狀腺癌遺傳易感性 ［J］．復旦學報（醫(yī)學版），2007，（02）：163．

［10］王玉龍，嵇慶海，吳 毅，等．XRCC3基因多態(tài)性與乳頭狀甲狀腺癌遺傳易感性和基因重排的相關性分析［J］．中國天津，2009．

［11］Lisa M．Caronia，John E，Pha，et al．Role of BRAF in Thyroid Oncogeneis［J］．Ckub Cancer Res，2011，17：7511．

［12］Zhao XM．Recent advances in molecular biology of thyroid cancer and their clinical implications［J］．Otolaryngol Clin North Am，2008，41（6）：1135．

［13］Bamford S，Dawson E，F(xiàn)orbes S，et al．The COSMIC（Catalogue of Somatic Mutations in Cancer）database and website［J］．Br J Cancer，2004，91：355．

［14］Mercer KE，Pritchard CA．Raf proteins and cancer：B－Raf is identified as a mutational target［J］．Biochimicaet Biophysica Acta，2003，1653：25．

［15］Kohno M，Pouyssegur J．Targeting the ERK signaling pathwayin cancer Therapy［J］．Annals of Medicine，2006，38（3）：200．

［16］Wan PT，Garnett MJ，Roe SM，et al．Cancer Genome Project．Mechanism of activation of the RAFERK signaling pathway by oncogenic mutations of B－RAF［J］．Cell，2004，116：855．

［17］Dalma－Weiszhausz DD，Murphy GM Jr．Single nucleotide polymorphisms and their charaterization with oligonucleotide microarrays［J］．Psychiatr Genet，2002，12（2）：97．

［18］Diskin SJ，Li M，Hou C，et al．Adjustment of genomic waves in signal intensities from whole－genome SNP genotyping platform［J］．Nucleic Acids Res，2008．doi：10．1093／nar／gkn556．

［19］Lin Z，Cui X，Li H．Mutiplex genotyoe detemination at a large number of gene loci［J］．Proc Nat Acad Sci USA，1996，93（6）：2582．

［20］Gramja F，Morari J，Morari EC，et al．Proline homozygosity in codon 72of p53is a factor of susceptibility for thyroid cancer［J］．Cancer Lett，2004，210（2）：151．

［21］Li C，Hu Z，Lu J，et al．Genetic polymorphisms in DNA base－excision repair genes ADPRT，XRCC1，and APE1and the risk of squamous cell carcinoma of the head and neck［J］．Cancer，2007，110（4）：867．

［22］Zhan P，Wang Q，Wei SZ，et al．ERCC2／XPD Lys751Gln and Asp312Asn gene polymorphism and lung cancer risk：a meta－aanalysis involving 22case－control studies［J］．J Thorac Oncol，2010，5（9）：1337．

［23］Zendehdel K，Bahmanyar S，McCarthy S，et al．Genetic polymorphisms of glutathione S－transferase genes GSTP1，GSTM1，and GSTT1and risk of esophageal and gastric cardia cancers［J］．Cancer Causes Control，2009，20（10）：2031．

［24］Livia Kelemena，Michael Jamesa．BRAF polymorphisms and the risk of ovarian cancer of low malignant potential［J］．Gynecologic Oncology，2005，97（3）：807．

［25］Michael R James，Richard B Roth，Michael M．BRAF Polymorphisms and Risk of Melanocytic Neoplasia［J］．Journal of Investigative Dermatology，2005，125：1252．

［26］Marta Herreros－Villanueva，NoemíGomez－Manero，Pilar Mu n～iz，et al．PIK3CA mutations in KRAS and BRAF wild type colorectal cancer patients．A study of Spanish population［J］．Molecular Biology Reports，2011，38（2）：1347．

［27］Frasca F，Nucera C，Pellegriti G，et al．BRAF（V600E）mutation and the biology of papillary thyroid cancer ［J］．Endocr Relat Cancer，2008，15（1）：191．

［28］晏光榮．SNP與腫瘤易感相關性研究進展［J］．國外醫(yī)學·生理、病理科學與臨床分冊，2004，24（2）：175．

［29］張鳳珍，郝崗平，張媛英．人類SNP多態(tài)性的研究及應用［J］．泰山醫(yī)學院學報，2003．24（2）：203．

［30］Zhang Q，Song F，Zheng H，et al．Association between singlenucleotide polymorphisms of BRAF and papillary thyroid carcinoma in a Chinese population［J］．Thyroid，2013，23（1）：38．

［31］朱曉娥，袁耿彪，等．甲狀腺癌中 BRAF、RET、MEN1、FOXE1等基因相關SNP位點的篩選及臨床價值［J］．重慶醫(yī)學，2012，41（34）：3580．

［32］陳蕊雯，孫樹漢．單核苷酸多態(tài)性在復雜性狀疾病易感基因研究中的應用［J］．第二軍醫(yī)大學學報，2004，25（2）：140．