蔡瑞云, 陳洪亮,金鳳哲
(瑞安市紅十字醫(yī)院檢驗(yàn)科,浙江溫州325200)
腫瘤型M2丙酮酸激酶(TuM2-PK)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤標(biāo)志物,也是研究熱門之一。相關(guān)研究報(bào)道顯示多種腫瘤患者血漿TuM2-PK水平升高,而且與腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、淋巴轉(zhuǎn)移存在一定的相關(guān)。目前有關(guān)TuM2-PK對(duì)直腸癌診斷價(jià)值的研究較少。為此,我們檢測(cè)了直腸癌患者血漿TuM2-PK水平,探討TuM2-PK在直腸癌中的應(yīng)用價(jià)值。
收集瑞安市人民醫(yī)院和瑞安市紅十字醫(yī)院腫瘤外科2012年3月至12月住院的直腸癌患者153例,男107例,女46例,年齡46~82歲;收集同期直腸良性病變患者48例,其中直腸息肉26例、低級(jí)別直腸上皮內(nèi)瘤變15例、高級(jí)別直腸上皮內(nèi)瘤變7例,男31例,女17例,年齡42~73歲。所有患者均經(jīng)病理診斷證實(shí),直腸癌患者術(shù)前未接受任何放化療。隨機(jī)選取無腫瘤史、癌胚抗原(CEA)、癌抗原199(CA199)、癌抗原72-4(CA7-24)正常的健康體檢者32名作為正常對(duì)照組,男20名,女11名,年齡39~72歲。
1.樣本收集 所有對(duì)象均于早晨采用EDTAK2抗凝管采集空腹靜脈血2 mL,1 h內(nèi)離心分離出血漿存于-80℃?zhèn)溆谩?/p>
2.儀器與試劑 儀器為瑞士帝肯TECAN SUNRISE全自動(dòng)酶標(biāo)儀,檢測(cè)波長(zhǎng)為450 nm。TuM2-PK采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè),試劑盒由德國(guó)ScheBo ò Biotech AG公司提供,嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行操作,以TuM2-PK>15 U/mL 判斷為陽(yáng)性結(jié)果[1]。
3.檢測(cè)方法 采用雙抗體夾心ELISA。用純化的人丙酮酸激酶M2型抗體包被微孔板,血漿樣本中的TuM2-PK與之結(jié)合反應(yīng),再加入HRP標(biāo)記的羊抗人抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)洗滌后加底物TMB顯色,顏色深淺與樣本中TuM2-PK水平成正比,用酶標(biāo)儀讀取標(biāo)準(zhǔn)液與樣本的吸光度(A)值,檢測(cè)中需制定標(biāo)準(zhǔn)曲線,標(biāo)準(zhǔn)液由廠家提供,通過標(biāo)準(zhǔn)濃度與對(duì)應(yīng)的A值在CURVE EXPERT軟件下建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后通過樣本的A值算出樣本TuM2-PK濃度。
直腸癌組血漿TuM2-PK水平為(26.23±5.36)U/mL,明顯高于直腸良性病變組[(18.52±3.66)U/mL]及正常對(duì)照組[(17.68±4.02)U/mL](P均<0.05)。而直腸良性病變組與正常對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
直腸癌患者血漿TuM2-PK陽(yáng)性率與腫瘤細(xì)胞分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否及臨床TNM分期有關(guān),見表1。
表1 直腸癌不同臨床病理參數(shù)TuM2-PK表達(dá)陽(yáng)性率的比較
以病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)直腸癌組與直腸良性病變組TuM2-PK檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行診斷性能分析。血漿TuM2-PK檢測(cè)直腸癌的敏感性為62.09%、特異性為79.16%、陽(yáng)性似然比為2.20、陰性似然比為0.49、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為90.47%、陰性預(yù)測(cè)值為39.58%。
丙酮酸激酶(PK)是糖酵途徑中的一個(gè)關(guān)鍵酶,相對(duì)分子質(zhì)量約為240 000,主要以由4個(gè)亞基組成的四聚體形式存在,有2種結(jié)構(gòu)基因(L基因、M基因)和4種同工酶。4種同工酶通常以酶的活性四聚體形式存在,但在腫瘤細(xì)胞中主要以磷酸化丙酮酸低親和力的二聚體形式存在。這種二聚體的M2型PK被稱為TuM2-PK,與磷酸烯醇丙酮酸親和力很低,因此,會(huì)導(dǎo)致磷酸烯醇類物質(zhì)的大量堆積,DNA合成的增加[2]。TuM2-PK在增生細(xì)胞中呈普遍表達(dá),但在惡性腫瘤中呈現(xiàn)過度表達(dá),惡性腫瘤這種異常能量代謝是TuM2-PK增高的主要原因。在腫瘤的壞死或轉(zhuǎn)移的過程中TuM2-PK會(huì)被釋放到外周體液中,因此外周血中可以檢測(cè)到TuM2-PK[3]。
本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)在直腸癌組血漿TuM2-PK水平明顯高于直腸良性病變組與正常對(duì)照組(P均<0.05),而直腸良性病變組與正常對(duì)照組之間無明顯差異(P>0.05)。由此可見,確定TuM2-PK的醫(yī)學(xué)決定水平可用于區(qū)別直腸的良、惡性病變,這與盧仁泉[4]等對(duì)胃癌的研究結(jié)果相似。直腸癌患者TuM2-PK的陽(yáng)性率與癌細(xì)胞的分化程度、腫瘤是否有淋巴轉(zhuǎn)移以及臨床病理TNM分期有關(guān),而與患者性別、年齡、腫瘤的大小無關(guān)。雖然TuM2-PK陽(yáng)性率與腫瘤浸潤(rùn)深度之間不存在正相關(guān)關(guān)系,但隨著浸潤(rùn)的加深,TuM2-PK的陽(yáng)性率也呈增加趨勢(shì)。癌細(xì)胞分化程度越低,血漿中TuM2-PK水平就越高;有淋巴轉(zhuǎn)移的患者TuM2-PK陽(yáng)性率高于未發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的患者。在臨床病理TNM分期中,Ⅲ~Ⅳ期患者血漿TuM2-PK陽(yáng)性率明顯高于Ⅰ~Ⅱ期患者。這些結(jié)果均明確表明直腸癌患者TuM2-PK水平隨著癌細(xì)胞生物狀態(tài)的改變而改變,一定程度上反映了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。
本研究采用ELISA檢測(cè)TuM2-PK,試劑中包被的2種單克隆抗體針對(duì)TuM2-PK不同的位點(diǎn),避免了與其他PK同工酶的交叉反應(yīng),保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。本研究發(fā)現(xiàn)TuM2-PK診斷直腸癌的靈敏度、特異性分別為62.09%、72.16%,低于Hardt等[4]的報(bào)道,靈敏度也低于葉維潔等[6]的報(bào)道,但高于其他腫瘤標(biāo)志物如CEA、CA199等的靈敏度和特異性。
綜上所述,直腸癌患者血漿TuM2-PK水平可在一定程度上代表癌細(xì)胞的生物學(xué)狀態(tài),反映了直腸癌的發(fā)生、發(fā)展。如果能通過本地區(qū)大規(guī)模人群的研究,確定TuM2-PK的陽(yáng)性判斷閾值,將有助于提高TuM2-PK的臨床應(yīng)用價(jià)值。
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