摘要：為評價武漢市內(nèi)寵物犬狂犬疫苗的免疫情況，為制定狂犬病的防制對策提供依據(jù)，采用間接ELISA法，對325只寵物犬進(jìn)行狂犬病毒抗體撿測。結(jié)果在325只被檢測的寵物犬中，抗體陽性的犬有153只，占47.1%，抗體陰性的犬有172只，占52.9%；其中抗體陽性犬只有38只犬能夠產(chǎn)生保護(hù)性狂犬病毒抗體（即抗體強(qiáng)陽性），占總數(shù)的11.7%；假陽性或潛在感染狂犬病毒的寵物犬7只，占2.2%。

關(guān)鍵詞：寵物犬；狂犬疫苗；免疫效果

中圖分類號：S852.5+2 獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1007-273X（2013）02-0026-02

狂犬病是由狂犬病毒引起的一種高致死性人畜共患性疾病，近幾年我國狂犬病的發(fā)病數(shù)呈持續(xù)上升之勢，居世界第二位，僅次于印度[1]。2003年以來的統(tǒng)計顯示，在國家27個法定傳染病中，狂犬病死亡數(shù)和病死率位居榜首。文獻(xiàn)顯示[2]，在亞洲，由犬引起的狂犬病占到98%，而由貓及其他動物引起的占2%。寵物犬是目前與人類接觸最密切的動物，為了解寵物犬狂犬疫苗免疫接種的效果，筆者與同事于2004年6月對武漢市內(nèi)的寵物犬進(jìn)行了免疫效果檢測和評價工作，時隔多年，經(jīng)過整理當(dāng)時檢查結(jié)果，現(xiàn)報告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 寵物犬 來自武漢市內(nèi)各城區(qū)的寵物飼養(yǎng)家庭，通過新聞媒體發(fā)布消息，以完全自愿的形式接受狂犬病毒IgG抗體檢測。

1.1.2 試劑 根據(jù)國家科技部科技基礎(chǔ)專項（項目編號2002DEA20023）任務(wù)要求研制的“實驗犬狂犬病毒抗體ELISA檢測試劑盒”產(chǎn)品（湖北省疾病預(yù)防控制中心生產(chǎn)，產(chǎn)品專利申請?zhí)?0031011 1497.6）。

1.1.3 主要儀器與器械 酶標(biāo)儀（BIO-RAD Model NO.550），常規(guī)加樣器，寵物犬專用固定設(shè)備及常規(guī)采血工具，離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)）等。

1.2 方法

1.2.1 寵物犬背景調(diào)查方法 在采樣時按照設(shè)計的調(diào)查表，收集寵物犬的種類、來源、年齡、性別及免疫接種疫苗的種類和免疫方法，為狂犬病流行因素調(diào)查提供依據(jù)。

1.2.2 寵物犬固定方法 在犬主人的配合下，用犬專用固定設(shè)備控制犬頭頸部，防止犬突然攻擊采樣人員，然后按照常規(guī)方法[3]對犬前肢皮下靜脈采血2 mL左右，并分離血清。

1.2.3 檢測操作方法 按照狂犬病毒抗體ELISA檢測試劑盒使用說明書進(jìn)行操作。取出酶標(biāo)板，每孔滴加樣品稀釋液100 ？滋L，陽性血清、陰性血清和空白對照孔不加稀釋液→精確吸取待檢血清l ？滋L ，加入相應(yīng)的樣品孔中，同時取陽性、陰性血清100 ？滋L加入相應(yīng)的對照孔中，空白對照孔不加。37 ℃溫育30 min→倒掉孔中的反應(yīng)液，拍干，用洗滌液洗板5次，拍干→每孔滴加酶結(jié)合物100 ？滋L，37 ℃溫育30 min→倒掉孔中的反應(yīng)液，拍干，用洗滌液洗板5次，拍干→每孔滴加底物A、底物B各一滴（50 ？滋L），37 ℃作用15 min，觀察結(jié)果。

1.2.4 結(jié)果判定方法 目測：待檢樣品孔顯藍(lán)色判為陽性。機(jī)測：每孔滴加終止液一滴（50 ？滋L），用酶標(biāo)儀測每孔OD450 nm值。Cutoff=2.1×陰性對照平均OD值（陰性平均值不到0.1按0.1計算）。樣品孔OD值≥Cutoff值判為陽性。

2 結(jié)果

2.1 寵物犬背景情況

本次檢測工作，共有325只寵物犬接受采樣檢測。這些犬來自武漢三鎮(zhèn)，品種多、體型各異，各年齡段均有，其中武昌區(qū)有237只犬、漢口有48只、漢陽30只、地址不詳?shù)挠?0只。按年齡段分：1歲以下犬（不含1歲）90只、1～5歲（不含5歲）215只、5歲以上（含5歲）15只、年齡不詳?shù)挠?只。這些犬大部分采用國產(chǎn)多聯(lián)疫苗免疫，少部分采用進(jìn)口疫苗和狂犬疫苗單價苗免疫。

2.2 檢測結(jié)果

在325只被檢測的寵物犬中，抗體陽性的犬有153只，占47.1%，抗體陰性的犬有172只，占52.9%；其中抗體陽性的犬中只有38只能夠產(chǎn)生保護(hù)性狂犬病毒抗體（即抗體強(qiáng)陽性），占總數(shù)的11.7%；假陽性或潛在感染狂犬病毒的寵物犬7只，占2.2%。其中1歲以下小齡犬同年齡段陽性率只有2.2%，1～5歲中青年犬同年齡段陽性率為14.9%，老齡犬為6.7%，中青年犬的抗體陽性率要高于小齡犬和幼犬，結(jié)果見表1。

3 小結(jié)與討論

這次接受狂犬病毒抗體檢測的寵物犬來自武漢三鎮(zhèn)非常喜愛寵物的家庭，并且非常重視寵物犬的狂犬疫苗預(yù)防接種工作，本應(yīng)該體現(xiàn)出較好的檢測結(jié)果，之所以不能達(dá)到預(yù)期的效果?？赡芘c以下因素有關(guān)：寵物犬的預(yù)防接種有誤區(qū)，以為犬的五聯(lián)、六聯(lián)或七聯(lián)疫苗能夠達(dá)到預(yù)防狂犬病的效果，理論上來分析，在防止傳染病的問題上，預(yù)防多種疫病的疫苗聯(lián)在一起，彼此之間是有干擾作用的，尤其是預(yù)防狂犬病，使用單價狂犬疫苗肯定比使用多價（如犬的五聯(lián)、六聯(lián)或七聯(lián)）疫苗的效果好。我們通過動物實驗也充分證明了這一點。

中青年犬的抗體陽性率之所以高于小齡犬和幼犬，是因為犬經(jīng)過長期多次預(yù)防接種后，具備主動產(chǎn)生狂犬病毒抗體的免疫應(yīng)答機(jī)制，只要每年按時、按程序接種疫苗，是可以產(chǎn)生有效的保護(hù)性狂犬病毒抗體的，接種三次狂犬疫苗的犬，其抗體陽性率高于接種兩次的犬的結(jié)果也證明了這一點。而由于送檢的老齡犬?dāng)?shù)量較少，并沒有真實反應(yīng)出老齡犬的免疫情況。

市面上使用的犬五聯(lián)、六聯(lián)或七聯(lián)疫苗，是以預(yù)防犬瘟熱和細(xì)小病毒病為主，預(yù)防狂犬病通常擺在第三位，因為前兩者疾病主要是通過呼吸道和消化道感染發(fā)病，發(fā)病率非常高，治療的效果差，但預(yù)防效果好；而后者是通過動物之間相互咬傷才可能感染發(fā)病，這種機(jī)會比較小，上述檢測結(jié)果也證明了這一點。

接受狂犬病毒抗體檢測的寵物犬均來自愛寵家庭，在預(yù)防接種、動物福利待遇和衛(wèi)生條件方面比較優(yōu)越，但其寵物犬產(chǎn)生狂犬病毒抗體的比率和抗體水平并不高，據(jù)此推測，武漢市養(yǎng)寵物的一般家庭，其寵物犬能夠產(chǎn)生狂犬病毒抗體的比率和抗體水平可能更低。

在325只被檢測的寵物犬中，有7只沒有接種任何狂犬疫苗但顯示有抗體產(chǎn)生，占2.2%，這可能與檢測方法有關(guān)，出現(xiàn)假陽性結(jié)果，也有可能這些犬處于狂犬病毒感染階段，需要進(jìn)一步觀察，值得特別注意。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張永振，肖末接，孫玉輝，等.中國1984～2002年狂犬病流行情況及防制對策[J].中國流行病雜志，2003，24（10）：883～886.

[2] 王顯軍.狂犬病的流行病學(xué)研究[J].山東衛(wèi)生，2003，（11）：52-53.

[3] 孫敬方.動物實驗方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2001.