摘要：文章以薄荷為材料，采用水蒸汽蒸餾法提取薄荷揮發(fā)油，分別考察了蒸餾時(shí)間和加水量兩種因素對揮發(fā)油提取率的影響。并在接種了大腸桿菌的平板中分別放入沾了四個(gè)不同濃度揮發(fā)油和無菌水的濾紙片，置于30℃溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)，證明薄荷揮發(fā)油對大腸桿菌具有抑菌作用。

關(guān)鍵詞：揮發(fā)油；薄荷；水蒸汽蒸餾法

中圖分類號：TQ461 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號：1674-0432（2012）-11-0054-1

薄荷（Peppermint），別名野薄荷，脣形科，薄荷屬。多年生芳香草本，莖直立，高30～80cm。薄荷揮發(fā)油有較強(qiáng)的揮發(fā)性，本實(shí)驗(yàn)采用水蒸汽蒸餾法，提取薄荷揮發(fā)油進(jìn)行相關(guān)研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑

薄荷、大腸桿菌及LB固體培養(yǎng)基。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

電子天平，恒溫水浴鍋，滅菌鍋，恒溫振蕩培養(yǎng)箱，無菌操作工作臺(tái)等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

本實(shí)驗(yàn)采用水蒸汽蒸餾法[1]提取薄荷揮發(fā)油，分別對不同蒸餾時(shí)間、不同加水量，分別對薄荷揮發(fā)油進(jìn)行提取。

工藝流程：材料→陰干→粉碎→過篩→水蒸汽蒸餾→油水混合物→高速離心→移液器抽取→計(jì)算提取率→感官評價(jià)[2]。

1.4 實(shí)驗(yàn)步驟

1.4.1 薄荷揮發(fā)油的提取 稱取50g薄荷，剪碎，研磨成泥狀物，然后安裝蒸餾裝置，安裝完畢后開始加熱?？刂普麴s的時(shí)間和速度，通常以每秒1～2滴為宜。當(dāng)流出液無明顯油珠時(shí)，澄清透明時(shí)，便可停止蒸餾。收集錐形瓶中的乳白色的乳濁液，然后用移液槍小心將薄荷揮發(fā)油取出移至另外的三角瓶中，并向其加入無水硫酸鈉，吸去油層中含有的水分，放置過夜。計(jì)算出油率。出油率按以下公式計(jì)算：

精油含量（mL/g）=測得精油量（mL）/供試品量（g），重復(fù)測定3次取其平均值。

1.4.2 濾紙片法對抑菌性質(zhì)的研究 將保存大腸桿菌菌種反復(fù)轉(zhuǎn)種2次備用。用無水乙醇與揮發(fā)油按照1：1的比例稀釋后，再用無菌水依次稀釋成濃度為7.5%、5%、2.5%、1.25%、0.625%，備用。分別用不同濃度的乙醇溶液為對照。將干凈的濾紙制成直徑大小為0.6cm的小圓紙片，滅菌后備用。然后制備菌懸液。在超凈臺(tái)里將轉(zhuǎn)接后生長良好的菌種用接種環(huán)將其接種于LB固體培養(yǎng)基中，放入37℃溫箱中，24小時(shí)后觀察是否有菌落生長。貼片：在超凈臺(tái)里將平板劃分6個(gè)或3區(qū)，用無菌水做對照組。每兩張濾紙片為一帖，貼在平板的指定位置，輕摁一下使其牢固，倒置放入30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后觀察結(jié)果。

數(shù)據(jù)分析：利用上述觀察結(jié)果參照菌絲生長法用直尺測量菌圈生長直徑以無菌水做對照進(jìn)行生長率的測定，計(jì)算公式：

生長率=（對照組菌落直徑－給藥組菌落直徑）/對照組菌落直徑×100%

抑制率=1-生長率

2 結(jié)果與分析

2.1 水蒸氣法提取精油出油率

2.1.1 不同蒸餾時(shí)間對揮發(fā)油提取結(jié)果的影響 分別取經(jīng)過陰干、粉碎、過40目篩后的樣品50g，加水300mL，蒸餾時(shí)間分別是：60min；90min；120min；150min；180min；210min和240min。觀察其結(jié)果并記錄，其結(jié)果如表1：

由表1可知，當(dāng)蒸餾時(shí)間為210分鐘時(shí)出油率達(dá)到最大。

2.1.2 不同加水量對揮發(fā)油的提取結(jié)果 分別取經(jīng)過陰干、粉碎、過40目篩后的樣品50g，加水量依次分別為200mL；250mL；300mL，蒸餾時(shí)間為210min，按提取工藝流程提取，進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。觀察結(jié)果并記錄，提取結(jié)果如表2：

由表2可知，當(dāng)投料量為50克時(shí)，加水量為5倍左右時(shí)出油率最高。

2.2不同稀釋度薄荷揮發(fā)油對大腸桿菌的抑菌活性量效關(guān)系

2.2.1取一定量的薄荷揮發(fā)油，分別稀釋成濃度為5%、2.5%、1.25%、0.625%、7.5%，進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，觀察抑菌圈直徑的大小并記錄結(jié)果，見表3：

表3 不同揮發(fā)油濃度的抑菌圈直徑

由表3可知抑菌圈的直徑隨揮發(fā)油濃度的增大而增大，在2.5%到5%之抑菌圈的直徑增大的很明顯，所以效果最好。

3 討論

薄荷油是溶解于芳香植物的花，葉，枝，干，根和果實(shí)細(xì)胞液內(nèi)通過蒸餾而得到的揮發(fā)油，通過上述實(shí)驗(yàn)表明，揮發(fā)油提取時(shí)，不同的外界因素，如提取過程中投料量、加水量、蒸餾時(shí)間等對揮發(fā)油的提取都有很大的影響，薄荷提取的最佳條件是加水量應(yīng)為投料量的5倍左右，蒸餾時(shí)間為210分鐘，這時(shí)出油量最多。從不同薄荷揮發(fā)油濃度對大腸桿菌的抑菌活性可看出，濃度越大，抑菌直徑越大，在濃度達(dá)到2.5%到5%之間，抑菌圈的半徑增大的很明顯，所以效果最好。

參考文獻(xiàn)

[1] 何堅(jiān)，孫寶國.香料化學(xué)與工藝學(xué)[M].化學(xué)工業(yè)出版社，

1995，54-55.

[2] 楊紅主編.中藥化學(xué)實(shí)用技術(shù).第2版.北京：科學(xué)工業(yè)出版社，2005，32-38.

作者簡介：王紅濤（1981-），女，吉林白山人，通化師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院助教，研究方向：分子生物學(xué)、蛋白質(zhì)與基因工程、環(huán)境微生物學(xué)研究。