摘 要：以蘿卜雄性不育系及其保持系為試材，測定了不同發(fā)育時期葉片、花和花蕾中脯氨酸、可溶性蛋白、可溶性糖、丙二醛、超氧陰離子以及SOD、POD、CAT的活性。結(jié)果表明，盛花期花蕾和花朵中，不育系脯氨酸、可溶性蛋白、可溶性糖的含量均低于保持系，丙二醛和超氧陰離子含量高于保持系，SOD、POD和CAT酶活性變化與蘿卜的雄性不育相關(guān)。

關(guān)鍵詞：蘿卜；雄性不育；生理生化指標；超氧陰離子；酶活性

中圖分類號：S631.101 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942（2012）12-0036-03

Physiological and Biochemical characterization of

Radish Male-Sterile Line and Its Maintainer Line

Han XiaoYu1， Wang ShuFen2*， Wei YouYing1， Liu XianXian2， Xu WenLing2， Fu WeiMin1

（1.College of Horticulture Science and Engineering，Shandong Agricultural University， Taian 271018，China；

2. Vegetable Research Institute，Shandong Academy of Agricultural Sciences/Shandong Branch of

State Vegetable Improvement Center， Jinan 250100， China）

Abstract With the male sterile line and its maintainer line as test materials， the content of free proline， soluble protein， soluble sugar， MDA and superoxide anion and the activity of SOD， POD and CAT were determined in leaves， flowers and buds at different developing stages. The results showed that in buds and flowers at full-bloom stage， the content of proline， soluble protein and soluble sugar in sterile line were lower than those in maintainer line， while the contents of MDA and superoxide anion were higher than those in maintainer line. The changes in activity of SOD， POD and CAT were correlated with the radish male sterility.

Key words Raphanus sativus L.； Male sterility； Physiological and biochemical indicators； Superoxide anion； Enzyme activity

蘿卜雜種優(yōu)勢明顯，利用一代雜交種F1作為生產(chǎn)用種可實現(xiàn)蘿卜的優(yōu)質(zhì)、抗病和高產(chǎn)[1]。為解決生產(chǎn)中雜交種純度不高的問題，用雄性不育系培育雜交種是解決人工去雄問題最為經(jīng)濟有效的途徑。為擴大蘿卜雄性不育系在生產(chǎn)上的應用范圍，本研究以蘿卜雄性不育新種質(zhì)為試材，對不同時期葉片及盛花期花蕾、花朵的相關(guān)生理生化指標進行測定，進一步探討蘿卜雄性不育的生理生化機制，為蘿卜雄性不育育種提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

11 試驗材料

山東省農(nóng)業(yè)科學院蔬菜研究所蘿卜課題組選育的100%雄性不育系及其保持系。田間試驗在山東省農(nóng)業(yè)科學院試驗基地進行，2010年12月2日浸種催芽，將萌動的種子置于4℃冰箱春化處理20天后定植，常規(guī)管理。

12 取樣

抽薹前、抽薹期、盛花期分別取不育系和保持系相同部位的功能葉，盛花期同時取花蕾和花朵，液氮速凍后置于-80℃保存。

13 測定方法

磺基水楊酸測定脯氨酸含量，氮藍四唑測定超氧化物歧化酶（SOD）活性，愈創(chuàng)木酚法測定POD活性，過氧化氫比色法測定CAT 活性，蒽酮法測定可溶性糖含量，考馬斯亮藍G-250染色法測定可溶性蛋白含量，TCA-TBA 法測定丙二醛含量，O-·2對羥胺氧化法測定O-·2產(chǎn)生速率[2]。

2 結(jié)果與分析

21 不同時期葉片、花蕾和花朵中的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量變化

從表1中可以看出，在抽薹開花過程中，不育系葉片中脯氨酸和可溶性糖含量始終高于相應的保持系，可溶性蛋白含量在抽薹前和抽薹期，不育系高于保持系，盛花期則低于保持系；盛花期花朵和花蕾中，不育系脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量均低于保持系。

22 不同時期葉片、花蕾和花朵中SOD、POD和CTA的活性變化

在抽薹前和抽薹期，不育系葉片中的SOD活性均低于相應保持系，在盛花期的花朵和花蕾中也低于相應保持系，而盛花期葉片中卻高于保持系；CAT活性在不育系和保持系葉片中差異不明顯，在盛花期花朵和花蕾中不育系的CAT活性顯著高于保持系；抽薹前及抽薹期葉片、盛花期花蕾中不育系POD活性顯著高于保持系，而盛花期的花朵和葉片中不育系POD活性低于保持系。

23 不同時期葉片、花蕾和花朵中的丙二醛和超氧陰離子自由基含量變化

抽薹前不育系葉片中MDA含量顯著低于保持系，但抽薹期和盛花期，葉片、花朵、花蕾中，不育系MDA的含量均高于相應保持系；抽薹前葉片中的超氧陰離子自由基含量高于保持系，抽薹后卻低于保持系，花朵和花蕾中超氧陰離子自由基明顯高于保持系。

3 討論與結(jié)論

脯氨酸、糖和可溶性蛋白質(zhì)是花藥發(fā)育過程中重要的營養(yǎng)物質(zhì)?？扇苄缘鞍踪|(zhì)中包含了各種酶原、酶分子和代謝調(diào)節(jié)物，在花藥發(fā)育過程中具有決定意義[3]；脯氨酸是蛋白質(zhì)組成部分，代謝過程中活躍的多種酶均含有脯氨酸[4]；糖是花藥發(fā)育過程中主要的營養(yǎng)物質(zhì)，其含量多少是影響小孢子育性的重要因素[5]。前人研究表明，雄性不育系花藥中脯氨酸缺乏或降低是非常普遍的[6，7]，不育系中蛋白質(zhì)含量及種類同其相應保持系有差異，可能是引起不育的原因之一[8]，小孢子的發(fā)生和正常發(fā)育伴隨著可溶性糖的不斷合成與積累[9]。本試驗結(jié)果表明，不育系花蕾和花朵中游離脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白質(zhì)含量均低于同時期保持系；不育系生殖發(fā)育過程中游離脯氨酸的缺乏、糖缺乏及可溶性蛋白質(zhì)的虧缺，引起物質(zhì)代謝強度變小而導致花藥正常代謝活動受阻發(fā)生敗育，這與安巖等（2008）[10]、鄒學校等（2004）[11]在胡蘿卜和辣椒上的研究結(jié)果一致。

SOD、CAT能清除植物代謝中產(chǎn)生的氧自由基，防止活性氧在植物體內(nèi)積累過多導致脂膜受損，POD可氧化自由的IAA、可催化H2O2作為氧化物的一種反應，可使IAA和H2O2含量降低。本試驗中，抽薹前及抽薹期蘿卜不育系葉片和盛花期的花蕾、花朵中的SOD活性均低于相應的保持系，不育系葉片中CAT活性低于保持系，使氧自由基含量增加，膜脂結(jié)構(gòu)受損加劇，花藥正常發(fā)育受阻，引起花藥敗育發(fā)生。盛花期葉片中SOD活性高于保持系，不育系花蕾和花朵中CAT活性高于保持系，可能是由于不育系細胞中活性氧和其它過氧化物過多使細胞產(chǎn)生保護反應的緣故。不育系花蕾中的POD活性過高，有可能大量分解和氧化IAA，造成雄性器官發(fā)育過程中生長素虧損，使物質(zhì)代謝紊亂、能量代謝虧損，影響到小孢子正常發(fā)育所必須的營養(yǎng)物質(zhì)和能量的合成，并阻礙物質(zhì)和能量的運輸，導致小孢子發(fā)育異常和敗育，引起雄性不育的發(fā)生。

不育系花蕾和花朵中MDA及超氧陰離子自由基含量顯著高于保持系，表明不育系膜脂在生殖生長過程中遭到破壞，膜脂過氧化，這也可能是導致不育的原因之一。這與在不結(jié)球白菜中的研究結(jié)果一致[13]。

綜上所述，在蘿卜生殖生長過程中，花中可溶性糖、可溶性蛋白和脯氨酸含量的下降，導致了小孢子發(fā)育所需營養(yǎng)物質(zhì)和能量的不足，SOD、POD、CAT活性異常造成自由基累積，對膜的不飽和脂肪酸的不飽和鍵攻擊，致使膜脂過氧化作用加劇，不利于呼吸作用和同化物的運輸，造成有害物質(zhì)的積累和所需營養(yǎng)的虧缺，阻礙了花蕾發(fā)育，導致了雄性不育。參 考 文 獻：

[1] 林 超，孫 萍，李興福，等利用細胞質(zhì)雄性不育系生產(chǎn)蘿卜一代雜交種[J]山東農(nóng)業(yè)科學，2007，4：5-8

[2] 李忠光，龔 明植物中超氧陰離子自由基測定方法的改進[J]云南植物研究，2005，27（2）：211-216

[3] Mascarenhas J P The biochemistry of angiosperm pollen development[J]The Botanical Review，1975，41（3）：259-314

[4] Siddhartha S，Sanjeet K，Singh J N Cytomorphological characterization of nuclear male sterile line of chillipepper （Capsicum annuum L）[J] Cytologia，2001，66（4）：365-371

[5] 劉齊元，朱肖文，趙 婷，等煙草雄性不育花蕾發(fā)育過程中幾種物質(zhì)含量的變化[J]江西農(nóng)業(yè)大學學報，2007，29（3）：336-340

[6] 鄧明華，文錦芬，鄒學校，等辣椒細胞質(zhì)雄性不育系的物質(zhì)代謝和過氧化物酶分析[J]云南農(nóng)業(yè)大學學報，2007，22（6）：791-794

[7] 苗景山，楊文才，劉彩霞，等蔥胞質(zhì)雄性不育花蕾生化物質(zhì)含量和能量代謝酶活性的動態(tài)變化特征[J]西北植物學報，2010，30（6）：1142-1148

[8] 劉海河，張彥萍蔬菜作物雄性不育研究進展[J]邯鄲農(nóng)業(yè)高等?？茖W校學報，1999，16（4）：25

[9] 張 琪，司龍亭，高 星蘿卜不育系與保持系的生理生化分析[J]湖南農(nóng)業(yè)科學，2008，4：91-93

[10] 安 巖，沈火林，喬志霞，等胡蘿卜雄性不育系和保持系生理生化特性的比較分析[J]中國瓜菜，2008，1：3-7

[11] 鄒學校，侯喜林，劉榮云，等辣椒細胞質(zhì)雄性不育基因?qū)Σ挥导半s交一代農(nóng)藝性狀和生化特性的影響[J]園藝學報，2004，31（6）：732-736

[12] 徐文玲，汪隆植，張傳坤種子老化對蘿卜早期生長生理生化的影響[J]山東農(nóng)業(yè)科學，2006，1：33-35

[13] 朱紅芳，朱玉英，侯瑞賢，等不結(jié)球白菜雄性不育新種質(zhì)不育系與保持系的生理生化分析[J]上海農(nóng)業(yè)學報，2011，4：28-31 山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學 2012，44（12）：39～40，44