[摘 要] 本文介紹了用酶試劑法對蔬菜中有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留進(jìn)行快速檢測的技術(shù)。

[關(guān)鍵詞] 酶試劑法 有機(jī)磷農(nóng)藥 農(nóng)藥殘留 快速檢測

我國土地遼闊，農(nóng)作物品種豐富，農(nóng)藥的生產(chǎn)和使用量較大，而農(nóng)藥對人體、動物和環(huán)境的危害很大。食用含有高毒、劇毒的農(nóng)藥殘留的食物會導(dǎo)致人、畜急性中毒事故，長期食用農(nóng)藥超標(biāo)的農(nóng)副產(chǎn)品，還可能引起慢性中毒，導(dǎo)致人體的神經(jīng)麻痹以及呼吸系統(tǒng)損傷等，嚴(yán)重的甚至影響下一代。因此，加強(qiáng)農(nóng)藥殘留監(jiān)測尤為重要。

傳統(tǒng)的農(nóng)藥殘留分析方法主要有氣相色譜法、液相色譜法、薄層色譜法及質(zhì)譜聯(lián)用等。這些方法測試靈敏、準(zhǔn)確度高，但預(yù)處理較為煩瑣，測試時間較長，且儀器昂貴，對儀器的使用條件和操作人員的要求也比較嚴(yán)格。而農(nóng)藥殘留快速檢測法可以把食品安全風(fēng)險監(jiān)測的關(guān)口提前，在蔬菜上市前快速判斷出其農(nóng)藥殘留是否超標(biāo)，這樣能防止許多農(nóng)藥中毒事件的發(fā)生，確保消費(fèi)者的飲食安全。

本文旨在研究用農(nóng)藥殘留快速分析儀（PR-203-6T）分析農(nóng)藥殘留，該快速檢測法的優(yōu)點(diǎn)是檢測時間短、操作簡單，可以連續(xù)使用，攜帶方便，而且檢測成本較低， 適合現(xiàn)場檢測，可推廣為普通檢測點(diǎn)、檢測站、農(nóng)貿(mào)市場、超市及果蔬精加工企業(yè)接受和使用。

一、試驗(yàn)原理

農(nóng)藥殘留快速分析儀采用酶抑制法，膽堿酯酶對底物分解反應(yīng)的催化能力與其活性成正相關(guān)。而蔬菜中的農(nóng)藥對膽堿酯酶的活性起抑制作用，抑制程度的大小與農(nóng)藥的殘留毒性成線性相關(guān)。因此，通過測試蔬菜樣品與膽堿酯酶作用前后催化反應(yīng)的速率變化，即可測試膽堿酯酶的活性變化，從而計算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷類農(nóng)藥的存在。

二、儀器與試劑

1.儀器

儀器為廈門市信儀科技有限公司生產(chǎn)的PR-203-6T 型農(nóng)藥殘留快速測試儀。此儀器有四個顯示參數(shù)： “透光度”、“吸光度”、“透射比”、和“吸收比”；工作模式有：“單通道” 、“八通道”、“自動”四種，可以根據(jù)檢測樣品的數(shù)量和類型自行選擇工作模式；顯色時間為1-9分鐘；測試數(shù)據(jù)可以傳輸?shù)健按蛴C(jī)”或“計算機(jī)”。

2.試劑

緩沖液：取一包緩沖劑，溶于500ml蒸餾水，攪拌、溶解、混合后放在室溫下保存。

酶溶液配制：取一瓶膽堿脂酶液，加磷酸緩沖液8ml，4℃保存。

顯色劑配制：取一瓶顯色劑，加磷酸緩沖液25m，4℃保存。

底物液配制：取一瓶底物，加磷酸緩沖液12.5ml，4℃保存。

三、樣品的提取

取蔬菜2～5g（菜葉類2g，塊莖類4g），剪成面積約1cm2大小，放入錐形瓶中，加入磷酸緩沖液10ml，震搖1～2min，然后將提取液到入取樣瓶，靜置2～3min，待測。

四、測試步驟

1.對照測試

在干凈的取樣瓶中依次取0.1ml酶液、2.5ml緩沖液 ，混勻，再加入0.1ml顯色液，搖勻后放于37℃靜置10～15min。在比色皿中加0.1ml底物溶液，再將上述培養(yǎng)后的反應(yīng)液倒入比色皿中，迅速放入檢測倉中第一檢測通道，按【對照】鍵進(jìn)行對照測試，一般1～3min。

注意：試樣放入試樣室前應(yīng)按【100%T/ABSO】鍵使透光度值為100.0或吸光度值為0.000。

2.樣品測試

在干凈的取樣瓶中依次取0.1ml酶液、2.5ml緩沖液 ，混勻，再加入0.1ml顯色液，搖勻后放于37℃靜置10～15min。在干凈的比色皿中加0.1ml底物溶液，再將上述反應(yīng)液倒入比色皿中，迅速放入檢測通道，按【樣品】鍵開始檢測，一般1～3min。

注意：試樣放入試樣室前應(yīng)按【100%T/ABSO】鍵使透光度值為100.0或吸光度值為0.000。

3.測試結(jié)果的判斷

若被測樣品的酶抑制率超過50%，則表明被測樣品中農(nóng)藥殘留可能超過安全的界定標(biāo)準(zhǔn)，需用氣相色譜等儀器分析法作進(jìn)一步的確認(rèn)。陽性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗(yàn)2 次以上。

五、討論

1.適宜的反應(yīng)溫度

酶催化顯色反應(yīng)吸光度與溫度呈正比，實(shí)驗(yàn)證明，在35℃左右，顯色反應(yīng)達(dá)到最佳。

2.適宜的酸度

隨PH值的增加，反應(yīng)速率增大，PH值超過7.5后反應(yīng)速率變化減弱，實(shí)驗(yàn)證明，PH值為8時反應(yīng)速率最大。

3.合適的搖振時間

充分搖振有利于酶催化動力學(xué)反應(yīng)的進(jìn)行，若搖振時間太短，則初始反應(yīng)速率小，檢測靈敏度較低，若搖振時間過長，則初始吸光度較大，所以一般振搖20～30秒。

4.正確的添加順序

酶與待測樣品中的農(nóng)藥殘留量或底物的反應(yīng)為可逆反應(yīng)，由于酶與含有的農(nóng)藥反應(yīng)速率比酶與底物的反應(yīng)速率低得多，所以試劑加入順序?qū)?shí)驗(yàn)影響較大，先加入酶液，使酶與含有的農(nóng)藥預(yù)反應(yīng)，然后加入顯色劑，最后加入底物，能達(dá)到最佳效果。

5.排除假陽性的干擾

蔥、蒜、蘿卜和一些葉綠素含量較高的蔬菜中，含有的植物次生物質(zhì)對酶的活性產(chǎn)生影響，容易產(chǎn)生假陽性。樣品提取時緩沖液的用量要是樣品重量數(shù)的5 倍。對于蔥，先去掉須根，再把其根部剪掉，再作樣品提取。另外，檢測前，將儀器開機(jī)預(yù)熱半個小時，可以提高檢測過程的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，減少假陽性的出現(xiàn)。

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