【摘要】本論文研究是以PDA培養(yǎng)基為研究對象，采用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)食用真菌平菇一級菌種。本論文初探了幾種不同氮素如：檸檬酸鐵銨和草酸銨在不同的濃度條件下，對平菇一級菌種生長狀況的不同影響。在溫度28℃、濕度60%的條件下培養(yǎng)，實驗結(jié)果顯示：平菇最適宜氮素為0.4%的條件下生長最好。

【關(guān)鍵詞】平菇；施氮素；微生物發(fā)酵；影響

氮素是一切植物必需的大量營養(yǎng)元素之一，它是生物生長的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，對植株的器官建造、物質(zhì)代謝、生化過程、果實產(chǎn)量及品質(zhì)的形成等都有不可替代的作用。而且，氮是構(gòu)成細胞原生質(zhì)、核酸、磷脂、激素、維生素、生物堿及酶等的重要組分，因此充足的氮是細胞分裂的必要條件。

1.實驗內(nèi)容

1.1供試材料

1.1.1供試菌株

試驗選用的品種—平菇-89為白城師范學(xué)院生物系微生物學(xué)實驗室保藏菌種。

1.1.2培養(yǎng)基

斜面培養(yǎng)基、馬鈴薯綜合培養(yǎng)基、液體菌種培養(yǎng)基、改良馬鈴薯綜合培養(yǎng)基。自然PH 值。分裝于：70個試管，每個試管加入2/5的培養(yǎng)基為最佳。

1.2試驗儀器與藥品

高壓蒸汽滅菌鍋，烘箱，鑷子，刀片，電熱套，電子稱，小燒杯，玻璃棒，量筒，超凈工作臺，酒精燈，精密試紙，牛皮紙，標簽筆，1N NaOH，1N HCl，蔗糖，瓊脂，紗布，95%醫(yī)用酒精，蒸餾水等。

1.3主要儀器的使用方法

1.3.1高壓滅菌鍋的使用方法

關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力表上升到0.05MPa時，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。對于培養(yǎng)基待壓力表上升達到0.105MPa（1210C）時開始計時15-30min；對高壓滅菌后不變質(zhì)的物品，待壓力表上升到0.14MPa（1260C）時開始計時30min；對于一些布制品，也可高壓滅菌。

1.3.2恒溫箱的使用方法

接通電源，按說明書設(shè)置所需溫度，將溫度計放置烘箱內(nèi)中心位置，測定實際溫度與所設(shè)溫度是否有偏差，如有按說明書進行校正或自行校正。

1.3.3超凈工作臺的使用方法

在接種的前20min，打開超凈工作臺的風機以及臺上的紫外燈；接種前10min時，關(guān)閉紫外燈；接種時打開照明燈；接種完畢后，要清理超凈工作臺，用紫外燈滅菌30min。

1.4試驗方法

1.4.1一級種培養(yǎng)基的制備及滅菌

（1）一級種培養(yǎng)基的制備：

用清水將馬鈴薯的表面洗凈，去皮后用電子稱稱取200g馬鈴薯，將其切成細條。事先用電熱套對裝有水的燒杯加熱，一段時間后，把馬鈴薯條放入已經(jīng)沸騰的燒杯中，加熱30分鐘，同時要用玻璃棒不停地攪拌。再用濾布將其過濾，把濾液裝入量筒中并定容到1000ml。把液體倒入燒杯中加熱，將事先用電子稱稱好的20g蔗糖和20g瓊脂加入燒杯中并不停地攪拌以避免糊底。待瓊脂完全融化變得澄清時分裝于試管中：每個試管加入2/5的培養(yǎng)基，再將棉塞塞入試管封閉。塞入的棉塞占總棉塞的2/3。

（2）一級種培養(yǎng)基的滅菌：

將培養(yǎng)基放入高壓滅菌鍋內(nèi)，關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力表上升到0.05MPa時，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。待壓力表上升達到0.105MPa（1210C）時開始計時30min。待滅菌結(jié)束將培養(yǎng)基取出，斜面處理：使培養(yǎng)基斜面占試管的3/4。

1.4.2接種

在接種的前20min，打開超凈工作臺的風機以及臺上的紫外燈；接種前10min時，關(guān)閉紫外燈；接種時打開照明燈。用酒精棉球擦手，將接種環(huán)在酒精燈上灼燒，取一級菌種放入斜面培養(yǎng)基中，再用棉塞封閉試管，以下雷同。接種完畢后，要清理超凈工作臺，用紫外燈滅菌30min。接種后的試管放入培養(yǎng)箱中，將溫度調(diào)到280C進行培養(yǎng)。每天觀察一次，挑選出污染試管，無污染的試管待下步試驗使用。

1.4.3不同濃度無機鹽的制備及滅菌

用精密天平分別稱取檸檬酸鐵銨0.025g、0.05g、0.2g、0.4g、0.5g；草酸銨0.025g、0.05g、0.2g、0.4g、0.5g，配制成50 ml的溶液，裝入十個三角瓶中進行滅菌。

1.4.4無菌室接種

將已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基和無菌無機鹽分裝入30個培養(yǎng)皿中，具體是先把培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，再將不同梯度的無機鹽倒入培養(yǎng)皿中，每一梯度有三個重復(fù)樣品，并標記。待冷卻后進行接種。注意同一梯度的培養(yǎng)皿所接菌種的量要相同。接種后放入280C的培養(yǎng)箱中進行觀察。

1.5培養(yǎng)與觀察

放入培養(yǎng)箱后，每天觀察一次，在第二天待菌種復(fù)活有長勢后用記號筆標記下生長起點，一周后，再次標記生長終點，并測量間距。

2.結(jié)果與分析

實驗結(jié)果：

表1 不同梯度氮素對菌絲生長的影響

通過對菌種長勢的觀察及表1的數(shù)據(jù)顯示：

（1）不同梯度檸檬酸鐵銨對平菇一級種菌絲生長的影響不同，濃度為0.4%的檸檬酸鐵銨的菌種長勢子最好。在0.05%-0.4%范圍內(nèi)隨著濃度的增加菌種長勢加快，濃度達到0.4%的時候長勢最好，但是隨著濃度的增加（0.4%-1%）平菇一級種菌絲生長呈下降趨勢。

（2）不同梯度的草酸銨對平菇一級種菌絲生長的影響，在0.05%-0.4%范圍內(nèi)隨著濃度的增加菌種長勢加快，濃度達到0.4%的時候長勢最好，但是隨著濃度的增加（0.4%-1%）平菇一級種菌絲生長呈下降趨勢，生長最好的是濃度為0.4%的草酸銨。

（3）從檸檬酸鐵銨與草酸銨對平菇一級種菌絲生長的影響來看，檸檬酸鐵銨對平菇一級種菌絲生長更顯著，可能與鐵離子的協(xié)同作用有關(guān)。

3.結(jié)論

本實驗研究結(jié)果表明，不同梯度檸檬酸鐵銨和草酸銨對菌種生長的影響不同，但是兩組實驗數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，檸檬酸鐵銨和草酸銨都是濃度為0.4%的時候使菌絲的長勢最好，說明0.4%的銨鹽對平菇一級種菌絲的生長最為適宜；從兩種鹽比較來看檸檬酸銨對菌絲生長的促進作用要比草酸銨好。

【參考文獻】

[1]李志香.食用菌液體菌種培養(yǎng)技術(shù)研究[J].山東教育學(xué)院學(xué)報，2003：98～99.

[2]楊穎.微生物發(fā)酵工程原理及應(yīng)用[J].銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版），2008，6（6）：27～29.

[3]樂超垠，邵偉.我國食用菌液體發(fā)酵進展及其綜合利用[J].湖北三峽學(xué)院學(xué)報，1997，19（3）：97～101.

[4]郭家雁.不同培養(yǎng)料碳氮比對霉菌生育影響的研究[J].太原科技，2008：84～85.

[5]張愛民.植物如何利用氮元素[J].中學(xué)生物學(xué)，2009，25（1）：6～7.

[6]宋安東，劉杰，王明道.平菇不同栽培方式試驗研究[J].河南科學(xué)，2009，27（2）：187～189.

[7]李霞，楊紅.食用菌在功能食品中的優(yōu)勢[J].吉林師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2004：70～71.

[8]邢燕，楊曉彤，楊慶堯.靈芝液體深層發(fā)酵研究進展[J].工業(yè)微生物，2007，37（3）：63～67.

[9]游明樂.中國食（藥）用真菌發(fā)酵工程研究進展[J].微生物學(xué)通報，2007，34（2）：327～331.

[10]朱圣潮，張珊珊，唐建軍.氮素增加條件下叢枝菌根真菌對陸稻和無芒稗相互作用的調(diào)節(jié)[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報，2007，18（10）：2338～2342.