邱 鋼 朱 暢 劉小春

1.深圳市龍崗區(qū)橫崗人民醫(yī)院普外科，廣東深圳 518100；2.深圳市人民醫(yī)院胃腸外科，廣東深圳 518020；3.深圳市龍崗區(qū)橫崗人民醫(yī)院胃鏡室，廣東深圳 518100

胃癌是世界上比較常見的惡性腫瘤之一，它的發(fā)病率在消化道腫瘤中是最高的。胃癌發(fā)生的機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，基因突變與基因沉默在其中起到了相當(dāng)重要的作用。EZH2是果蠅基因增強(qiáng)子的人類同源物，同時也是PcG基因家族的重要成員之一［1］。為此，筆者專門探討單核苷酸多態(tài)性與胃癌易感性的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2009年5月～2012年5月筆者所在醫(yī)院收治的242例胃癌患者血樣，在手術(shù)前均未接受化療與放療，其中男142例，女100例，平均年齡（56.0±15.2）歲。344例正常血樣對照組均來自同一地區(qū)的健康人群，按照年齡（P=0.132）與性別（P=0.742）來匹配，男224例，女120例，平均年齡（50±12）歲。兩組年齡與性別比例比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

對兩組對象在空腹的條件下采取靜脈抽血，血樣分別采集5mL，通過TAINGEN公司所提供的DNA提取試劑盒（DP304-03）進(jìn)行提取，保存于Buffer TE中，同時確保純化核酸OD260/OD280的值為1.7～1.9，并且基因組的DNA濃度在100～300ng/μL范圍內(nèi)，注射EDTA抗凝劑，存儲于-20～-80℃的環(huán)境下，直到測序進(jìn)行。然后對DNA的濃度進(jìn)行標(biāo)化，兩組患者采取EZH2 rs734004、rs734005、rs2072407、rs6464926、rs12670401多態(tài)性測序，運(yùn)用組織芯片技術(shù)與免疫組化檢測240例同一來源胃癌組織與30例正常胃黏膜EZH2蛋白表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo)

比較胃癌患者EZH2中rs12670401基因型CC與正常血樣中rs6464926基因型TT，胃癌患者中的EZH2包含的雜合基因型rs2072407TC、rs734004TC、rs734004CG與正常血液中的雜合基因型rs2072407TC、rs734004TC、rs734004CG兩者之間的比例變化，并觀察胃癌發(fā)生率與風(fēng)險。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用Plink vl1.07對EZH2基因5個SNPs進(jìn)行MAF、基因HWE平衡和關(guān)聯(lián)性分析，連鎖不平衡與單倍型分析采用Haploview 4.2，證明單核甘酸多態(tài)性與胃癌易感性的相關(guān)性。

2 結(jié)果

檢測發(fā)現(xiàn)EZH2中rs12670401基因型CC與rs6464926基因型TT在胃癌患者中所占的比例較高，EZH2與rs2072404比例增加會嚴(yán)重影響胃癌發(fā)生率與風(fēng)險（P=0.007，OR=1.785，95％CI=1.171～2.724；P=0.012，OR=1.720，95％CI=1.121～2.623）。胃癌患者中的EZH2包含的雜合基因型rs2072407TC、rs734004TC、rs734004CG所占比例低于正常血液對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。所占比例減少時可降低患者胃癌發(fā)生率與風(fēng)險。（P=0.032，OR=0.712，95％CI=0.520～0.975；P=0.033，OR=0.708，95％CI=0.517～0.971；P=0.035，OR=0.712，95％CI=0.517～0.977）。應(yīng)用連鎖不平衡分析LD進(jìn)一步將上述觀察進(jìn)行證實。胃癌不同組織學(xué)類型與不同臨床參數(shù)間的EZH2免疫組化染色強(qiáng)度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 EZH2基因單核苷酸多態(tài)性與胃癌風(fēng)險關(guān)系

3 討論

胃癌的發(fā)病率極高，是世界上發(fā)病率最高的癌癥之一，同時，胃癌的發(fā)生也是通過多因素，多步驟才形成的，是多種因素綜合作用的結(jié)果。血小板反應(yīng)素，即凝血酶敏感蛋白，主要是由一個分子量為450kD的同源三聚體基質(zhì)糖蛋白組成的，它的分子結(jié)構(gòu)存在多種功能區(qū)，能夠自行調(diào)節(jié)不同的細(xì)胞粘附、遷移與增殖等［2-3］。單核苷酸多態(tài)性是人類基因組中最常見的遺傳多態(tài)性，是一個可以較好反映個體遺傳差異的分子標(biāo)記，在人類基因組中密度最大、發(fā)生頻率較高［4-7］。研究調(diào)查顯示，THBS-1直接或者間接的參與到了血管生成的每個環(huán)節(jié)之中，可以對內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移造成直接抑制作用，同時也可以對其產(chǎn)生促進(jìn)的作用。許多研究都表明，腫瘤中的THBS-1具有多結(jié)構(gòu)域形態(tài)，可以跟數(shù)種受體或者是配體進(jìn)行結(jié)合。同時，THBS-1mRNA在胃癌組織中的表達(dá)水平是正常組織中的1.5倍，并且mRNA表現(xiàn)水平與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移是密切相關(guān)的。因此，以上研究可以證實單核苷酸多態(tài)性與胃癌易感性是存在必然的聯(lián)系，能夠為胃癌患者的臨床診斷、治療以及預(yù)后評價提供眾多的理論基礎(chǔ)與實驗依據(jù)。

本研究通過檢測發(fā)現(xiàn)EZH2中rs12670401基因型CC與rs6464926基因型TT在胃癌患者中所占的比例較高，EZH2與rs2072404比例增加也會嚴(yán)重影響胃癌的發(fā)生率與風(fēng)險（P=0.007，OR=1.785，95％CI=1.171～2.724；P=0.012，OR=1.720，95％CI=1.121～2.623）。胃癌患者中的EZH2包含的雜合基因rs2072407TC、rs734004TC、rs734004CG所占比例低于正常血液對照組，所占比例減少可降低患者胃癌發(fā)生風(fēng)險。（P=0.032，OR=0.712，95％CI=0.520～0.975；P=0.033，OR=0.708，95％CI=0.517～0.971；P=0.035，OR=0.712，95％CI=0.517～0.977）。應(yīng)用連鎖不平衡分析LD進(jìn)一步將上述觀察進(jìn)行證實。胃癌不同組織學(xué)類型與不同臨床參數(shù)間的EZH2免疫組化染色強(qiáng)度差異無統(tǒng)計學(xué)意義。證明單核甘酸多態(tài)性與胃癌易感性具有相關(guān)性。

［1］周淵，吳強(qiáng)，劉弋，等.EZH2基因單核苷酸多態(tài)性對中國漢族人群散發(fā)性胃癌易感性的影響［J］.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2011，27（7）：717-721.

［2］洪斌斌.血小板反應(yīng)素-1、2基因單核苷酸多態(tài)性與胃癌遺傳易感性的關(guān)系［D］.福建醫(yī)科大學(xué)，2010：10-20.

［3］Choi JH，Song YS，Yoon JS，et al.Enhangcer of zeste homolog 2 expression is associated with tumor cell proliferation and metastasis in gastric cancer［J］.APMIS，2010，118（3）：196-202.

［4］孫靜哲，胡妮婭，易金萍，等.EGFR基因rs763317多態(tài)性與胃癌遺傳易感的相關(guān)性研究［J］.中華腫瘤防治雜志，2010，17（10）：724-727.

［5］嚴(yán)家芹，李峰，陳壬寅，等.EGFR基因單核苷酸多態(tài)性與胃癌的相關(guān)性［J］.山東醫(yī)藥，2010，50（7）：18-20.

［6］張麗媛.MMP-2和TIMP-2及其單核苷酸多態(tài)性與胃癌的關(guān)系［D］.福建醫(yī)科大學(xué)，2011：6-15.

［7］宋朝霞，劉冰，趙佳，等.抑癌基因PTEN單核苷酸多態(tài)性與胃癌的關(guān)聯(lián)性分析［J］.吉林大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2009，35（4）：694-697.