吳緒軍, 宗 慰, 孫永梅, 胡新天, 馬原野, 王建紅,*

(1. 中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所, 云南 昆明 650223; 2. 中國(guó)科學(xué)院研究生院, 北京 100049)

恒河獼猴嗎啡成癮模型的初步建立

吳緒軍1,2, 宗 慰1,2, 孫永梅1,2, 胡新天1, 馬原野1, 王建紅1,*

(1.中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所,云南 昆明650223; 2.中國(guó)科學(xué)院研究生院,北京100049)

嗎啡成癮的非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物恒河獼猴(Macaca mulatta)模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 獼猴可建立嗎啡條件化位置偏好(conditioned place preference, CPP), 且其與嗎啡線索相關(guān)的記憶可持續(xù)(36.3±1.3)月。該研究可以為藥物成癮研究提供有效的非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物行為模型。

嗎啡; 獼猴; 條件化位置偏好

藥物成癮是當(dāng)今社會(huì)的一大危害, 對(duì)成癮藥物戒斷的研究已成為當(dāng)務(wù)之急。以往藥物成癮研究多采用嚙齒類動(dòng)物模型。一旦持續(xù)性給予動(dòng)物嗎啡、可卡因等成癮藥物, 動(dòng)物將對(duì)藥物產(chǎn)生依賴性; 而一旦停藥, 動(dòng)物將出現(xiàn)戒斷癥狀, 從而迫使動(dòng)物尋求藥物。利用這一模式, 可將動(dòng)物對(duì)藥物的尋求過(guò)程與相關(guān)環(huán)境線索聯(lián)系起來(lái), 以檢測(cè)動(dòng)物對(duì)成癮藥物的渴求程度。

以嚙齒類動(dòng)物為研究對(duì)象，常采用條件化位置偏好(conditioned place preference, CPP)檢測(cè)法, 該方法利用動(dòng)物對(duì)與藥物相關(guān)信息的記憶, 可有效反映動(dòng)物對(duì)藥物的成癮及渴求狀態(tài)(Hnasko et al, 2005; Rice et al, 2002; Vindenes et al, 2006; Marquez et al, 2009)。

利用小鼠CPP模式, 我們發(fā)現(xiàn), 阻斷乙酰膽堿系統(tǒng), 或阻斷大腦蛋白質(zhì)的合成, 以及電休克、戊四氮致癲癇等干預(yù), 都不能損傷與成癮相關(guān)的學(xué)習(xí)記憶(Tan et al, 2007; Zhang et al, 2008)。結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)室的研究結(jié)果, 我們認(rèn)為藥物成癮是一種異常、病態(tài)的學(xué)習(xí)過(guò)程, 建立有效的藥物成癮動(dòng)物模型,將有助于為人類藥物成癮的戒斷尋找新的策略。

藥物成癮研究常采用嚙齒類動(dòng)物模型, 有關(guān)非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型的數(shù)據(jù)非常有限。非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的神經(jīng)生物學(xué)研究是本實(shí)驗(yàn)室及中國(guó)科學(xué)院和云南省動(dòng)物模型與人類疾病機(jī)理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的優(yōu)勢(shì), 因而, 我們以恒河獼猴(Macaca mulatta)為研究對(duì)象,采用CPP模式, 探討這種非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物對(duì)嗎啡成癮、戒斷及相關(guān)線索的學(xué)習(xí)記憶, 以期為研究藥物成癮提供新的動(dòng)物模型。

1 恒河獼猴嗎啡成癮及CPP相關(guān)學(xué)習(xí)記憶

Foltin & Evans(2001)采用兩箱裝置, 發(fā)現(xiàn)獼猴可以對(duì)海洛因煙霧產(chǎn)生位置偏好。在這一模型中,獼猴只能在兩個(gè)箱子之間選擇, 缺乏提供獼猴思考和抉擇的中性過(guò)渡箱。因而, 我們建立了適用于獼猴的三箱CPP模型。該標(biāo)準(zhǔn)三箱設(shè)備具封閉通道,各通道具可開(kāi)、關(guān)的門(mén)。獼猴在三箱設(shè)備內(nèi)的活動(dòng)通過(guò)攝像頭進(jìn)行監(jiān)控和錄像。采用視頻采集軟件記錄及人工分析的方法, 可評(píng)價(jià)動(dòng)物穿梭三箱的次數(shù)、時(shí)間, 及在各個(gè)箱內(nèi)的活動(dòng)情況(圖1)。

圖1 獼猴CPP模型Fig.1 Monkey model of CPP

1.1 實(shí)驗(yàn)步驟

適應(yīng)：條件化之前1～3 d, 使獼猴充分適應(yīng)3個(gè)箱體50 min, 記錄并統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。將獼猴不偏愛(ài)的箱體, 設(shè)為與嗎啡相關(guān)的陽(yáng)性箱, 即注射嗎啡后獼猴停留的箱體; 而將獼猴自然偏愛(ài)箱設(shè)為藥物陰性箱, 即注射生理鹽水后獼猴停留的箱體。

CPP條件化建立(共12 d)：給獼猴肌肉注射嗎啡(遞增式劑量：1.5 mg/kg體重×1 d、3.0 mg/kg體重×1 d、4.5 mg/kg體重×4 d), 每次注射完畢, 使獼猴在陽(yáng)性箱內(nèi)停留50 min, 促其建立與嗎啡相關(guān)的記憶; 每次嗎啡注射24 h后, 給獼猴注射相同體積生理鹽水, 之后使獼猴在陰性箱內(nèi)停留50 min,使其建立與生理鹽水相關(guān)的記憶。

CPP條件化檢測(cè)：條件化之后24 h、(15.8±0.8)月和(36.3±1.3)月, 進(jìn)行CPP檢測(cè), 各連續(xù)2 d。此時(shí), 3個(gè)箱體之間的門(mén)均敞開(kāi), 獼猴可自由選擇停留的箱子。記錄獼猴第一次選擇的箱體, 及0～5、5～20和20～30 min內(nèi)獼猴在三個(gè)箱子里的停留時(shí)間和訪問(wèn)次數(shù), 以及行走距離。

1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

6只獼猴均在短期內(nèi)建立嗎啡CPP,且無(wú)藥效以外的不良反應(yīng)。此外, 在間隔15.8(6只獼猴)和36.3(3只獼猴)個(gè)月之后, 獼猴仍保存對(duì)嗎啡相關(guān)線索的記憶, 表現(xiàn)為在陽(yáng)性箱內(nèi)停留時(shí)間、訪問(wèn)次數(shù)和行走距離均明顯高于陰性箱內(nèi)的對(duì)應(yīng)參數(shù)。說(shuō)明嗎啡相關(guān)線索的記憶能夠在獼猴上快速建立并長(zhǎng)期維持。

有趣的是, 隨著檢測(cè)時(shí)間間隔的延長(zhǎng), 獼猴在中間過(guò)渡箱內(nèi)停留的時(shí)間增長(zhǎng), 推測(cè)獼猴在條件化24 h之后, 對(duì)嗎啡的渴求很強(qiáng), 因而進(jìn)入陽(yáng)性箱的時(shí)間和次數(shù)增高。然而, 一段時(shí)間間隔之后再檢測(cè),獼猴因?yàn)闊o(wú)法在陽(yáng)性箱內(nèi)得到嗎啡, 為了避免渴求而不能得到藥物的厭惡情緒, 故選擇在中間的中性箱停留。但是, 與其他兩個(gè)箱體相比, 獼猴仍然偏愛(ài)停留在陽(yáng)性箱。

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明, 在6次遞增劑量嗎啡注射之后, 獼猴對(duì)與嗎啡相關(guān)線索的記憶持續(xù)時(shí)間至少可達(dá)(36.3±1.3)月。該模型具備良好的操作性和穩(wěn)定性, 可為研究藥物成癮的機(jī)制和戒斷策略提供可靠且更接近人類的動(dòng)物模型。

致謝：感謝中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所研究生李傳玉、魏景寬、姜慧慧、劉賜融、于程洋、馬驊等對(duì)實(shí)驗(yàn)的貢獻(xiàn)。

Foltin RW, Evans SM. 2001. Location preference related to smoked heroin self-administration by rhesus monkeys[J]. Psychopharmacology：Berl,155: 419-425.

Hnasko TS, Sotak BN, Palmiter RD. 2005. Morphine reward in dopamine-deficient mice[J]. Nature,438: 854-857.

Marquez P, Bebawy D, Lelievre V, Coute AC, Evans CJ, Waschek JA, Lutfy K. 2009. The role of endogenous PACAP in motor stimulation andconditioned place preference induced by morphine in mice[J]. Psychopharmacology: Berl,204: 457-463.

Rice OV, Gordon N, Gifford AN. 2002. Conditioned place preference to morphine in cannabinoid CB1 receptor knockout mice[J]. Brain Res,945: 135-138.

Tan H, Liu N, Wilson FA, Ma Y. 2007. Effects of scopolamine on morphine-induced conditioned place preference in mice[J]. Addict Biol,12: 463-469.

Vindenes V, Handal M, Ripel A, Boix F, Morland J. 2006. Conditioned place preference induced by morphine and morphine-6-glucuronide in mice[J]. Pharmacol Biochem Behav ,85: 292-297.

Wang JH, Wu XJ, Li CY, Wei JK, Jiang HH, Liu CR, Yu CY, Carlson S, Hu XT, Duan W, Ma YY. 2011. Effect of morphine on conditioned placepreference in rhesus monkeys[J]. Addict Biol, doi: 0.1111/j.1369-1600.2010.00289.x. (Online version).

Zhang J, Tan H, Niu HC, Wang JH, Tang XD, Sanford LD, Ma YY. 2008. Pentylenetetrazole-induced status epilepticus following training does not impair expression of morphine-induced conditioned place preference[J]. Addict Biol,14:174-184.

Morphine addiction in non-human primates using rhesus monkeys

WU Xu-Jun1,2, ZONG Wei1,2, SUN Yong-Mei1,2,HU Xin-Tian1, MA Yuan-Ye1, WANG Jian-Hong1,*

(1.Kunming Institute of Zoology, the Chinese Academy of Sciences, Kunming 650223, China; 2.Graduate School of the Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China)

We showed that rhesus monkeys (Macaca mulatta) can develop a morphine dependence. Rhesus monkeys successfully established a conditioned place preference (CPP) induced by morphine treatment and this preference lasted for at least (36.3±1.3) months. This animal model may be useful for research into addiction in humans.

Morphine;Macaca mulatta; Conditioned place preference

Q959.832; Q959.848; R-331

A

0254-5853-(2012)01-0089-03

10.3724/SP.J.1141.2012.01089

2011-12-19；接受日期：2012-01-05

973項(xiàng)目(2011CB707800)和中國(guó)科學(xué)院知識(shí)創(chuàng)新工程重要方向項(xiàng)目(KSCX2-EW-J-23)?

(Corresponding author)，E-mail: wangjh@mail.kiz.ac.cn